Изменения экспрессии маркера CD95 клетками костного мозга больных гемобластозами под влиянием низких концентраций цитостатиков in vitro

Программированная гибель клеток (апоптоз) играет важную роль в морфогенетических процессах организма, в развитии опухолевых заболеваний. Один из путей апоптоза может осуществляться через «рецепторы смерти», в частности, известен Fas-опосредованный путь апоптоза CD95 позитивных клеток. Белок CD95 принадлежит к семейству рецепторов фактора некроза опухолей и экспрессируется на поверхности многих типов клеток. Нами проведено сравнительное исследование оценки экспрессии CD95 клетками костного мозга (ККМ) больных гемобластозами под влиянием различных цитостатических препаратов in vitro.

Материалом послужили клетки костного мозга (ККМ) больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга (НХЛ). Определение экспрессии СD95 клетками костного мозга проводили с помощью иммунофлюорес-центного теста. В опытные пробы добавляли цитостатики, применяемые для лечения гемобластозов, в низких концентрациях (10-6/мл), в контрольные – эквивалентный объем среды 199. Длительность инкубации при 37оС составляла 45 мин, после чего клетки отмывали однократным центрифугированием в среде 199 и однократным – в фосфатно-солевом буфере (рН 7,3-7,4) и ставили иммунофлюоресцентный тест с моноклональными антителами к СD95. В качестве группы сравнения нами была взяты пробы ККМ больных с «внекостномозговыми» локализациями злокачественного процесса (рак легкого и меланома), с которыми были проведены аналогичные исследования. Статистическую обработку проводили с использованием непараметрических методов (непрямых разностей, критерия Уилкоксона, z-критерия).

Обработка костномозгового пунктата всеми исследуемыми препаратами приводила к повышению количества ККМ с маркером CD95, после инкубации с дексаметазоном (9,2±1,98%), метотрексатом (9,4±0,88%) и циклофосфаном (7,25±0,84%), тенипозидом (10,0±2,86%), метотрексатом (9,4±0,88%) этот показатель был достоверно отличен от контроля (4,5±0,44%). Показатели содержания СD95+ ККМ обработанных цитостатиками у больных раком легкого и меланомой c малигнизированным и немалигнизированным костным мозгом составили 8,3±2,05% и 15,6±3,05% соответственно, что было статистически достоверно выше, чем у онкогематологических больных. Также мы обнаружили, что обработка химиопрепаратами ККМ больных раком легкого и меланомой не вызывает статистически значимых изменений в зависимости от поражения костного мозга. Можно предположить, что, несмотря на то, что готовность ККМ к апоптозу, маркируемая рецептором СD95 (Fas-АPО-1), значительно выше у больных с солидными опухолями, реализуется он в сходной степени, то есть механизм реализации апоптоза в данном случае, вероятно, опосредуется не через Fas-рецептор. Итак, полученные результаты позволяют считать, что ККМ онкогематологических больных демонстрируют более низкую экспрессию CD95, чем ККМ больных с негематологической онкопатологией, а обработка их in vitro низкими концентрациями различных химиопрепаратов приводит к индивидуально обусловленным изменениям, в большинстве случаев увеличению числа CD95 позитивных клеток костного мозга.