Изучение продолжительности иммунного ответа после применения ассоциированной инактивированной вакцины против метапневмовирусной инфекции птиц и респираторного микоплазмоза

Адъюванты это вещества или комплекс веществ различной химической природы, которые действуя неспецифически, повышают специфический иммунный ответ. Известно большое количество веществ, имеющих различный химический состав и происхождение, которые способны оказывать адъювантное действие [1, 4]

В качестве адъювантов используют гидроокись или фосфат алюминия, водно-масляные эмульсии, липосомы, продукты микобактерий, сапонины, декстраны, полимеры, липополисахариды, лимфокины, микрокапсулы и др. Большинство авторов выделяют два основных вектора действия адъювантов: 1. на антиген – через изменение свойств антигена, 2. на организм - путем стимуляции функций иммунной системы последнего Механизм адъювантного действия во многом еще остается невыясненным. Выяснение механизма иммунного ответа затрудняется сложностью и гетерогенностью строения антигенов и адъювантов. В настоящее время установлено, что адъюванты взаимодействуют с наиболее важными антигенпрезентирующими клетками (макрофагами, клетками Лангерганса, дендритными клетками) и эффекторными клетками (плазматическими клетками, естественными киллерами), Т-хелперами и клетками воспаления (полиморфно-ядерными базофилами, эозинофилами) [2, 3, 4, 5].

При изготовлении инактивированных вакцин широко применяются адъюванты, позволяющие значительно повышать иммуногенную и антигенную активность препаратов, а также увеличивать продолжительность иммунного ответа. Использование адъювантов позволяет уменьшить дозу антигена в вакцине, увеличить иммуногенность «слабых» антигенов, предотвращать конкуренцию антигенов в комбинированных вакцинах, увеличивать скорость развития и продолжительность иммунного ответа у привитых животных, индуцировать защитные свойства слизистых оболочек [6].

Анализ литературных данных показывает, что в настоящее время интенсивно проводятся исследования, направленные на разработку новых и улучшение существующих адъювантных систем.

Цель настоящей работы - изучение продолжительности иммунного ответа после применения ассоциированной эмульгированной инактивированной вакцины против (МПВИ+РМП), в водную фракцию которой введен синтетический сополимер в качестве дополнительного стимулятора иммуногенеза.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В исследованиях были использованы масляный адъювант отечественного производства АБ-М4 (В/М), антиген метапневмовируса птиц (МПВ) с биологической активностью 10^7,0 ТЦД 50 /см³, определенной до инактивации, антиген Mycoplasma gallisepticum (MG) в концентрации 10⁹ КОЕ/см³

(колонеобразующих единиц), определенной до инактивации, цыплята 45-суточного возраста, наборы для выявления антител к МПВ и к MG иммуноферментным методом производства фирмы BioChek, 1%-ный раствор синтетического сополимера.

При изготовлении образцов инактивированных вакцин против МПВИ+РМП эмульсию получали методом гомогенизации водного и масляного компонентов в соотношении 30:70 с помощью гомогенизатора Ultraturrax T-25.

Антигенную активность и продолжительность иммунного ответа оценивали по титрам поствакцинальных антител в ИФА в соответствии с инструкцией по применению набора. Для этого цыплят опытных групп (по 20 голов в каждой) иммунизировали изготовленными образцами вакцин, инокулируя одну дозу вакцины, составляющую 0,5 см3/гол., оставляя 10 голов цыплят качестве чистого контроля. Через 30 дней после иммунизации и далее ежемесячно от цыплят всех групп брали кровь, получали сыворотку и проводили исследования в ИФА. Срок наблюдения составил 12 месяцев с момента иммунизации.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для изготовления образцов вакцин сначала антигены МПВ и MG смешивали а равных количествах. Затем, к смеси антигенов для первой вакцины добавляли раствор синтетического сополимера до конечной концентрации 0,05%, а в смесь антигенов для второй вакцины вместо синтетического сополимера вводили такой же объем стерильного физиологического раствора.

На базе адъюванта АБ-М4 были изготовлены следующие образцы вакцин:

• 1.    Вакцина ассоциированная эмульгированная инактивированная против МПВИ+РМП с добавлением в водную фазу препарата раствор синтетического сополимера в конечной концентрации 0,05% (МПВИ+РМП+Сополимер);

• 2.    Вакцина ассоциированная эмульгированная инактивированная против МПВИ+РМП (референс-препарат).

При исследовании в ИФА вакцину считали антигенно активной, если через 30 дней после вакцинации у 80% привитых цыплят пробы сывороток имели титры по компонентам МПВ и MG не менее, чем в 2 раза выше минимального положительного титра, указанного в инструкции набора BioChek при отрицательном иммунном фоне или не менее, чем в 2 раза превышали уровень положительного иммунного фона, и при этом прирост титров антител у цыплят контрольной группы за период опыта не наблюдался.

Результаты исследований образцов вакцин №1, №2, на антигенную активность и продолжительность иммунного ответа представлены на рис.1 и 2.

Рис. 1 Динамика выработки антител к МПВ после вакцинации цыплят образцами вакцин: № 1- вакцина против МПВИ+РМП+Сополимер и № 2-вакцина против МПВИ+РМП

Рис. 2 Динамика выработки антител к MG после вакцинации    цыплят образцами вакцин: № 1- вакцина против МПВИ+РМП+Сополимер и № 2-вакцина против МПВИ+РМП

Как видно из приведенных графиков, иммунный ответ по компонентам МПВИ и РМП выше у вакцины №1, в состав которой был введен синтетический сополимер.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, проведенные исследования показывают, что синтетический сополимер обладает адъювантными свойствами и позволяет усиливать иммунный ответ, индуцируемый масляным адъювантом при их сочетанном применении в инактивированной вакцине против МПВИ+РМП. Экспериментальная вакцина индуцирует выработку антител более высокого уровня на протяжении всего срока наблюдения.