Изменения реализации апоптотической программы трансформированных клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов здоровых доноров при воздействии сульфида водорода

Цель – определить влияние сульфида водорода (H₂S) на реализацию апоптотической программы клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов здоровых доноров.

Материал и методы. В работе использованы клетки линии Jurkat (T-лимфобластная лейкемия) и мононуклеарные лейкоциты (выделяли из крови у 10 здоровых доноров путем центрифугирования на слое фиколла («Pharmacia», Швеция) плотностью 1,077). Клетки инкубировали при температуре 37ºС в полной питательной среде с добавлением различных концентраций донора сульфида водорода (натрий гидросульфид гидрат (NaHS) («Sigma», USA). Количество клеток с признаками некроза оценивали методом световой микроскопии при окраске трипановым синим («Serva», США). Апоптотически измененные клетки регистрировали с помощью TUNEL-метода с использованием флуоресцентной микроскопии («Webstain», США).

Результаты. Для определения роли сульфида водорода в реализации апоптоза клетки линии Jurkat и мононуклеарные лейкоциты культивировали в присутствии различных концентраций NaHS (от 10 мкм до 1 мМ) в течение 15 мин. Результатом инкубации клеток с 1 мМ и 500 мкм донора H2S являлся некроз клеток. Указанные концентрации не использовались в дальнейшем для определения влияния сульфида водорода на программированную гибель клеток. Установлено, что инкубация клеток линии Jurkat в течение 15 мин с 10 мкм NaHS приводила к увеличению числа апоптотически измененных клеток в 2,2 раза, с 50 мкм – к достоверному снижению исследуемого параметра, со 100 мкм – к увеличению апоптотической гибели в 1,5 раза по сравнению с контролем. При этом добавление в культуральную среду 100 мкм NaHS сопровождалось некротической гибелью более 50% клеток, 50 мкм – увеличением числа некротизированных клеток в 5 раз, при воздействии на клетки 10 мкм NaHS количество лимфоцитов с признаками некроза превосходило аналогичный параметр в интактной культуре в 1,7 раза. Полученные данные свидетельствуют, что проапоптотическая для клеток линии Jurkat доза донора сульфида водорода (10 мкм) не вызывала изменений программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов, полученных у здоровых доноров. Более того, увеличение числа некротических клеток в культуре мононуклеа-ров здоровых доноров относительно контроля наблюдалось только при воздействии 100 мкм NaHS, при этом не было изменения числа TUNEL-положительных мононуклеаров.

Выводы. Клетки Т-лимфобластной лейкемии более сенсибилизированы к действию сульфида водорода, чем мононуклеарные лейкоциты, полученные у здоровых доноров. NaHS в концентрации 10 мкм обладает проапоптоти-ческими свойствами в отношении клеток линии Jurkat и может быть использован для изучения молекулярных механизмов влияния сульфида водорода на реализацию апоптотической программы клеток.