К вопросу о подготовке амниотической мембраны в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций роговицы
Автор: Александрова О.и, Гаврилюк И.О., Машель Т.В., Черныш В.Ф., Чурашов С.В., Куликов А.Н., Блинова М.И.
Журнал: Саратовский научно-медицинский журнал @ssmj
Рубрика: Глазные болезни
Статья в выпуске: 2 т.15, 2019 года.
Бесплатный доступ
Цель: определить необходимую подготовку амниотической мембраны (АМ), позволяющую использовать ее в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций (БИК). Материал и методы. Нативную АМ иммобилизировали в специальном зажимном устройстве и подвергали дополнительной механической, термической и ферментативной обработке: удаляли остатки слизи с ее поверхности, проводили криоконсервирование АМ-скаффолдов при -80оС, -20оС и их децеллюляризацию 0,25 %-м раствором смеси Tripsin-EDTA. Прижизненную оценку морфологии культивируемых на АМ- скаффолдах клеток осуществляли под инвертированным микроскопом Nikon Eclipse TS100, оснащенным фотокамерой. Жизнеспособность и метаболическую активность клеток АМ определяли посредством МТТ-теста с помощью планшетного спектрофотометра АИФР-01 УНИПЛАН (Пикон, Россия) при длине волны 570 нм и референсной длине волны 620 нм. Результаты. Установлено, что присутствие на поверхности нативной АМ остатков слизи, не удаляющихся при стандартной механической обработке, негативно влияет на выживаемость клеточной тест-системы. Определена возможность криоконсервации АМ-скаффолдов, а также выявлено позитивное влияние процессов их криоконсервации и ферментативной децеллюляризации на жизнеспособность культивируемых на скаффолдах клеток. Заключение. Стандартная механическая обработка нативной АМ не гарантирует полную очистку ее поверхности от остатков слизи, которые мешают адгезии и равномерному распределению культивируемых клеток. Необходимо достоверно контролируемое удаление слизи поверхности АМ перед их иммобилизацией и дальнейшими манипуляциями. Криоконсервация и последующая децеллюляризация АМ-скаффолдов способствуют увеличению жизнеспособности клеточной тест-системы. Оптимальным из исследуемых субстратов для культивирования клеток оказались АМ-скаффолды, очищенные от амниотической слизи, прошедшие криоконсервацию при -80оС в смеси DMEM-F12 и DMSO (1:1) и ферментативную децеллюляризацию после размораживания.
Амниотическая мембрана, культивирование клеток, роговица
Короткий адрес: https://sciup.org/149135313
IDR: 149135313
Список литературы К вопросу о подготовке амниотической мембраны в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций роговицы
- Черныш В. Ф., Бойко Э. В. Ожоги глаз: Состояние проблемы и новые подходы. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2017; 184 с.
- Burman S, Tejwani S, Vemuganti GK, et al. Ophthalmic applications of preserved human amniotic membrane: a review of current indications. Cell and tissue banking 2004; 5 (3): 161-75
- Lavker RM, Tseng SCG, Sun TT. Corneal epithelial stem cells at the limbus: looking at some old problems from a new angle. Experimental eye research 2004; 78 (3): 433-46
- Гаврилюк И. О., Александрова О. И., Хорольская Ю. И. и др. К вопросу о заборе, выделении и культивировании стволовых клеток эпителия слизистой полости рта. Современные технологии в офтальмологии 2018; (4): 60-3
- Дубовиков А. С., Безушко А. В., Гаврилюк И. О. и др. Исследование возможности применения культивированных на амниотической мембране лимбальных эпителиальных эпителиальных стволовых клеток для лечения лимбальной недостаточности в эксперименте. Современные технологии в офтальмологии 2017; (4): 72-5
- Дубовиков А. С., Безушко А. В., Куликов А. Н. и др. О применении культивированных на амниотической мембране стволовых клеток роговичного эпителия для устранения лимбальной недостаточности в эксперименте. Практическая медицина 2017; 2 (9 (110)): 67-71
- Nakamura T, Inatomi T, Sotozono C, et al. Ocular surface reconstruction using stem cell and tissue engineering. Progress in retinal and eye research 2016; 51: 187-207
- Ситник Г. В. Современные клеточные биотехнологии в офтальмологии: Амниотическая мембрана как субстрат для культивирования стволовых эпителиальных клеток. Медицинский журнал 2006; (4): 16-9
- Абрамова И. А., Бойко Э. В., Черныш В. Ф. Об использовании амниотической мембраны с целью конъюнктивальной пластики в эксперименте. Офтальмохирургия 2004; (3): 8-12
- Endo KI, Nakamura T, Kawasaki S, Kinoshita S. Human amniotic membrane, like corneal epithelial basement membrane, manifests the alpha-5 chain of type IV collagen. Investigative Ophthalmol 2004; 45 (6): 1771-4
- Solomon A, Rosenblatt M, Monroy D, et al. Suppression of interleukin 1alpha and interleukin 1beta in human limbal epithelial cells cultured on the amniotic membrane stromal matrix. Br J Ophthalmol 2001 85 (4): 444-9
- Мурзабекова Ф. А. Двойное кератоамниопокрытие в системе хирургического лечения язвенных процессов роговицы: автореф. дис. … канд. мед. наук. М., 2007; 25 c.
- Jirsova K, Jones GLA. Amniotic membrane in ophthalmology: properties, preparation, storage and indications for grafting: a review. Cell and tissue banking 2017, 18 (2): 193- 204
- Kubo M, Sonoda Y, Muramatsu R, Usui M. Immunogenicity of human amniotic membrane in experimental xenotransplantation. Invest Ophthalmol Vis Sci 2001; 42 (7): 1539-46.
