Экспрессия C/D МЯКРНК в клеточных линиях лейкоза при хромосомных аномалиях после облучения

Все чаще в роли регуляторов экспрессии генов выступают некодирующие РНК (нкРНК). Одними из них являются малые ядрышковые РНК (мякРНК), их подавление или экспрессия может привести к различным патогенезам, в том числе онкогенезу [1]. Первые исследования мякРНК начались более 50 лет назад [2]. Это консервативный класс нкРНК, участвующих в модификации (метилирование рибозы и псевдоуридилирование), процессинге и сборке рРНК. мякРНК длиной от 60 до 300 нуклеотидов делятся на два основных бокса в зависимости от структуры и функции: C/D мякРНК, участвующие в 2’-модификации О-метилирования рибосомной РНК; и H/ACA мякРНК, ответственные за псевдоуридилирование рРНК [2, 3].

В данной работе мы рассмотрели экспрессию C/D мякРНК, имеющих длину от 50 до 100 нуклеотидов и характеризующихся своими консервативными мотивами: бокс C/C’ (RUGAUGA) и D/D’. Они взаимодействуют с белками SNU13, NOP56, NOP58 и метил трансферазой фибрилла-рином (FBL) с образованием C/D мякРНП (англ. snoRNP, малый ядрышковый рибонуклеопротеин). C/D мякРНК необходимы для модификации рРНК. Однако многие из них не имеют идентифицированной канонической модификации мишени и называются орфанными мякРНК, некоторые мякРНК также были описаны как управляющие модификацией матричных РНК (мРНК), расширяющих границы потенциальных РНК мишеней [4, 5]. Множество функций C/D мякРНК еще предстоит открыть [5]. Имеются данные, что H/ACA бокс и C/D бокс – эволюционные предки подмножества предшественников микроРНК [6, 7]. В работе M. Ono et al. [6] протестированы предшественники микроРНК, бокса C/D мякРНК (miR-27b, miR-16-1, mir-28, miR-31 и let-7g), они связываются с фибрил-ларином, специфическим белковым компонентом функционального бокса C/D мякРНП комплекса [8]. Недавние исследования выявили аномальную экспрессию и продемонстрировали ключевую роль мякРНК и их генов-хозяев в различных типах гематологических и других злокачественных новообразований [8–13].

мякРНК могут не только регулировать клеточные процессы, но и модулировать радиочувстви- тельность или радиорезистентность клеток [14]. Хорошо известно, что лучевая терапия является одним из основных методов лечения онкологических заболеваний. Было обнаружено, что GAS5 модулирует радиационный ответ путем нацеливания miR-205-5p на путь Wnt/β-catenin и регулирует апоптоз и жизнеспособность клеток после облучения [15]. GAS5 также повышает радиочувствительность в нескольких моделях за счет нацеливания на miR-106b, которая неспособна ингибировать ген IER3, немедленного раннего ответа, супрессора рака шейки матки [16]. В результате радиочувствительность повышала сверхэкспрессию GAS5. В другом исследовании также создавали радиочувствительное состояние клеток рака легких при сверхэкспрессии семейства miRNAslet-7, а снижение экспрессии этого семейства вызывало радиорезистентность [17]. В следующей работе показаны результаты, при которых днкРНК (англ. lncRNA, длинная некодирующая РНК) SNHG12 способствала экспрессии CDK1 для регуляции чувствительности клеток рака шейки матки к радиации при помощи miR-148a, что дает возможность использовать SNHG12 как биомаркер при данном заболевании [18].

В этих и других исследованиях [14, 19–21] подчеркиваются важность некодирующих РНК при онкогенезе и их влияние на чувствительность клеток к лучевой терапии. Есть ряд исследований, показывающих роль микроРНК и длинных некодирующих РНК в ответ на облучение при различных видах рака [22–24]. Но на сегодняшний момент мало данных об участии C/D мякРНК семейства в клеточном ответе на облучение.

Цель исследования – изучить экспрессию C/D мякРНК ((англ. snoRNA) малые ядрышковые РНК) в хромосомах с разным уровнем нарушений и оценить возможность их использования в качестве биомаркеров радиорезистентности при хромосомных аномалиях.

Материал и методы

В работе использовали клеточные линии промиелоцитарного лейкоза человека HL-60 (RRID:CVCL_0002) и хронического миелоидного лейкоза человека К562 (RRID:CVCL_0004) (Институт цитологии РАН, г. Санкт-Петербург). Клетки культивировали в следующих условиях: 37 °С, 5 % CO2, 98 % влажности. Использовали среду RPMI-1640 с L-глутамином (ПанЭко, Россия), с добавлением 50 мкг/мл гентамицина (ПанЭко, Россия) и 10 % эмбриональной бычьей сыворотки (PAA Laboratories GmbH, Австрия).

Клетки облучались в дозе 4 Гр γ-излучением (энергия фотонов 10 МэВ), линейным ускорителем «Elekta Synergy» (Elekta, Швеция) 55 сек, при комнатной температуре. Эксперимент проводили в логарифмической фазе роста клеток. Тотальную РНК выделяли из клеток через 1, 4 и 24 ч после облучения набором Absolutely RNA miRNA Kit (Agilent Technologies, США). Библиотеки кДНК готовили с использованием набора NEBNext Small RNA Library Prep Set (NEB, Великобритания). Их очистку осуществляли в 6 % полиакриламидном геле с помощью электрофореза. Количество кДНК оценивали флуориметром «Qubit» (Invitrogen, США). Затем отбирали эквимолярные количества (2 нМ) образца для пула библиотек. Секвенировали с помощью системы высокопроизводительного секвенирования «MiSeq System» (Illumina, США), применяя набор для одноконцевого чтения 150 п.н. Обработку полученных файлов FASTQ осуществили при помощи сервиса GenXPro omiRas. Величину экспрессии С/D мякРНК выражали через log2 отношения нормализованной экспрессии мякРНК в опыте к аналогичному показателю в контроле (log2fc).

Для определения локализации С/D мякРНК в хромосомах использовали базу данных National Center for Biotechnology Information Search data base (RRID:SCR_006472).

Эксперимент проводили в трех повторах. Для оценки статистической значимости различий применяли критерий Манна‒Уитни, обработка проводилась в программе Origin. Различия между группами считали достоверными при р<0,05.

Эти материалы и методы описаны более подробно в наших предыдущих статьях [25–27], где рассматривались другие классы некодирующих РНК.

Результаты

Количество экспрессирующихся C/D мякРНК через 1, 4 и 24 ч в каждой хромосоме после облучения 4 Гр, в двух клеточных линиях изображено на рис. 1. Через 1 ч мы наблюдаем одинаковое количество C/D мякРНК в 1, 2, 4, 5, 6, 9, 10, 12, 16, 17, 18, 22 и XX хромосоме. В 3, 7, 8, 11, 15, 19 и 20-й хромосоме количество C/D мякРНК выше в клеточной линии HL-60, причем в 15-й хромосоме больше в 2,5 раза. Только в 14-й хромосоме количество экспрессирующихся C/D мякРНК через 1 ч выше в клеточной линии K562.

Че+рез 4 ч после облучения одинаковое количество C/D мякРНК остается в 1, 2, 4, 5, 6, 10, 12, 16, 17, 18, 22 и XX хромосоме, в 9-й их количество стало выше, как и в 3, 7, 8, 11, 15,19 и 20-й хромосоме в HL-60 клеточной линии. В 15-й хромосоме количество C/D мякРНК в 7 раз выше в HL-60 по сравнению с K562. Количество C/D мякРНК больше в К562 только в 14-й хромосоме.

После облучения через 24 ч мы наблюдаем одинаковое количество C/D мякРНК в обеих клеточных линиях в 4, 6, 8, 10, 12, 18, 19 и XX хромосоме. В HL-60 количество C/D мякРНК выше, чем в K562, в 3, 7, 15-й (в 2 раза) хромосоме. В 1, 2, 9,

Хромосомы (1-22, XX) /

Chromosomes (1-22, XX)

Рис. 1. Количество экспрессирующихся C/D мякРНК после облучения в каждой хромосоме K562 и HL-60 (* – p<0,05 при сравнении с группой через час после облучения, # – p<0,05 при сравнении между K562 и HL-60 клеточными линиями). Примечания: ось абсцисс – номер хромосом; ось ординат – количество экспрессирующихся C/Dмяк РНК после облучения;

рисунок выполнен авторами

Fig. 1. The number of expressed C/D snoRNAs after irradiation in each chromosome K562 and HL-60 (* – p<0.05 when compared with the group 1hour after irradiation). Notes: Abscissa axisis a chromosome number; ordinate axis is a number of expressed C/D snoRNAs after irradiation; created by the authors

Рис. 2. Общее количество C/D мякРНК в K562 и HL – 60 клеточных линиях (в контроле и после облучения через 1, 4 и 24 ч). Примечания: A – количество по клеточным линиям; Б – сравнение между клеточными линиями; рисунок выполнен авторами Fig. 2. The total number of C/D snoRNA in K562 and HL – 60 cell lines (in control and after irradiation at 1 hour, 4 and 24 hours).

Notes: A – amount by cell lines, B – comparison between cell lines; created by the authors

11, 14, 16, 17, 20, 22-й хромосоме после облучения через 24 ч экспрессирующихся C/D мякРНК стало больше в клеточной линии K562. Статистически значимые отличия получены в основном при сравнении групп после 24 ч облучения с группами через 1 ч облучения внутри клеточных линий, а также в 7, 8, 9, 14, 15, 17, 19, 20, 22-й хромосоме между клеточными линиями в основном через 4 и 24 ч.

На рис. 2 показаны изменения в общем количестве C/D мякРНК после облучения через 1, 4 и 24 ч. У клеточной линии K562 в контроле (рис. 3A) количество C/D мякРНК не меняется в течение всего времени, а после облучения разница с контролем небольшая: в контроле через 24 ч – 133 C/D мякРНК, а через 24 ч после облучения– 121 C/D мякРНК. В клеточной линии HL-60 на этом же рисунке мы наблюдаем уменьшение C/D мякРНК как в контроле (на 41), так и после облучения (на 43) через 24 ч по сравнению с количеством C/D мякРНК через 1 и 4 ч. На рис. 2Б показано общее количество C/D мякРНК в обеих исследуемых клеточных линиях в контроле и после облучения. Как в контроле, так и после облучения через 1 и 4 ч общее количество C/D мякРНК практически не меняется, через 24 ч она снижается на 30 % в контроле и на 33 % после облучения. Данное снижение количества C/D мякРНК происходит за счет клеточной линии HL-60. Несмотря на то, что количество экспрессирующихся C/D мякРНК в данной клеточной линии изначально больше, но с течением времени оно меняется как в контроле через 24 ч, так и после облучения через 24 ч.

На рис. 3 представлены графики разброса значений log2fc всех экспрессирующихся C/D мякРНК в клеточных линиях HL-60 и К562, распределенных в соответствии с их локализацией в хромосомах, после облучения в дозе 4 Гр через 1, 4 и 24 ч. Через 1 ч (рис. 3А) после облучения в культуре K562 отмечается разброс log2fc в диапазоне от -1,75 до +2. При этом особо выделяется положительная экспрессия C/D мякРНК в 6 (max log2fc=1,4) и 17-й (max log2fc =2) хромосоме и отрицательная в 2, 11 и 19-й хромосоме (min log2fc= -1,75; -1,25 и -1,5, соответственно). Другая картина наблюдается в культуре HL-60 (рис. 3Б). Здесь значения log2fc варьируются в диапазоне от -0,7 до 2. Положительная экспрессия C/D мякРНК наблюдается в хромосомах 3, 15 и 17 (max log2fc = 1,9; 2 и 1,5, соответственно). Однако в половине хромосом фиксируется незначительная отрицательная экспрессия C/D мякРНК.

Через 4 ч после облучения (рис. 3В) в культуре K562 наблюдается разброс log2fc в диапазоне от -2 до +3,5. Положительная экспрессия C/D мякРНК наблюдается в большинстве хромосом, однако фиксируется отрицательный log2fc (в пределах от -1 до -2) для хромосом 2, 5, 11 и 19. Для культуры HL-60 (рис. 3Г) характерна другая картина, диапазон разбросов log2fc от -1,2 до +2,2. Положительная и/или отрицательная экспрессия C/D мякРНК наблюдается во всех хромосомах (большинство значений в диапазоне от -0,5 до +0,7), кроме 10, 13, 16, 18 и 21-й. Отдельно стоит отметить 15-ю хромосому, в которой экспрессия отдельных C/D мякРНК варьирует от минимального до максимального значения для всех групп в целом.

После облучения через 24 ч (рис. 3Д) в обеих культурах наблюдается противоположная картина. Если в культуре K562 можно увидеть в большинстве хромосом экспрессию C/D мякРНК с отрицательным log2fc (min log2fc=-3), то в культуре HL-60 (рис. 3Е) в большинстве хромосом положительная экспрессия и log2fc (max log2fc=+3,2). При этом особо выделяется отрицательная экспрессия C/D мякРНК в хромосомах 3, 9, 12 и 19 в культуре K562 и положительная экспрессия C/D мякРНК в 3, 15 и 17-й в культуре HL-60.

Таким образом, при анализе изменения log2fc всех экспрессирующихся C/D мякРНК после облучения дозой 4 Гр, в течение 1, 4 и 24 ч в культуре

1   3   5   7   9 11 13 15 17 19 21 X

Хромосомы (1-22, X); 1 ч / Chromosomes (1-22, X); 1 h

Хромосомы (1-22, X); 1 ч / Chromosomes (1-22, X); 1 h

Хромосомы (1-22, X); 4 ч / Chromosomes (1-22, X); 4 h

т—'————1——'————'——’—I—'——1——'—Г"

1   3   5 7 9 11 13 15 17 19 21

Хромосомы (1-22, X); 4 ч /

Chromosomes (1-22, X); 4 h

Хромосомы (1-22, Х);24ч / Chromosomes (1-22, X);24h

Хромосомы (1-22, Х);24ч / Chromosomes (1-22, X);24h

Рис. 3. Log2FC дифференциально экспрессирующихся C/D мякРНК через 1, 4 и 24 ч после облучения в дозе 4Гр в K562 и HL-60 клеточных линиях, в каждой хромосоме. Величину экспрессии С/D мякРНК выражали через log2 отношения нормализованной экспрессии мякРНК в опыте к аналогичному показателю в контроле (log2fc). Примечания: ось абсцисс – номер хромосом; ось ординат – экспрессия бокса C/Dмяк РНК после облучения, через 1, 4 и 24 ч; рисунок выполнен авторами

Fig. 3. Log2FC differentially expressed C/D snoRNA 1, 4 and 24 hours after irradiation at a dose of 4Gr in K562 and HL-60 cell lines, in each chromosome. The C/D snoRNA expression was determined by log2 ratio between the normalized snoRNA expression in the experiment and that in the control (log2fc). Notes: abscissa axis is a chromosome number; ordinate axis – expression of C/Dbox snoRNA 1 hour, 4 and 24 hours after irradiation; created by the authors

K562 можно отметить увеличение экспрессии C/D мякРНК в 6 и 17-й хромосоме и уменьшение во 2, 5, 11 и 19-й хромосоме через 1 ч, с последующим сохранением данных показателей через 4 ч и значительным снижением экспрессии C/D мякРНК в большинстве хромосом через 24 ч. В культуре HL-60 в первый час после облучения отмечается увеличение экспрессии C/D мякРНК в 3, 15 и 17-й хромосоме с частичным сохранением показателей в 15 и 17-й хромосоме и снижением экспрессии отдельных C/D мякРНК в 3 и 17-й хромосоме через 4 ч. Однако через 24 ч картина возвращается к первоначальному виду.

На рис. 4 представлена экспрессия отдельных C/D мякРНК, выраженная через log2FC к контролю. Здесь были выбраны хромосомы для сравнения с разным уровнем хромосомных аберраций в исследуемых клеточных линиях. В 3, 6 и 11-й хромосоме наблюдалась экспрессия одинаковых C/D мякРНК в обеих клеточных линиях, но с раз-

Рис. 4. Log2FC C/D мякРНК в 3, 6, 11 и 15-й хромосоме в K562 и HL-60 клеточных линиях (* – p<0,05 при сравнении с группой через 1 ч после облучения). Примечания: ось абсцисс – время после облучения (1, 4 и 24 ч); ось ординат – значения Log2FC C/D мякРНК после облучения; рисунок выполнен авторами

Fig. 4. Log2FC C/D snoRNA in the 3rd, 6th, 11th and 15th chromosomes in K562 and HL-60 cell lines (* – p<0.05 when compared with control groups without irradiation, # – p<0.05 when comparing expression between K562 and HL-60 cell lines). Notes: abscissa axis – time after irradiation (1, 4 and 24 hours); ordinate axis – Log2FC C/D values of snoRNA after irradiation; created by the authors ными значениями log2FC. Так, в культуре K562 в 3-й хромосоме (рис. 4А) has-sno-snR39B имеет значение +0,9 в первый час с последующим снижением до -1 через 24 ч. В культуре HL-60 для has-sno-snR39B отмечается log2FC в первый час +1,4 с последующим снижением в течение следующих часов до +0,7 и повышением до +1,7 через 24 ч после облучения. мякРНК hsa-sno-HBII-142, как и hsa-sno-E2 в 3-й хромосоме культуры K562, не показывают значительных отклонений от первоначальных значений (для hsa-sno-HBII-142 log2FC в области +0,75, для hsa-sno-E2 – -0,25). Однако в культуре HL-60 другая тенденция. Так, hsa-sno-HBII-142 с первоначального значения log2FC -0,2 через 1 ч после облучения снижается до -0,7 через 4 ч и снова повышается до +0,1 через 24 ч. Для hsa-sno-E2 в культуре HL-60 зависимость аналогична более выраженной экспрессии через 24 ч. В случае с hsa-sno-E3 картина обратная. В культуре K562 в первые 4 ч отмечаются повышение экспрессии мякРНК до log2FC=+2 и резкое снижение в течение следующих 20 ч до log2FC=-2,75. В культуре HL-60 подобного не наблюдается, и значение log2FC сохраняется в пределах от -0,1 до -0,2 в течение всех 24 ч после облучения.

В 6-й хромосоме (рис. 4Б) особое внимание стоит уделить следующим мякРНК: hsa-sno-U52; hsa-sno-U83; hsa-sno-U48 и hsa-sno-U50B). Так, в культуре K562 среди hsa-sno-U52; hsa-sno-U83; hsa-sno-U48 наблюдается похожая тенденция – увеличение экспрессии в первые 4 ч с последующим снижением через 24 ч, особенно hsa-sno-U83, где значение log2FC снижается с +1,25 до -1,75 за 20 ч. В культуре HL-60 подобного не отмечается, все значения log2FC для мякРНК остаются в пределах первоначальных значений (log2FC (hsa-sno-U83)=+0,3; log2FC (hsa-sno-U48)=-0,3) за исключением hsa-sno-U52, где log2FC сначала падает (+0,1), а затем возрастает через 24 ч (+0,3). Также в культуре HL-60 отмечается колебание log2FC для hsa-sno-U50B: увеличение в первые 4 ч до +0,6 с последующим возвращением к первоначальному значению +0,4.

В 11-й хромосоме (рис. 4В) в культуре K562 hsa-sno-U29; hsa-sno-U27; hsa-sno-U97; hsa-sno-U26; hsa-sno-U25; hsa-sno-U22; hsa-sno-U15B демонстрируют похожую закономерность – увеличение в первые 4 ч с последующим снижением через 24 ч от начала облучения. Log2FC мякРНК hsa-sno-U31; hsa-sno-U25; hsa-sno-U14B прослеживается эта же тенденция с увеличением экспрессии через 24 ч относительно 1 ч после облучения. В культуре HL-60 экспрессия hsa-sno-U97; hsa-sno-U30; hsa-sno-U29; hsa-sno-U22; hsa-sno-U14B похожа, но отличается от культуры K562. В первые 4 ч после облучения отмечается снижение экспрессии с последующим увеличением (hsa-sno-U97; hsa-sno-U29; hsa-sno-U22) или возвратом к первоначальным значениям (hsa-sno-U30; hsa-sno-U14B) после облучения через 24 ч. При этом log2FC hsa-sno-U15B; hsa-sno-U25;

hsa-sno-U27; hsa-sno-U28 не претерпевает значительных колебаний после облучения в течение 24 ч, а hsa-sno-U26 и hsa-sno-U31 претерпевают сначала увеличение экспрессии через 4 ч, затем уменьшение через 24 ч.

В 15-й маркерной хромосоме (рис. 4Г) у K562 всего 3 C/D мякРНК: hsa-sno-U18A; hsa-sno-U18B и hsa-sno-U18C. У hsa-sno-U18A и hsa-sno-U18B одинаково повышается экспрессия в первые 4 ч, а затем снижается через 24 ч после облучения, особенно это выражено у hsa-sno-U18B. В HL-60 – 16 C/D мякРНК: hsa-sno-U18A, hsa-sno-U18C, hsa-sno-U18B, hsa-sno-HBII-13, hsa-sno-HBII-85-8, hsa-sno-HBII-85-3, hsa-sno-HBII-85-9, hsa-sno-HBII-85-1, hsa-sno-HBII-85-6, hsa-sno-HBII-85-2, hsa-sno-HBII-85-24, hsa-sno-HBII-85-23, hsa-sno-HBII-85-16. При этом у hsa-sno-HBII-13 log2FC резко падает с +2,25 до +0,5 в первые 4 ч после облучения, а затем возрастает до +2,75 через 20 ч. Log2FC hsa-sno-U18A также уменьшается в первые 4 ч (-1,25) и возрастает в последующие 20 ч (+0,5). Log2FC hsa-sno-HBII-85-24 возрастает через 4 ч после облучения (+2,25) и возвращается к первоначальному значению через 20 ч (+1,25). Экспрессия остальных мякРНК остается в пределах log2FC через 1 ч после облучения.

Обсуждение

В наших исследованиях C/D мякРНК в большем количестве экспрессируется в клеточной линии HL-60, клетках с меньшим количеством геномных аномалий. Клеточная линия HL-60 обладает умеренной радиочувствительностью и небольшими геномными аномалиями [28]. В основном мякРНК бокс C/D образует, по крайней мере, 10 пар оснований полной комплементарности, и их модификация сильно ингибируется несоответствиями внутри этой области [29]. Значит, чем больше хромосомных аномалий, тем меньше консервативных модификаций, так как меньше экспрессирующихся C/D мякРНК, как в случае с K562. К562 является менее радиочувствительной и имеет 15 мутаций и 21-ю маркерную хромосому [30]. После облучения в дозе 4 Гр мы наблюдали, что количество C/D мякРНК в клеточной линии K562 в контроле не меняется в течение 24 ч, а после облучения количество незначительно падает (рис. 2A). В то время как в HL-60 и в контроле, и после облучения через 24 ч число C/D мякРНК уменьшается примерно на 25 %. Можно сделать вывод, что, несмотря на одинаковое воздействие, количество положительно и отрицательно экспрессирующихся C/D мякРНК после облучения разное при рассмотрении значений log2FC в каждой хромосоме в каждой точке эксперимента.

В наших работах мы уже рассматривали влияние хромосомных нарушений на экспрессию всех мякРНК, включающих два основных бокса H/ACA и C/D [25], и влияние хромосомных аномалий на экспрессию мякРНК бокса H/ACA [27] после радиационного воздействия в вышеупомянутых клеточных линиях. В клеточной линии HL-60 в целом наблюдали приблизительно одинаковый разброс положительных и отрицательных значений log2fc, можно отметить небольшое преобладание положительной экспрессии в ходе всего эксперимента, в K562 мы наблюдали переход из большего числа положительно экспрессируемых мякРНК через 4 ч в отрицательные значения log2fc через 24 ч. Похожую картину мы наблюдали и в этой работе, но в ходе эксперимента в клеточной линии HL-60 в основном была отмечена положительная экспрессия С/D мякРНК. Так же, как и здесь, мы наблюдали большее количество экспрессирующихся мякРНК в клеточной линии HL-60 и экспрессию одинаковых мякРНК в нормальных хромосамах. C/D мякРНК в большем количестве (около 70 %) экспрессируются в данных клеточных линиях, поэтому они нами были выбраны для более детального изучения в этом эксперименте. В другой своей работе [26] мы рассматривали влияние хромосомных нарушений на экспрессию микроРНК после облучения в дозе 4 Гр. В целом, как и в данном эксперименте, нами были выявлены похожие закономерности, а именно преобладание нкРНК в клеточной линии HL-60 и связь уменьшения их количества при большем наличии хромосомных аберраций в К562. Исследования не противоречат друг другу, и так же, как и в случае с C/D мякРНК, мы видим как положительные, так и отрицательные значения log2FC в течение всего эксперимента. С/D мякРНК являются предшественниками микроРНК [6], которые на сегодняшний момент больше изучены в роли регуляторов онкогенов.

В настоящее время, несмотря на стремительной рост исследований C/D мякРНК, мало данных по влиянию их экспрессии на радиочувствительность. Но, как и с микроРНК, можно предполагать, что они на разных уровнях экспрессии при раке могут вызывать разные эффекты, такие как повышенная чувствительность к лучевой терапии либо резистент- ность к ней, что затрудняет лечение [31]. Возможно, многие мишени в будущем можно будет объединить с лучевой терапией для изменения радиочувствительности клеток и прогноза заболевания, но при этом надо учитывать хромосомные аномалии в каждом конкретном случае. Эпигенетическая регуляция достаточно сложно устроена, и необходимо накопить данные для окончательных выводов использования C/D мякРНК в качестве биомаркеров.