Исследование активности ядрышковых организаторов в клетках эпителиальных опухолей толстой кишки с использованием компьютерного анализа изображений

Определение площади ядрышковых организаторов с использованием компьютерных программ анализа изображений является объективным и быстрым методом диагностического исследования.

Целью исследования явилось изучение активности ядрышковых организаторов с использованием компьютерного анализа изображений в эпителиальных опухолях толстой кишки.

Исследована 51 аденома ректосигмоидного отдела толстой кишки, полученная после проведения эндоскопической полипэктомии. В тубулярных (26) и тубулярно-ворсинчатых (25) аденомах легкая, умеренная и выраженная дисплазия встречалась соответственно в 14; 8; 4 и 7; 13; 5 случаях. Средний возраст пациентов с аденомой составил 59,2 года (25–75 лет), 24 женщины и 27 мужчин. Также исследованы биопсии 5 высокодифференцированных аденокарцином (средний возраст пациентов 58,2 года, 41–70 лет) и 10 случаев неизмененной слизистой оболочки толстой кишки (средний возраст пациентов 55,5 года, 45–79 лет). Кусочки ткани фиксировали в 10 % нейтральном за-буференном формалине. После стандартной депарафинизации срезы толщиной 2 мкм автоклавировали при 1200С 20 мин в 0,01 М цитратном буфере (рН=6,0). После охлаждения помещали в 2н. муравьиную кислоту на 12 мин при комнатной температуре. Окрашивали по одностадийной методике (Ploton D. et al., 1986), в течение 16 мин при 370С. В каждом случае с 10 полей зрения микроскопа при увеличении х1000 (200 клеток) получали цифровые изображения. Изображения анализировали в программе Leica QWin 2.0, автоматически определяя площадь гранул серебра в ядрах эпителиальных клеток. Статистический анализ полученных результатов осуществляли в программе STATISTICA 6.0, данные представляли в виде медианы и интерквартильного интервала, использовали непараметрические методы: U-тест Манна–Уитни и коэффициент корреляции Спирмена (r).

В нижних 2/3 крипт слизистой оболочки площадь гранул серебра в ядрах клеток составила 2,26 (2,19–2,55) мкм2.

В аденоме толстой кишки площадь гранул серебра составила 3,49 (3,17–4,15) мкм2: тубулярного типа строения – 3,42 (2,98–4,07) мкм2, тубулярно-ворсинчатого – 3,73 (3,32– 4,48) мкм2. В очагах легкой, умеренной и выраженной дисплазии аденомы площадь гранул серебра равнялась – 3,06 (2,64–3,42) мкм2; 4,04 (3,39–4,25) мкм2 и 4,35 (3,76–4,93) мкм2 соответственно, а в высокодифференцированной аденокарциноме – 3,79 (3,68–4,54) мкм2. Определены статистически значимые отличия площади гранул серебра в ядрах клеток между нижними 2/3 крипт неизмененной слизистой оболочки и легкой дисплазией (р=0,001), легкой и умеренной (р<0,001), умеренной и выраженной дисплазией (р=0,03). Отсутствовали статистически значимые отличия между выраженной дисплазией и высокодифференцированной аденокарциномой (р=0,18), а также между аденомой тубулярного и тубулярно-ворсинчатого типа строения (р=0,19). Площадь гранул серебра в ядрах эпителиальных клеток аденомы толстой кишки имела статистически значимую корреляцию с выраженностью дисплазии эпителия (r=0,72; р<0,001), с гистологическим типом строения корреляция не имела статистической значимости (r=0,19, p>0,05).

В ряду неизмененная слизистая оболочка (нижние 2/3 крипт) – легкая – умеренная – выраженная дисплазия происходит статистически значимое увеличение площади ядрышковых организаторов. Определение площади ядрышковых организаторов с использованием компьютерного анализа изображений может служить дополнительным, объективным критерием при дифференциальной диагностике дисплазии в аденоме толстой кишки.