К видовому составу анаэробной и аэробной микрофлоры остеомиелитического очага

Облигатные анаэробные микроорганизмы принимают участие в развитии большинства гнойно-воспалительных процессов, в том числе при остеомиелите [1, 9]. Значительную роль играют неспорообразующие анаэробные (НА) микроорганизмы при инфекциях мягких тканей [3]. Как правило, НА инфекции имеют эндогенное происхождение, т.е. вызываются условнопатогенными микроорганизмами, подавляющее большинство которых – представители нормальной микрофлоры организма человека, доминирующее положение среди которых принадлежит анаэробным бактериям. Так, в ротовой полости соотношение анаэробов и аэробов составляет 10:1, в женских половых органах – 100:1, в толстом кишечнике 1000:1 [2].

Диагностика неспорообразующих анаэробов сложна и трудоемка, требует дорогостоящей техники, специальных питательных сред и соот- ветствующей подготовки персонала. Это приводит к тому, что микробиологическая диагностика НА инфекций, с учетом выделения бактерий-анаэробов, в большинстве медицинских учреждений практически не налажена. Из-за этого недооценивается роль неклостридиальной инфекции, которая, будучи нераспознанной и не-леченной, приводит к затяжному течению или генерализации процесса, к ошибкам в этиологической диагностике, что сказывается на качестве лечения больных и составляет проблему госпитальных инфекций. Как для бактериологов, так и для клиницистов проблема борьбы с НА инфекцией – одна из наименее изученных.

Целью настоящего исследования явилось выявление видового состава анаэробных и аэробных микроорганизмов остеомиелитического очага.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В течение 2001 г. обследовано 16 больных с посттравматическим хроническим остеомиелитом, лечившихся в отделении гнойной ортопедии РНЦ «ВТО». Возраст больных составлял от 19 до 49 лет. Было обследовано 22 пробы гнойного отделяемого ран и свищей, некротизированных участков мягких тканей и одна проба костного фрагмента. Материал для исследования доставлялся в лабораторию в течение 30 мин. после взятия образца с соблюдением условий анаэробиоза. В качестве транспортной использовали среду «СКС – 199». Доставленный материал в лаборатории исследовался микроскопическими и культуральными методами, обеспечивающими выращивание как аэробной, так и анаэробной микрофлоры. Изучение морфологических особенностей микроорганизмов в материале от больных проводили с использованием световой микроскопии (микроскоп МБИ15). Культуральные особенности изучали с помощью стереоскопического микроскопа (МБС-1). Выделение и идентификацию аэробных и факультативно-анаэробных бактерий проводили в соответствии с общепринятыми методиками [7]. Анаэробные бактериальные культуры выделяли согласно руководству [5], при этом анаэробные условия для культивирования посевов создавали с помощью микроанаэростата “GENBAG – GENBOX anaer” фирмы “bioMe-rieux” (Франция). Идентификацию выделенных штаммов осуществляли с использованием автоматического бактериологического анализатора “ATB Expression” той же фирмы.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

При микробиологическом обследовании больных хроническим посттравматическим остеомиелитом с использованием как традиционных методов аэробного культивирования, так и анаэробной техники было выделено 65 клинических штаммов бактерий.

Использование анаэробной техники и методов культивирования позволило выявить строгие анаэробы в 59,1 % изученных проб. Анаэробные микроорганизмы найдены у 10 больных из 16 обследованных, что составило 62,5%. По полученным результатам, анаэробы были представлены грамотрицательными палочками и кокками (роды Bacteroides, Veillonella ), грамположитель-ными кокками (род Gemella ), грамположитель-ными палочками, не образующими спор (род Actinomyces ) и грамположительными споровыми палочками (род Clostridium ) (табл. 1).

Наиболее часто из остеомиелитического очага выделялись бактероиды (47 % случаев). Судя по имеющимся литературным данным, эти анаэробы – обычные возбудители гнойновоспалительных заболеваний различной локализации [3, 6]. В работе Колкер и Борисовой по исследованию микрофлоры гнойных ран приводятся сведения о том, что основными представителями НА как в монокультуре, так и в ассоциациях являлись бактерии рода Bacteroides , которые обнаруживались у 69,8 % больных [3].

Заслуживает внимания факт обнаружения гемелл (G. morbillorum) в гнойном отделяемом и мягких тканях у 18,8 % обследованных больных. Бактерии рода Gemella выделены в ранг самостоятельного рода относительно недавно. В справочной литературе по бактериологии информация о гемеллах скудна и нередко указывается, что эти бактерии не имеют медицинского значения. Однако в последние годы появились сообщения о выделении гемелл при остеомиелитах и артритах в разных странах мира [10, 11]. В связи с этим, роль гемелл в этиологии гнойновоспалительных заболеваний опорнодвигательного аппарата требует дальнейшего всестороннего изучения.

Кроме перечисленных выше НА у 2 больных было выделено по одному штамму Actinomyces и Veillonella . Известно, что как вейллонеллы, так и актиномицеты самостоятельно обычно не вызывают развития патологических процессов, но могут входить в состав смешанных групп патогенов либо вызывать вторичные инфекции (абсцессы мягких тканей, раневые инфекции и септические состояния) при иммунодефицитных состояниях [4], которые характерны для больных хроническим остеомиелитом.

Спорообразующие анаэробные бактерии рода Clostridium были выделены у 4 пациентов из 16. Следует отметить, что в отличие от НА инфекций, клостридиозы, как правило, имеют экзогенное происхождение.

Характерной особенностью микрофлоры остеомиелитического очага у обследованных больных являлась многокомпонентность микробных ассоциаций. Ни в одной из исследованных проб анаэробы не были обнаружены без ассоциативной аэробной микрофлоры. Таким образом, у всех больных инфекционный процесс носил смешанный аэробно-анаэробный характер. Многокомпонентность микробных ассоциаций обусловлена в большей мере разнообразием видов аэробной микрофлоры, чем анаэробной. Как правило, НА в микробной ассоциации были представлены 1-2 видами, и лишь у одного больного выделено 3 вида.

Изученная аэробная и факультативноанаэробная микрофлора остеомиелитического очага представлена 18 таксонами (табл. 2). Всего было выделено 48 штаммов. По морфологии это были грамположительные и грамотрица-тельные палочки и кокки.

Использование автоматической системы идентификации “ATB Expression” позволило выявить наряду с традиционно выделяемыми при хроническом остеомиелите Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus трудно диагностируемые виды стафилококков: S. inter-medius, S. xylosus, S. chromogenes . Последние 3 вида имеют ряд физиологических отличий от вышеназванных, а также специфическую анти-биотикограмму. Наряду со стафилококками у 3 больных были выделены стрептококки. Другие изученные аэробные грамположительные бактерии относились к родам Bacillus и Corynebacte-rium .

Аналогично результатам предыдущих исследований [8], среди выделенных аэробных гра-мотрицательных бактерий превалировали синегнойная палочка (12,5 %) и протей (8,3%). Вместе с тем значительно возрос удельный вес

Serratia marcescens (6,2%). Серрации ранее считали непатогенными, позднее их стали выделять при госпитальных бактериемиях и пневмониях, септических артритах, эндокардитах и остеомиелитах. Важной особенностью серраций, как и синегнойной палочки, является способность бактерий к горизонтальной передаче через руки медицинского персонала.

Таким образом, у 62,5% обследованных больных хроническим посттравматическим остеомиелитом были обнаружены анаэробные микроорганизмы, среди которых преобладали бактероиды. Основной особенностью гнойновоспалительных процессов в остеомиелитическом очаге с участием неспорообразующих анаэробов является их полимикробный характер, обусловленный как анаэробными, так и аэробными микроорганизмами. Выделение и идентификация неспорообразующих анаэробов осуществлены в РНЦ «ВТО» впервые; полученные результаты послужат основой для дальнейших исследований.

Таблица 1.

Видовой состав анаэробной микрофлоры, выделенной у больных хроническим остеомиелитом

Таблица 2.

Видовой состав аэробной и факультативно-анаэробной микрофлоры, выделенной у больных хроническим остеомиелитом