Эффективность применения препаратов с высоким содержанием фитостеринов для лечения хронического простатита

В настоящее время в России зарегистрировано несколько препаратов для лечения хронического простатита на основе липидостеролового экстракта плодов пальмы ползучей ( Serenoa repens ), таких как: пермиксон, простамол уно, простагут моно, простап-лант, простасерен, сереноа репенс, серпенс.

Плоды пальмы ползучей содержат в своем составе стероидные соединения фитостеролы (фитостерины) — β-ситостерин, β-ситостерин 3-О-β-гликозид, кампестерин, стигмастерин и другие. Основным фитостеролом липидостеролового экстракта плодов пальмы ползучей является β-ситосте-рол. Наиболее широкое применение данного вещества, как входящего в состав богатых им экстрактов растений, так и в чистом виде, отмечено для лечения и облегчения симптомов течения гиперплазии простаты. В ходе клинических испытаний было установлено, что уже спустя 2—3 недели после ежедневного применения 50 мг β-ситос-терола у 78 % больных с гиперплазией простаты наблюдалось кардинальное улучшение процесса мочеиспускания, при этом никаких побочных действий не выявлено [6].

Окончательно механизмы действия β-ситос-терола не установлены. Однако известно, что он ингибирует превращение тестостерона (ТСТ) в дигидротестостерон (ДГТСТ) при участии фермента 5-α-редуктазы [14], способствует уменьшению синтеза простагландинов в предстательной железе, а также активизирует сфингомиелиновый цикл и апоптоз раковых клеток простаты человека [15].

Существует сообщение, что фитостерины, входящие в экстракт плодов пальмы ползучей, способны взаимодействовать с цитозольными ан-дрогенрецепторами простаты крыс, препятствуя связыванию синтетического андрогена с этими рецепторами. Антиандрогенное действие экстракта плодов было подтверждено и на культуре человеческих генитальных кожных фибробластов. Кроме того, в эксперименте было установлено, что экстракт препятствует связыванию ДГТСТ со всеми клеточными андрогенрецепторами [3].

Актуальным является продолжение поиска новых препаратов на основе растительного сырья, содержащих в своем составе фитостерины и другие тритерпеновые соединения. Поэтому в настоящей работе было продолжено экспериментальное изучение комплексного препарата «Проста-цел», содержащего в своем составе липидные экстракты лиственницы, босвелии и амаранта.

Ранее в масляном экстракте лиственницы сибирской обнаружено высокое содержание следующих фитостеринов: эргостерин, тахистерин, брассикастерин, эпистерин, делстерин и описанный выше β-ситостерин [3]. Также в работе [9] было показано, что из экстрактивных веществ коры лиственницы ( Larix sibirica ) выделен новый ланоста-новый тритерпеноид — метиловый эфир (24S,25R)-эпокси-3a-гидроксиланост-9(11)-ен-27-овой кислоты, структура которого установлена методом факторного анализа. Помимо стеринов в масляном экстракте Larix sibirica в значительном количестве содержатся и токоферолы, которые, как известно, являются эффективными внутриклеточными антиоксидантами и регулируют клеточную проницаемость [7]. Известно, что α-токоферол является важным компонентом секрета предстательной железы и поддерживает биологическую активность сперматозоидов, а при дефиците витамина Е повреждается эпителий семенных канальцев и яичек [1].

Амарантовое масло, входящее в состав про-стацела, содержит большое количество сквалена (до 8 %), природного ациклического тритерпена с шестью двойными связями, занимающего центральное место при синтезе стероидов, в том числе гормонов и витамина Д [7]. Биогенез фитостеролов тесно связан со скваленом. В амарантовом масле представлена большая группа фитостеролов, их содержание достигает 2 %, основным из которых является спинастерол (до 54 %).

Экстракт Boswellia serrata издавна используется в традиционной индийской народной медицине аюрведа в качестве противовоспалительного средства [10]. Главными действующими веществами этой смолы являются пентациклические тритерпеновые кислоты: β-босвелливая, ацетил-β-босвелливая, ацетил-11-кето-β-босвелливая [13]. Были проведены исследования экстрактов смолы из Boswellia Serrata и индивидуальных босвелли-вых кислот в эксперименте и клинике, которые показали их выраженное противовоспалительное действие [12].

Ранее нами на модели хронического простатита уже был показан сопоставимый эффект исследуемого препарата «Простацел» с такими препаратами сравнения, как «Пермиксон» и «Проста-мол Уно» [5]. В связи с этим возникла необходимость продолжения исследования данного препарата и поиск его эффективных доз. Кроме того, для повышения стабильности препарата в его состав было введено масло семян кунжута, обладающее ярко выраженными антиоксидантными свойствами. Выбор сезамового масла обусловлен наличием в нем лигнанов — сезамина и сезамолина, для которых доказаны выраженные антиоксидантные свойства в отношении перекисного окисления липидов. Дополнительно для них установлена противовоспалительная активность, связанная со способностью снижать образование интерлейкина-6, фактора некроза опухоли-α и оксида азота [11]. Наконец, в данном эксперименте при оценке выраженности хронического простатита помимо гистологических, биометрических и биохимических показателей дополнительно оценивался уровень ТСТ в ткани предстательной железы методом иммуно-ферментного анализа.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Дать комплексное экспериментальное обоснование эффективности применения препарата «Простацел» в лечении хронического простатита.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальное исследование выполнено на 75 крысах-самцах линии Wistar, вес к началу исследования 250—300 г. Модель экспериментального хронического простатита была выполнена в соответствии с литературными данными [8]. Смесь скипидара и ДМСО вводилась крысам с помощью атравматичного зонда под внутривенным золитиловым наркозом.

Введение препаратов осуществлялось внут-рижелудочно с помощью атравматичного зонда один раз в сутки, в строго установленное время, на протяжении 35 дней. Интактным и контрольным животным в качестве плацебо вводили кукурузное масло в объеме до 2 мл, также в строго установленное время. В первой группе содержались интактные животные, вторая группа — контрольные, затем группа животных, получавших препарат сравнения «Простамол Уно» в дозе 40 мг/кг, и далее две экспериментальные группы, которые получали исследуемые вещества: «Простацел» в дозе 120 мг/кг и «Простацел» в дозе 120 мг/кг + масло семян кунжута в дозе 12 мг/кг.

На 35-е сутки животных подвергали эвтаназии в СО2-камере со стерильным забором крови из полостей сердца.

Состояние антиоксидантной системы животных оценивалось по концентрации диеновых конъюгатов (ДК) [2], продуктов, реагирующих с тиобар-битуровой кислотой (ТБК-РП) в плазме крови, и концентрации восстановленного глутатиона в гемолизате эритроцитов [4].

В гомогенатах ткани предстательной железы оценивали уровень ТСТ методом иммунофермен-тного анализа с помощью набора планшет фирмы «Cayman chemical» на полуавтоматическом имму- ноферментном анализаторе «ImmunoChem-2100 Microplate Reader».

Для гистологической оценки предстательную железу извлекали и фиксировали в течение 24 часов в 10%-м растворе формалина, затем материал обезжиривали и обезвоживали в спиртах нарастающей концентрации, заливали в парафин и изготавливали гистологические препараты с толщиной срезов около 5 мкм. Для этих целей применялось стандартное оборудование и реактивы для парафиновой проводки, препараты окрашивали гематоксилином и эозином. Исследования проводились при помощи светооптического микроскопа «Leica DLMS2» при увеличении 100 и 200. Для сравнительной оценки влияния препаратов на течение экспериментального хронического простатита у крыс было изучено их влияние на морфологические признаки воспаления, пролиферации и отека в ткани простаты.

Статистический анализ выполнялся с помощью программного обеспечения «Статистика 6.0». Тип распределения определялся критерием Шапиро-Уилка. Для всех данных применена описательная статистика: были подсчитаны средние значения и стандартная ошибка среднего, которые вместе со значением n представлены в итоговых таблицах. Межгрупповые различия анализировались параметрическим методом. В качестве параметрического критерия использовался критерий Стьюдента для множественных сравнений.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При изучении противоотечного действия препаратов, как одного из основных проявлений воспалительного процесса, были исследованы следующие показатели: вес предстательной железы и диаметр артериол. Полученные данные представлены в табл. 1.

ТАБЛИЦА 1

Вес предстательной железы и диаметр артериол предстательной железы у экспериментальных животных

Группа Показатели	Интактная, n = 15	Контроль-ная, n = 15	Проста-мол Уно, n = 14	Проста-цел 120 мг/кг, n = 15	Простацел 120 мг/кг + масло семян кунжута, n = 14
Вес простаты, г	0,39 ± 0,03	0,48 ± 0,03*	0,42 ± 0,03	0,43 ± 0,02	0,40 ± 0,02**
Диаметр артериол, мкм	25,12 ± 0,53	45,78 ± 1,18*	36,22 ± 1,42*, **	35,36 ± 1,55*, **	32,22 ± 0,72*, **

Здесь и далее: * различия статистически значимы по сравнению с интактными животными, при р < 0,05;

** различия статистически значимы по сравнению с контрольными животными при р < 0,05.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в контрольной группе масса предстательной железы была увеличена по сравнению с интактными животными на 23,1 %, что обусловлено полнокровием, если судить по диаметру артериол, и отеком простаты.

Простамол уно и простацел при лечебном введении проявляли тенденцию к снижению массы предстательной железы. Статистически значимое снижение массы простаты на 16,7 % наблюдалось лишь на фоне применения комбинации простацела 120 мг/кг + масло семян кунжута. При морфометрическом исследовании установлено, что все исследуемые препараты практически одинаково уменьшали диаметр артериол в сравнении с контрольными животными, однако показатели интактных животных достигнуты не были.

При гистологической оценке препаратов предстательной железы зарегистрированы четыре основных картины: в группе интактных животных наблюдалась картина неизмененной ткани и ткани с явлениями гиперплазии (вариант нормы). В группах подопытных животных кроме наличия гиперплазии ткани диагностировали картину хронического интерстициального простатита либо в стадии обострения, либо в стадии ремиссии. Показано, что исследуемые препараты обладали сопоставимым лечебным действием в отношении морфологического состояния предстательной железы. Больший процент животных с воспалением в стадии ремиссии наблюдался при применении препаратов «Простамола Уно» и «Простацел» 120 мг кг + масло семян кунжута.

Уровень ТСТ в гомогенатах предстательных желез представлен на рис. 1.

Рис. 1. Уровень ТСТ в гомогенатах предстательных желез экспериментальных животных, пг/мл

Полученные данные свидетельствуют о существенном нарушении обмена ТСТ в предстательной железе у животных контрольной группы, было отмечено его снижение по сравнению с интактными животными на 32 %. Такие изменения соответствуют основному диагностическому признаку хронического простатита в клинической практике.

Известно, что в предстательной железе из ТСТ образуется основное количество ДГТСТ, при этом их физиологическая активность различна. ДГТСТ стимулирует пролиферацию клеток предстательной железы гораздо сильнее, чем ТСТ, в свя- зи с чем для лечения гиперплазии предстательной железы применяют ингибиторы 5α-редуктазы (рис. 2).

Рис. 2. Механизм действия ингибиторов 5-α-редуктазы

Среди изученных препаратов выраженным терапевтическим эффектом в отношении уровня ТСТ обладали препараты «Простамол Уно» и «Про-стацел» 120 мг/кг + масло семян кунжута, которые увеличивали уровень ТСТ в гомогенатах предстательной железы по сравнению с контрольной группой на 31 и 76 % соответственно. Такая картина свидетельствует о снижении образования ДГТСТ и, следовательно, о подавлении пролиферации клеток простаты за счет ингибирования 5-α-редук-тазы фитостеролами, входящими в состав препаратов [14].

В патогенезе заболеваний предстательной железы важная роль отводится универсальным процессам, происходящим при повреждении клеточных мембран, то есть активации перекисного окисления липидов (ПОЛ). В этой связи в комплексной терапии заболеваний предстательной железы целесообразно применение антиоксидантов [1].

Результаты оценки антиоксидантых свойств исследуемых препаратов представлены в табл. 2.

ТАБЛИЦА 2

Исследование показателей антиоксидантного статуса экспериментальных животных , (М ± т)

Группа Показатели	Интактная, n = 15	Контроль-ная, n = 15	Проста-мол Уно, n = 14	Проста-цел 120 мг/кг, n = 15	Простацел 120 мг/кг + масло семян кунжута, n = 14
ТБК-РП,	6,53 ±	7,62 ±	7,30 ±	7,43 ±	5,87 ±
мкмоль/л	0,64	0,50	0,42	0,69	0,44 **
ДК,	16,62 ±	20,04 ±	16,73 ±	19,26 ±	17,62 ±
мкмоль/л	0,48	0,41*	0,28 **	0,22*	0,27 **
Глутатион вос-станов-ленный, ммоль/л	0,14 ± 0,00	0,09 ± 0,01*	0,11 ± 0,01*, **	0,12 ± 0,00*, **	0,11 ± 0,00*, **

Представленные данные демонстрируют развитие выраженного оксидативного стресса у животных контрольной группы. Статистически значимо по сравнению с интактными животными повышен уровень ДК (на 21 %) и снижен уровень восстановленного глутатиона (на 36 %).

На фоне этого препараты сравнения «Про-стамол Уно», а также «Простацел» в дозе 120 мг/кг обладали достаточно выраженным и сопоставимым антиоксидантным эффектом, однако уровень интактных животных при использовании данных препаратов достигнут не был. Наиболее выраженным антиоксидантным эффектом обладала комбинация простацел 120 мг/кг + масло семян кунжута, так как статистически значимые отличия от контрольной группы при применении данной комбинации наблюдались по всем исследованным показателям, что подтверждает наличие значимого антиоксидантного эффекта у кунжутного масла.

Полученные нами результаты подтверждают литературные данные [8] о развитии экспериментального хронического простатита при ректальном введении крысам линии Wistar 10%-го раствора скипидара в ДМСО. В данном исследовании развитие простатита подтверждено иммунологическими, биохимическими, биометрическими и гистологическими методами.

Проведенные исследования показали наиболее выраженный противовоспалительный и антиоксидантный эффекты комбинации простацел 120 мг/кг + масло семян кунжута на фоне вызванной патологии. Препараты сравнения «Простамол Уно» и «Простацел» в дозе 120 мг/кг также оказывали выраженное действие на течение хронического простатита, но их эффект был ниже, чем при использовании первой комбинации, по-видимому за счет присутствия в препарате лигнанов кунжутного масла.

Установлены лечебные эффекты исследуемых препаратов и препарата сравнения, что и в том и в другом случае можно объяснить наличием широкого спектра фитостеринов, обладающих сходным механизмом действия в отношении ингибирования фермента 5-α-редуктазы и, соответственно, снижением образования ДГТСТ из ТСТ, что предотвращает процессы гиперплазии предстательной железы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные данные продемонстрировали, что применение многокомпонентного препарата «Простацел» в комбинации с масляным экстрактом семян кунжута является весьма эффективным лечебным средством при развитии хронического экспериментального простатита и даже превосходит по некоторым показателям эффект препарата «Простамол Уно».