Исследование специфической активности новой противоаллергической мази из суммы флавоноидов при контактном аллергическом дерматите

Атопический дерматит является одним из наиболее распространенных заболеваний в структуре дерматологической патологии, занимая в ней, по различным данным от 20-40%, причем это цифра неуклонно растет [1, 3, 8]. Современная медицина использует большой арсенал синтетический лекарственных средств в виде мазей при лечении аллергического дерматита. Одной из причин прогрессивного роста заболеваемости дерматозами является широкое использование разнообразных химических веществ в быту и на производстве. Лекарственные препараты растительного происхождения широко используются в медицинской практике для лечения различных заболеваний кожи и слизистых оболочек. Но имеется очень мало препаратов растительного происхождения применяемых для лечения аллергического дерматита [4,7]. Поэтому поиск новых веществ растительного происхождения для лечения аллергического дерматита чрезвычайно важен.

Цель исследования – исследование специфической активности препарата наружного действия густого экстракта суммы флавоноидов из растения череды трехраздельной, которая распространена в Узбекистане.

Материалы и методы. Было создано новое лекарственное средство густой экстракт суммы флавоноидов в виде мази, полученных из травы череды трехраздельной, и изучение этой мази для лечении экспериментального контактного аллергического дерматита

С помощью суммы флавоноидов полученных из местного сырья растительных масел и животных жиров биотехнологическим методом была получена новая гидрофобная мазь с основными свойствами и разработана технология получения в различных процентных соотношениях. В процессе получения мазей сумма флавоноидов полученных из травы череды трехраздельной растворяли в 70% ном этиловом спирте и добавляли небольшими количествами при постоянном перемешивание до получения однородной массы. При этом были получены 1%, 3% и 5% мази густого экстракта суммы флавоноидов. Цвет полученной мази был от светло-серого до темно-серого. Физико-химические свойства готовой мази, а также дисперсность, рН, коллоидная стабильность, число кислотности, число йода и вязкость было определено по требованиям Государственной фармакопеи XI. Биологические активные вещества в составе мази определяли спектрофотометрическим методом. После образования однородной массы мазь помещали в стеклянные тары и определяли её качество [6].

Аллергический контактный дерматит (АКД) вызывали двухкратной аппликацией 5% спиртово-ацетонового 2,4-динитрохлорбензола (ДНХБ) на морских свинках массой 300-400 гр по методу Е.Я. Ивлевой и П.М. Залкан (1965). Животных содержали в стандартных условиях виваоия и животные находились на стандартном лабораторном питании. Все манипуляции с животными проводили в соответствии с Хельсинской конвенцией по защите прав животных. Очаг сенсибилизации создавали на участке спины площадью 3х3 см², с которого предварительно удаляли шерстяной покров. ДНХБ наносили на участок кожи в дозе 0,1 мл 5% спиртово-ацетонового раствора (2:1) [2]. Животным с АКД через сутки после второй аппликации аллергена наносили текушего доза маза густого экстракта суммы флавоноидов [5]. ДНХБ-сильный аллерген, имеющий высокую проникающую способность при нанесении на кожу и провоцирующий развитие выраженной воспалительной реакции аллергической природы, которая по клиническим призникам является адекватным проявлением аллергического дерматита у человека.

Для проведения эксперимента использовали 36 морских свинок массой 300-400 гр, разделенных на 6 групп по 6 животных в каждой. Каждой группе наносили нужную дозу мази: 1 группа – интактный контроль; 2 группа – 1% мазь густого экстракта суммы флавоноидов; 3 группа – 3% мазь густого экстракта суммы флавоноидов; 4 группа – 5% мазь суммы густого экстракта флавоноидов; 5 группа – псило-бальзам; 6 группа – мазь целестодерм В.

За развитием дерматита наблюдали в динамике в 1, 3, 5, 7, 9 и 11-й дни. Одновременно регистрировали величину кожной складки с помощью микрометра и кожную температуру морских свинок с аллергическим дерматитом с помощью электронного термометра.

Животным с АКД через сутки после второй аппликации аллергена третий день начали наносить нужную дозу маза 1 раз в сутки течении 11 дней.

Результаты и их обсуждение.

Результаты проведенных исследований показали, что у животных 1 группы (контрольная группа) до начала эксперимента размер кожной складки в среднем был 0,27±0,02 см. У животных данной группы этот показатель начал увеличиваться с 1-го по 7-й (1-день 0,43±0,01 см 3-й день, 2,36±0,1 см, 5й день - 2,9±0; 16 см, 7-й день 3,0±0,2 см) дни. Только с 9-го дня он начал снижаться (уменьшаться) (9-й день 2,3±0,1, 11 дня, 1,6±0,1) (табл. 1).

У животных 2 группы средний показатель до начала эксперимента составил 0,23±0,02 см, а с 1 по 5 дни толщина кожной складки увеличивалась (в 1 день 0,46±0,02 см, 3 день – 1,41±0,03; см 5, день 2,8±0,1 см), а с 7-го дня наблюдалось достоверное снижение по сравнению с показателями контрольной группы (1,9±0,1 см, на 9 день, 1,3±0,1 см, на и на 11-е сутки 0,97±0,1 см).

У животных 3-й группы средний размер складки кожи перед экспериментом составлял 0,25±0,02 см, увеличиваясь с 1 до 5 дня (1 день 0,43±0,01 см, 3 день 1,42±0,1 см, 5 день 2,87±0,1 см), наблюдалось достоверное снижение с 7 дня по сравнению с контрольной группе (на 7 день 1,65 ± 0,1 см на 9 день, 1,3±0, 07 см и 0,83±0,06 см на 11-е сутки).

Животные в 4-й группе до эксперимента имели в среднем 0,25±0,02 см размер кожных складок, который увеличивался с 1 до 5 дня (1 день 0,44±0,02 см, 3 день 1,51±0,01 см, 5 день 2,3±0,1 см), и с 3-го дня наблюдалось достоверное снижение по сравнению с показателями контрольной группы (7 день 1,7±0,1 см, 10 день 1,36±0,1 см, 13 день 0,4±0,03 см).

Средние значения до эксперимента у животных 5- и 6-групп составили: в 5-группе 0,23±0,21 см; в 6-группе 0,21±0,01 см, то в обеих группах с 1 до 5 дней эксперимента размер кожных складок увеличивался (5-группа: 1-день 0,46±0,03 см, 3-день 1,78±0,04 см, 5-день 3,0±0,2 см; 6-группа: 1-день 0,51±0,03 см, 3-день 1,81±0,04 см, 5-й день: 3,25±0,2 см), с 7-го дня обеих группах животных наблюдалось достоверное снижение значений по отношению к группе контроля (5- группа: 2,08±0,13 см на 7-й, 1,43±0,11 см на 9-й, 1,1±0,08 см на 11-й день, 6-я группа: 1,86±0,04 см на 7-й день, на 9-день, 1,3±0,05 см, на 11-й день, 0,93±0,04 см).

Таким образом, было установлено, что с 1-го до 5-го дней лечения наблюдалось увеличение кожных складок во всех группах, а с 7-го дня наблюдалось достоверное уменьшение размера кожной складки во всех группах по сравнению с контрольной. В частности, кожная складка в 4-группе была близка к доэкс-периментальному здоровому состоянию по сравнению с другими группами.

Таблица 1

Влияние исследуемого препарата на толщину кожной складки у морских свинок с экспериментальным аллергическим дерматитом

Группы (n=6)	Толщина кожной складки, см/дни исследование
	Исход	1	3	5	7	9	11
1 группа – интактный контроль	0,27±0,02	0,43±0,01	2,36±0,1	2,9±0,16	3,0±0,2	2,3±0,1	1,6±0,1
2 группа – 1 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов	0,23±0,02	0,46±0,02	1,41±0,03	2,8±0,1	1,9±0,1*	1,3±0,1*	0,97±0,1*
3 группа – 3 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов	0,25±0,02	0,43±0,01	1,42±0,1*	2,87±0,1	1,65±0,1*	1,3±0,07*	0,83±0,06*
4 группа – 5 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов	0,25±0,02	0,44±0,02	1,51±0,01*	2,3±0,1*	1,7±0,1*	1,36±0,1*	0,4±0,03*
5 группа – псило-бальзам	0,23±0,21	0,46±0,03	1,78±0,04*	3,0±0,2	2,08±0,13*	1,43±0,11*	1,1±0,08*
6 группа – мазь целестодерм В	0,21±0,01	0,51±0,03	1,81±0,04*	3,25±0,2	1,86±0,14*	1,3±0,05*	0,93±0,04*

* р ≤ 0,05 отношение с исходным данным

Таблица 2

Динамика местной температуры у морских свинок с контактным аллергическим дерматитом при эксперименте, в °С

Группы	Исход	1	3	5	7	10	13
1 группа – интактный контроль	37,5±0,04	38±0,15	38,5±0,14	38,5±0,18	38,4±0,2	37,6±0,06	37,6±0,04
2 группа – 1 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов	37,5±0,04	37,5±0,25	38,2±0,1	37,8±0,2	38±0,15	37,7±0,07	37,6±0,1
3 группа – 3 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов	37,5±0,04	37,1±0,08	38,3±0,2	37,9±0,1	38,3±0,2	37,6±0,1	37,5±0,03
4 группа – 5 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов	37,5±0,04	37,6±0,1	39,2±0,1	38,4±0,1	37,8±0,1	37,6±0,04	37,6±0,02
5 группа – псило-бальзам	37,5±0,04	37,4±0,1	39,2±0,09	39,5±0,03	38,5±0,07	37,6±0,11	37,6±0,03
6 группа – мазь целестодерм В	37,5±0,04	37,6±0,04	38,9±0,1	38,7±0,07	38±0,04	37,6±0,03	37,6±0,02

В ходе эксперимента параллельно измерялась локальная температура кожи у животных с контактным аллергическим дерматитом. В 1 группе у животных температура была слегка повышена с 1 по 7 дни и снизилась до исходного уровня к 9 дню. Во 2-и 3-группах на 3- и 5-дни температура была слегка поднята, а остальные дни не изменилась. У животных 4-й группы 3-й день был отмечен наивысшим значением, на 5-й день немного уменьшилось, а оставшиеся дни практически не изменилось.

Аналогичный характер изменений был установлен у животных 5 и 6 групп, так температура тела была повышена в дни 3, 5 и 7 по сравнению с исходным уровнем, и к 10-му дню температура приближалась к исходным значениям.

Обобщая вышеизложенное, мы установили, что у всех животных в нашем эксперименте на 3-й день локальная температура (на месте воспаления) увеличивалась, в то время как на 5-й и 7-й дни она немного повышалась, так у некоторых животных она вернулась к исходному уровню.

Таким образом, было установлено, что применение в 4 группе 5% мази суммы густоого экстракта флавоноидов на гидрофобной основе обеспечивает более эффективное лечение контактного аллергического дерматита, чем 1%, 3% формы мази, а также мази псило-бальзам и глюкокортикостероид-содержаюшей мазью целестодерм В. При измерении местной температуры наблюдалась в 4 группе животных с 7 дня было более ранее начало нормализации к исходному уровню, чем в других группах.

Выводы. Проведенные исследования густого экстракта суммы флавоноидов в виде мази на местной основе позволило сделать следующие выводы.

Изучаемые 1%, 3% и 5% мази густого экстракта суммы флаваноидов на местной основе обладают выраженным действием на экспериментальный контактной дерматит у морских свинок.

Наиболее выраженным эффектом обладает 5% мазь густого экстракта сумма флаваноидов на местной основе. Она больше уменьшает толщину кожной складки по сравнению с 1%, 3% видами мази, псило-бальзам и мазь целестодерм В.

При измерении местной температуры отмечалось, что у 4-группе животных с 7-дня эксперимента начало приближаться раньше к исходному уровню, чем в других экспериментальных группах.