Экспериментальное обоснование и выбор способа радиочастотной аблации при солитарных опухолях

Возможность выполнения оперативных вмешательств у пациентов с первичными и метастатическими опухолями печени до настоящего времени не превышает 10 % [7, 10]. При этом среди причин низкой резектабельности не последнее место занимает необходимость значительного расширения объема операции, особенно при наличии 2 и более очагов, что при сомнительной радикальности вмешательства сопряжено со значительным увеличением степени операционного риска у ослабленных онкологических больных. Использование же малоинвазивных методов деструкции опухоли (радиочастотная термоаблация) в комплексном лечении данных пациентов позволяет рассчитывать на увеличение пятилетней продолжительности жизни до 35,4 % [3]. В настоящее время методы локальной деструкции получили широкую распространённость, несмотря на сравнительно короткую историю их клинического применения. Область их применения в онкологии – лечение пациентов с опухолевым поражением печени, почек, лёгких и костей [14].

Все известные в настоящее время методы локальной деструкции можно разделить на химические и физические. К первым относят алкоголизацию очагов, введение в опухоль гипертонического раствора или цитостатиков, ко вторым – различные методики холодовой и тепловой деструкции [18]. На практике чаще применяется методы теплового разрушения опухолевых тканей, из них радиочастотная термоаблация (РЧА) является одним из наиболее перспективных [2, 12,]. Его можно использовать как в самостоятельном виде, так и в комбинации с другими деструктивными, лекарственными и традиционными хирургическими методами лечения опухолевых поражений печени [6, 8, 9]. В хирургии печени РЧА впервые была применена J. P. McGahan et al. d 1990 г. [16]. Основное ее назначение – чрескожная, лапароскопическая или «открытая» термодеструкция опухолей. В России клиническое использование технологии РЧА только начинается, и пока не существует единого взгляда на возможности данной методики [5].

Цель исследования – изучение противоопухолевого и противометастатического действия радиочастотных токов с различным временем экспозиции в эксперименте на мышах с карциномой легких Льюис.

Материал и методы

Эксперименты выполнены на половозрелых животных: 45 мышах-самках линии С57ВL/6 массой 19–21 г, конвенциональных, 1 категории, полученных из отдела экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии СО РАМН (г. Томск). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [11]. Экспериментальные исследования проведены в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.03. «Об утверждении правил лабораторной практики», Федеральном законом «О лекарственных средствах» (статья 36), «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005).

В качестве экспериментальной модели взята карцинома легких Льюис [15], которая перевивается на 12–14-е сут роста, средняя продолжительность жизни животных – 24 дня. После выдерживания животных в карантине в течение 10 дней с целью адаптации к условиям вивария мыши взвешены и равномерно распределены на группы. Карцинома легких перевита подкожно по 5–6×10 ⁶ клеток в 0,1 мл физиологического раствора [4]. На 10-е сут после перевивки животных равномерно распределили на следующие группы:

Контроль – животные с опухолями без воздействий (n=15).

Группа № 1 – одномоментное, однократное воздействие 2 электродами на 10-е сут развития опухоли (n=15).

Группа № 2 – одномоментное, однократное воздействие 4 электродами на 10-е сут развития опухоли (n=15).

Продолжительность эксперимента составила 21 сут. Для радиочастотной термоаблации использовали опытный образец деструктора онкологического (ДО-01). Аппарат состоит из генератора (мощность 80 Вт, частота колебаний 440 кГц) и дополнительных опций (контроль импеданса и температуры), а также перисталь-тирующего насоса, подающего охлаждающую жидкость (стерильный физиологический раствор) и набора охлаждаемых электродов длиной 15 см с рабочей частью 1 см. Контроль температуры в зоне воздействия осуществляли с помощью термодатчика. Время работы определялось автоматически по достижении заданного импеданса – 350 Ом.

После обработки операционного поля рабочие электроды вводили в опухоль, на всю длину его рабочей части, отступая от края опухоли 3–5 мм. В группе № 1 воздействие радиочастотными токами проводилось однократно с помощью 2 электродов (рис. 1). В группе № 2 однократное воздействие на опухоль осуществляли с помощью 4 электродов одновременно (рис. 2). Воздействие проводилось мощностью 2 Вт при сопротивлении 350 Ом. В ходе манипуляции контролировалась температура тканей, которая составляла 80–100°С. Эффективность

Рис. 1. Схема расположения электродов по отношению к опухоли в группе экспериментальных животных № 1

Рис. 2. Схема расположения электродов по отношению к опухоли в группе экспериментальных животных № 2

лечебных воздействий оценивали на 21-е сут опыта, измеряя массу новообразования и подсчитывая процент торможения роста опухоли (ТРО) по формуле

А- В tpo =--100%,

А где А – средняя масса опухоли в контрольной группе; В – средняя масса опухоли в опытной группе.

Для определения интенсивности процесса метастазирования использовано несколько показателей: количество метастазов в легких (для каждого животного в группе и среднее значение); площадь метастатического поражения, которую рассчитывают по формуле πr ² , определяя при этом диаметр метастазов.

Частоту метастазирования опухоли вычисляли в процентах по отношению числа животных с метастазами к общему количеству мышей в группе. Индекс ингибирования метастазирова- ния (ИИМ), который позволяет оценить степень метастатического поражения, рассчитывали по формуле [1]

ИИМ = Л_к х В_к × 100 %, где А _к и А – частота метастазирования в лёгкие у мышей контрольной и опытной групп; В _к и В – среднее число метастазов в лёгких в контрольной и опытной группах.

В случае значительного поражения легочной ткани, когда регистрировалось большое количество метастатических узлов, оценивали степень метастатического поражения по шкале, предложенной D. Tarin, J.E. Price (1979) и позволяющей дифференцировать тяжесть поражения в зависимости от количества метастазов и их размеров. Выделяли низкую (LCP – low colonization potential: 1 степень – <10 узлов и 2 степень – от 10 до 30) и высокую (HCP – high colonization potential: 3 степень – >30 узлов, отсутствуют сливные узлы; 4 – <100, есть сливные и 5 – >100 узлов) степень поражения легких. По окончании экспериментов мышей умерщвляли, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденные Министерством здравоохранения РФ.

Результаты и обсуждение

У мышей контрольной группы (без воздействий) объём опухоли закономерно повышался на протяжении всего эксперимента. В основной группе № 1 обнаружена тенденция к уменьшению массы опухолевого узла в 1,5 раза по сравнению с контролем. Процент торможения роста опухоли составил 33 %. Частота метастазирования, количество и площадь метастазов в данной группе достоверно не отличались от таковых в контроле, при этом 37,5 % мышей имели более высокую – 3 степень поражения, тогда как в контроле этот показатель составил 8,3 % (табл. 1, 2).

В группе № 2 применение деструктора вызвало достоверное торможение опухолевого роста (65 %), а масса опухоли уменьшилась в 2,9 раза. Кроме того, в данной группе отмечалось снижение количества метастазов в легкие – в 1,6 раза по сравнению с аналогичными значениями в контроле, в 2,6 раза уменьшилась площадь

Влияние режимов РЧА на развитие карциномы легких Льюис (Х ± m)

Таблица 1

Группы сравнения	Масса опухоли, г	Торможение роста опухоли, %	Частота метастазирования, %	Кол-во метастазов на 1 мышь	Площадь метастазов на 1 мышь, мм2	ИИМ, %
Контроль	2,36 ± 0,35	-	100	22,58 ± 3,55	17,99 ± 5,46	-
РЧА, режим № 1	1,57 ± 0,25	33	100	24,38 ± 2,96	21,61 ± 7,74	-8
РЧА, режим № 2	0,82 ± 0,13*	65	100	14,00 ± 2,62**	7,02 ± 1,99	38

Примечание: * – различия статистически значимы по сравнению с группой контроля (p<0,01); ** – различия статистически значимы по сравнению с группой контроля (p<0,05).

Влияние режимов РЧА на тяжесть метастатического поражения легких у экспериментальных животных

Таблица 2

Группа сравнения	Степень поражения легких метастазами, %
	Нет метастазов	LCP		HCP
		1	2	3	4	5
Контроль	-	16,7	75	8,3	-	-
РЧА, режим № 1	-	25	37,5*	37,5*	-	-
РЧА, режим № 2	-	33,3	66,7	-	-	-

Примечание: * – различия статистически значимы по сравнению с группой контроля (p<0,05).

метастазов. Все животные имели 1-ю и 2-ю степень метастатического поражения, индекс ингибирования метастазирования составил 38 % (табл. 1, 2).

Объём опухоли у животных в обеих основных группах на 7-е сут имел выраженную

—ф. - группа контроля —■—деструкция, №1 —*—деструкция, №2

Рис. 3. Динамика роста объема перевиваемой опухоли в сравниваемых группах экспериментальных животных тенденцию к уменьшению. При этом наиболее существенно он уменьшился в группе № 2, в которой отмечались лишь некротические участки на месте расположения опухоли. Несмотря на то, что на 21-е сут после трансплантации опухоли её объём в обеих экспериментальных группах вновь стал увеличиваться, он всё ещё статистически значимо отличался от группы контроля (рис. 3).

Заключение. Таким образом, в эксперименте на мышах-самках линии С57Вl/6 с карциномой лёгких Льюис показано, что воздействие на первичную опухоль радиочастотными токами с использованием 4 электродов одновременно приводит к достоверному торможению роста первичного опухолевого узла и снижению количества отдаленных метастазов. Полученные данные позволяют говорить о перспективности применения РЧА у пациентов с первичными и метастатическими опухолями печени как в плане лечения опухоли, так и в плане предупре- ждения отдаленного метастазирования. Вместе с тем небольшое количество наблюдений требует проведения дальнейших экспериментальных и клинических исследований.