Изучение химико-фармацевтических и токсикологических свойств новой инъекционной формы гепатопротекторного препарата

Введение. В условиях промышленного разведения гепатозом страдает около 30-60% поголовья, что несет большой экономический ущерб. Это связано со снижением молочной продуктивности, ухудшением качества мяса, выбраковка печени [4].

Орнитин-непротеиногенная аминокислота, заменимая в питании животных, не входящая в состав белков, играет важную роль в биосинтезе мочевины. При введении в организм орнитин проявляет себя в качестве эффективного гепатопротектора [1, 8, 9, 10, 17, 18].

Берберин представляет собой растительный алкалоид. На молекулярном уровне он способствует повышению чувствительности клеток печени к инсулину,

что ведет к улучшению метаболических процессов в этом органе и снижению уровня глюкозы в крови. Берберин также способствует более эффективной переработке жиров в печени и уменьшает содержание триглицеридов, что помогает предотвратить возникновение жировой дистрофии [5, 12, 13, 14, 15, 21, 23, 24].

Кроме того, берберин защищает печень от повреждений, вызванных токсинами. Он обладает мощными антиоксидантными свойствами, что позволяет ему нейтрализовать свободные радикалы, наносящие ущерб клеткам печени. Берберин снижает воспалительные процессы в печени, уменьшая уровень цитокинов и других воспалительных медиаторов [3].

I 33   1

Метилурацил активизирует обмен веществ в тканях. Обладает анаболической активностью. Оказывает гемопоэтическое, лейкопоэтическое, иммуностимулирующее, противовоспалительное действие. Нормализуя нуклеиновый обмен, ускоряет процессы регенерации, ускоряя рост и грануляционное созревание ткани и эпителизацию (в том числе в быстро пролиферирующих клетках слизистой оболочки желудочнокишечного тракта), стимулирует эритро- и лейкопоэз, клеточные и гуморальные факторы иммунитета [6].

Наночастицы селена оказывают положительное влияние на здоровье животных, улучшая их иммунитет, репродуктивную функцию и общее состояние. Они также могут повышать устойчивость к болезням и улучшать метаболизм [2, 7, 11, 16, 19, 20, 22, 25].

Цели и задачи

Целью данного исследования являлось разработка инъекционной формы нового комплексного гепатопро-текторного препарата. Исходя из этого перед нами были поставлены следующие задачи:

• 1.    Конструирование инъекционной формы гепа-топротекторного препарата;

• 2.    Исследовать стабильность лекарственного препарата, методом ускоренного старения;

• 3.    Определить острую токсичность нового комплексного гепатопротекторного препарата.

Материалы и методы

Исследования проводились на базе кафедр «Болезни животных и ВСЭ», «Микробиология и биотехнология», ЦКП «Молекулярная биология» ФГБОУ ВО Вавиловского университета.

На первом этапе нашей работы, проводилась подготовка действующих веществ и лабораторной посуды.

Все действующие вещества (орнитин, берберин, метилурацил, наночастицы селена) взвешивались на аналитических весах в соответствии с рецептурой.

Лабораторная посуда (флаконы, крышки) проходила стерилизацию в автоклаве и сухожаровом шкафу.

После этого в стерильный флакон помещался орнитин и берберин, закрывался крышкой и ставился на шаровую мельницу с шариками 3мм на сутки для того, чтобы получился однородный порошок. В другом флаконе таким же методом измельчались наночастицы селена. Затем полученные образцы отделялись от шариков, пересыпались в один флакон, к ним добавлялся метилурацил. Флакон со всеми веществами оставляли на шаровой мельнице на сутки для измельчения и однородного перемешивания. После того как порошок стал однородным его снимали с мельницы, отделяли препарат от шариков через сито.

Следующим этапом нами была проведена стабильность лекарственного препарата, методом ускоренного старения препарата.

Метод «ускоренного старения» заключается в выдерживании испытуемого лекарственного средства при температурах, превышающих температуру его хранения.

Нами проводилось исследование по ниже представленным показателям:

• 1.    Влияние температурного фактора;

• 2.    Воздействие повышенной влажности.

Для опыта по «ускоренному старению» лекарственных средств должны использовался термостат. При температуре + 60°С.

Для изучения воздействия повышенной влажности проба препарата помещалась во влажную камеру со влажностью 75%.

Затем проводилось определение острой токсичности гепатопротекторного препарата в соответствии с ГОСТ 32644-2014. Нами было сформировано 4 группы белых нелинейных беспородных мышей по 3 головы в каждой (см. таблицу 1).

Таблица 1 – группы животных для определения острой токсичности

№ группы	Дозировка вводимого препарата
Группа 1	1000 мг/кг
Группа 2	2000 мг/кг
Группа 3	3500 мг/кг
Группа 4	5000 мг/кг

Результаты исследований. Нами был сконструирован опытный образец препарата, в состав которого входили орнитин, берберин, метилуроцил, селен. Полученные образцы были помещены в стерильные флаконы и запечатаны для сохранения стерильности и дальнейшего использования в стрессовых испытаниях для оценки старения лекарственного средства при воздействии температуры и относительной влажности и оценки острой токсично (Рис.1).

В результате стрессовых испытаний, во время которых 1 образец находился при температурах 60 ° C, 2

образец при влажности 75% в течении 60 дней нами было установлено следующее:

• 1.    Образцы не поменяли окраса;

• 2.    Структура образца №1 не была нарушена;

• 3.    Образец №2 при воздействии влажности не терял свою однородную структуру.

Исследование острой токсичности по ГОСТ 32644-2014 проводилось следующим образом. Животным внутрибрюшинное вводился препарат в дозах 5000 мг/кг, 3500 мг/кг, 2000 мг/кг и 1000 мг/кг соответственно (Таблица 2).

Таблица 2 – Массы опытных животных и вводимая дозировка

№	Группа 1		Группа 2		Группа 3		Группа 4
	Масса, г	Вводимая доза, 1000 мг/кг	Масса, г	Вводимая доза, 2000 мг/кг	Масса, г	Вводимая доза, 3500 мг/кг	Масса, г	Вводимая доза, 5000 мг/кг
1	23	23	24	48	25	87,5	24	120
2	20	20	24	48	23	80,5	24	120
3	25	25	22	44	25	87,5	24	120

В четвертой группе после введения препарата у животных наблюдалось угнетенное состояние, отказ от корма и воды, учащенное дыхание и признаки интоксикации. На вторые сутки состояние то же, погибших животных не было (Таблица 3).

В третьей группе после введения препарата наблюдались, угнетенное состояние, учащенное дыхание, отказ от корма. Спустя стуки, у остальных наблюдалось угнетенное состояние, через сутки не погибло ни одно животное. Спустя неделю после введения препарата признаков интоксикации у животных не наблюдались. По итогу спустя 14 суток падежа оставшихся животных не наблюдалось (Таблица 3).

Во второй группе после введения препарата наблюдалось угнетенное состояние, учащенное дыхание, данное состояние проявлялось на протяжении недели. Спустя неделю состоянии животных пришло в норму. По итогу спустя 14 суток падежа животных не наблюдалось (Таблица 3).

В первой группе после введения препарата отмечалось угнетенное состояние, учащенное дыхание, но спустя двое суток состояние животных приходило в норму. По итогу спустя 14 суток падежа животных не наблюдалось. Результаты представлены в таблице № 3.

Таблица 3 – Данные гибели животных при оценки острой токсичности

	Группа 1	Группа 2	Группа 3	Группа 4
0 сутки	0	0	0	0
1 сутки	0	0	0	0
2 сутки	0	0	0	0
3 сутки	0	0	0	0
7 сутки	0	0	0	0
14 сутки	0	0	0	0

Исходя из этих данных, токсическое воздействие оказывалось при дозировках от 2000 мг/кг до 5000 мг/кг. Согласно ГОСТ 32644-2014 нами было установлено, что препарат относится к 5 классу опасности, вещества не опасные.

Заключение. В результате проведенных исследований нами был получен образец комплексного инъекционного гепатопротекторного препарата, который в дальнейшем может быть использован на животноводческих предприятиях с целью лечения заболеваний гепатобилиарной системы. Так же было проведено исследование стабильности лекарственного препарата, методом ускоренного старения, которое позволило доказать, что препарат не теряет своей стабильности при неблагоприятных воздействиях (высокой температуре и влажности). При проведении острой токсичности согласно ГОСТ 32644-2014 было установлено, что препарат относится к 5 классу опасности, вещества не опасные.

Публикация выполнена в ходе проведения поисковой научно-исследовательской работы в рамках реализации госзадания Министерства науки и высшего образования РФ (№№ 1922025/1024112600036-6-4.3.1).

I 35   1