Изоляция и монослойное культивирование субпопуляций человеческих лимфоцитов

Цель: создание и оценка потенциала биоинженерной in vitro-модели эндотелиальной ниши костного мозга для поддержки и активации гемопоэтических стволовых клеток человека. Материал и методы. Использованы человеческие лимфоциты, изолированные из мононуклеарных клеток периферической крови. Изготовлены серии платформ с различными активированными поверхностями лунок 24-луночных планшетов: отдельно фибронектин, отдельно поли-D-лизин, фибронектин и поли-D-лизин, поли-D-лизин и анти-CD3антитела. В течение 7-дневного культивирования проводили визуальный мониторинг состояния клеточных популяций методом прямой микроскопии, оценку жизнеспособности с окрашиванием трипановым синим, оценочный тест на адгезионную активность. Результаты. В условиях эксперимента жизнеспособность лимфоцитов поддерживалась на высоком уровне >80% для всех тестовых платформ и в контроле соответственно, с сохранением типичной для лимфоцитов морфологии. Использование платформы 24T_FN с активатором фибронектином показало неравномерно распределенные клеточные островки и образование крупных конгломератов. Платформа 24T_pDl на основе поли-D-лизина продемонстрировала высокую степень равномерности 2D-распределения клеток с образованием отдельных скоплений в пределах 50–100 клеток. Адгезионная активность на 7-й день эксперимента на платформах 24T_FN и 24T_pDl была в пределах 60–70%, в 3 раза превосходя данные для контроля. Наилучшие показатели выживаемости, адгезионной активности, 2D-распределения клеток продемонстрировала комбинированная платформа 24T_pDl@AbCD3 с покрытием поли-D-лизином в комбинации с анти-CD3-антителами. Заключение. В условиях модельных экспериментов in vitro продемонстрирована возможность длительного монослойного субкультивирования лимфоцитарных клеток человека с высокой адгезионной активностью на синтетической платформе с активированной поверхностью поли-D-лизином в комбинации с антителами, аффинными к CD3+-Т-клеткам.