Изменение соотношения адениловых нуклеотидов в клетках Escherichia coli как интегральный показатель стресса

Исследовано изменение концентрации АТФ и АДФ в клетках Escherichia coli, подвергнутых сублетальному стрессу. Сублетальный стресс – воздействие стрессоров, не приводящее к снижению количества колониеобразующих единиц относительно момента их внесения в культуру, но ингибирующее рост. Бактерии культивировали в минимальной среде М9 с добавкой 0.4% глюкозы при 37ºС и перемешивании со скоростью 120 об/мин. Стрессоры (50 г/л хлорида натрия, 1 г/л уксусной кислоты, 7% этанол) вносили в экспоненциальной фазе роста (ОП600=0.3). Нуклеотиды экстрагировали 0.4 N HClO4 на ледяной бане из предварительно отмытых от среды бактериальных клеток с последующей нейтрализацией 2М К2СО3. Количественный анализ нуклеотидов проводили методом обращеннофазной высокоэффективной жидкостной хроматографии с тетрабутиламмония гидрогенсульфатом в качестве ионпарного реагента. Воздействие хлорида натрия вызывало повышение [АТФ] и [АДФ], воздействие этанола – повышение [АТФ] и повышение с последующим снижением [АДФ], уксусной кислоты – снижение с последующим повышением [АТФ] и снижение [АДФ] относительно уровня нестрессированной культуры. Несмотря на разнонаправленное изменение концентрации АТФ и АДФ в клетках, подвергнутых разным типам стресса, все они характеризовались повышенным уровнем показателя [АТФ]/[АДФ] по сравнению с контрольной культурой.