Клинико-морфологические особенности рака толстой кишки в зависимости от молекулярных параметров первичной опухоли

Распространенность онкологического заболевания определялась согласно международной классификации TNM (7 издание). У 10 (10%) пациентов была установлена I стадия заболевания, у 18 (18%) — IIА стадия, у 14 (14%) — IIB стадия, у 13 (13%) — IIС стадия, у 7 (7%) — IIIA стадия, у 35 (35%) — IIIB стадия и у 3 (3%) — IIIC стадия. Хирургическое лечение было выполнено всем пациентам в объеме гемиколонэктомии или резекции кишки. В послеоперационном периоде 46 пациентов получили по показаниям различные варианты адъювантного лечения, в соответствии с клиническими рекомендациями. Морфологическому исследованию подвергался операционный материал. Исследование проводилось с помощью светового микроскопа фирмы AxioScope A1 Carl Zeiss). Учитывалась макроскопическая форма опухоли, глубина ее прорастания, края резекции, проводилось исследование всех лимфатических узлов на предмет метастатического поражения. Диагноз устанавливался согласно «Гистологической классификации опухолей желудочно-кишечного тракта» (ВОЗ, 2010).

Определялась принадлежность опухоли к гистологическому типу. У 87 (87%) больных опухоль была неспецифической аденокарциномой толстой кишки различной степени дифференцировки, у 13 (13%) пациентов — муцинозная аденокарцинома. Изучение различных молекулярных параметров рака толстой кишки проводили на парафиновых срезах опухолевой ткани иммуногистохимическим способом. Исследование выполнялось по стандартной методике на автоматическом иммуногистостейнере Bond MAX (Leica Biosystem). При исследовании применяли следующие антитела к Ki-67 (Clone SP6, RTU), к онкопротеину р53 (Clone CM1, 1:150), к Bcl-2 (Clone Bcl2/100/D5, рабочее 1:80), Anti-Beclin 1 antibody, (кроличьи поликлональные, рабочее р 1:100), Rabbit Anti-human m-TOR Polyclonal (кроличьи поликлональные, 1:100). Анализ полученных данных проводился методами описательной статистики, дисперсионного анализа, непараметрического критерия χ2 с использованием пакета программ Statistica 10.0. Различия между исследуемыми признаками считались статистически значимым при уровне p < 0,05.

Результаты: На первом этапе исследования был проведён анализ частоты встречаемости и особенностей экспрессии молекулярных маркеров в зависимости от ряда клиникоморфологических параметров. Было показано, что экспрессия всех изученных белков в опухоли существенно не зависела от возраста и пола пациентов, гистологического типа новообразования. При дальнейшем анализе пациенты были разделены на подгруппы в зависимости от локализации опухоли в правой или левой половине толстой кишки: у 28 больных опухоль диагностирована в правой половине, а у 72 пациентов — в левых отделах толстой кишки. При оценке связи процента, наличия и уровня экспрессии белка регулятора аутофагии m-TOR значимых отличий в опухолях правой и левой половины толстой кишки обнаружено не было (F = 0,96, p = 0,34; χ ² = 0,33, p = 0,58; χ ² = 2,64, p = 0,25, соответственно). Однако анализ частоты экспрессии Beclin-1 в зависимости от локализации новообразования показал статически значимые отличия.

Так, в подгруппе больных с наличием опухоли в правой половине толстой кишки позитивная экспрессия Beclin-1 обнаруживалась в 94% случаев, в то время как при опухолях левой половины она составила 76% (χ 2 = 4,78, p = 0,04). Процент и уровень экспрессии белка Beclin-1 в опухоли не отличался в группах с локализацией опухоли в правой и левой половине толстой кишки (F = 0,85, p = 0,36 и χ 2 = 0,5 p = 0,87, соответственно). Важно отметить, что уровень экспрессии белков аутофагии существенно отличался при разной степени дифференцировки аденокарциномы толстой кишки. Наименьший процент экспрессии Beclin-1 и m-TOR наблюдался в низкодифференцированных карциномах (p = 0,006 и p = 0,002 соответственно). Зависимости между уровнями экспрессии Beclin-1 и m-TOR и глубиной инвазии опухоли обнаружено не было (χ 2 = 0,5, p = 0,07 и χ 2 = 0,6, p = 0,7 соответственно). Также не было обнаружено связи между уровнем экспрессии протеина р53 и антиапоптоти-ческого белка Bcl-2 и глубиной инвазии опухоли (χ 2 = 1,3, p = 0,39 и χ 2 = 2,18; p = 0,39, соответственно). Однако уровень пролиферативной активности в опухолевых клетках был сопряжен с глубиной инвазии опухолью. В тех случаях,

ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ когда регистрировалась высокая пролиферация (индекс Ki-67 > 70 %) инвазия ограничивалась мышечным слоем. При снижении пролиферативной активности чаще отмечено распространение опухоли за пределы мышечного слоя стенки кишки (p = 0,001). Наличие некроза в опухоли, как известно неблагоприятного прогностического признака, было сопряжено с высокими уровнями экспрессии белка аутофагии m-TOR (χ 2 = 9,26, p = 0,009), онкопротеина р53 (χ 2 = 6,3, p = 0,04) и высоким уровнем пролиферативной активности (F = 4,5, p = 0,043). Наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах является важным фактором прогноза при раке толстой кишки. В связи с чем представляло интерес проанализировать изучаемые молекулярные паттерны в опухоли с частотой развития данной формы опухолевой прогрессии. Согласно нашим данным индекс пролиферативной активности был сопряжен с частотой лимфогенного метастазирования. Так, в диапазоне уровня пролиферации от 35 до 70% (процент позитивно окрашенных опухолевых клеток) наблюдалась большая частота опухолевого поражения регионарных лимфатических узлов (p = 0,003). Снижение уровня экспрессии в опухоли m-TOR было связано с развитием метастазов в лимфатических узлах (p = 0,03), в то время как уровень экспрессии Beclin-1 существенно не различался в группах больных с наличием (N) и отсутствием регионарных метастазов (N -).

Заключение: Результаты проведенного исследования отчетливо показывают связь изученных молекулярных параметров аутофагии, апоптоза, пролиферативной активности клеток аденокарцином толстой кишки с клиническими и морфологическими параметрами новообразования. Ряд изученных маркеров имеет отличия в опухолях правой и левой половины толстой кишки, сопряжённость со степенью дифференцировки, глубиной инвазии в стенке кишки, наличием некроза опухоли. Полученные данные свидетельствуют, что снижение экспрессии белков-регуляторов аутофагии и уровень пролиферации в опухоли сопряжены с частотой лимфогенной диссеминации.