Кристаллографическое исследование ротовой жидкости в динамике местного лечения дезоксирибонуклеатом натрия пациентов с афтозным стоматитом

Рецидивирующий афтозный стоматит (РАС) – распространенное заболевание слизистой оболочки рта, характеризующееся одиночными или множественными болезненными и рецидивирующими афтами [1]. По данным последних исследований известно, что его распространенность в разных группах населения колеблется от 5 до 50 %, при этом средний показатель распространенности составляет 20 % и выше у молодых женщин [2, 3]. Афты полости рта весьма болезненны для пациентов, вызывают боль и жжение при приеме пищи, глотании и разговоре. Эти проблемы нарушают функции пациентов и значительно снижают качество жизни как у детей, так и у взрослых [4, 5].

На сегодняшний день причины возникновения РАС связывают с некоторыми предрасполагающими факторами, такими как психологические, гематологические, генетические, травматические и аллергические. Тем не менее этиология заболевания неизвестна. Таким образом, окончательного лекарства от этого заболевания не существует [6, 7]. Пока РАС активен, основной целью лечения является минимизация симптомов и отсрочка рецидива после заживления. Предполагается, что лечение РАС облегчит боль и жжение, сократит период заболевания и превенти-рует рецидив афт [7, 8].

Для лечения РАС были исследованы различные фармацевтические препараты в форме местного и системного действия. Среди препаратов для местного применения доступны различные варианты, в том числе антисептики, противовоспалительные средства, антибиотики и кортикостероиды.

Успешной и широко используемой группой для этой цели являются местные кортикостероиды [9, 10]. Хотя краткосрочное применение кортикостероидов обычно не вызывает побочных эффектов, их длительное применение может вызывать местные и системные побочные эффекты, такие как кандидоз, угнетение функции надпочечников, истончение слизистой оболочки, лекарственная устойчивость [11].

Так, обилие средств и способов для лечения РАС говорит о том, что высокоэффективного метода так и не существует на сегодняшний день, при этом на фоне пандемии COVID-19 произошел прирост данного заболевания. Из этого возникает острая потребность в разработке новых средств терапии и диагностики РАС.

Одним из доступных, неинвазивных методов диагностики является анализ кристаллической структуры ротовой жидкости, который позволяет оценить состояние полости рта и наличие воспалительного процесса [12].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Проанализировать кристаллограммы ротовой жидкости для оценки эффективности дезоксирибону-клета натрия в местном лечение пациентов с афтозным стоматитом.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Для реализации поставленной цели на базе кафедры стоматологии Института НМФО ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России было проведено обследование 60 пациентов с диагнозом К12.0 рецидивирующие афты полости рта, малые (МКБ 10) и было одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО ВолгГМУ Министерства здравоохранения РФ от 22.03.2021, справка № 2021/017. Критерием включения в исследование был клинический диагноз малый афтозный стоматит по классификации Стэнли (язвы размером менее 10 мм, расположенные на неороговевающих поверхностях слизистой оболочки, рецидивирующие с интервалом 1–4 месяца, заживление через 7–10 дней).

Критериями исключения были беременность, аллергические реакции на используемые препараты, хронические заболевания (например, гепатит, СПИД, глютеновая болезнь, дефицит IgA, диабет и т. д.) и прием лекарств (например, антибиотиков, противогрибковых препаратов, кортикостероидов, гормональной терапии и т. д.).

Всем пациентам проводили обследование до лечения, при необходимости назначали санацию полости рта, профессиональную гигиену полости рта, консультацию врача – стоматолога-ортопеда, устранение травмирующих фактор и консультацию врача-гастроэнтеролога, врача-иммунолога, врача-эндокринолога.

Пациентов распределили на 2 исследовательские группы по 30 человек. I группа получала общепринятую терапию (Национальное руководство под ред. Л. А. Дмитриевой, 2019 г.): аппликационная анестезия 10%-м раствором лидокаина; промывание слабыми антисептиками полости рта, снятие мягкого налета с поверхности слизистой оболочки рта и зубов; удаление некротических масс с применением фермента трипсина, 1 мг которого растворяют в 1 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида; адгезивная дентальная паста солкосерила по 10 минут 2–3 раза в день; имудон (6–8 таблеток в день). II группа применяла аппликации дезоксирибонуклеата натрия с лидокаином (Колегель-ДНК-Л) 2 раза в день по 20 минут на протяжении 10 дней. Методика заключалась в нанесении на предварительно очищенную афту геля с лидокаином, дезоксиробонуклеатом натрия на основе альгината натрия и последующее покрытие саморассавыющейся пленкой. Помимо этого, было проведено обследование ротовой жидкости группы здоровых лиц (контрольная группа) с применением клиновидной дегидратации, которая используется для определения структурно-пространственной организации всех биологических жидкостей организма и является скрининговым методом широко применяемым для получения нормативных параметров исследования, выявления патологических процессов и контроля лечения [13]. Данное исследование проводили до лечения и на 7-е сутки.

В качестве материала исследовали использовали ротовую жидкость, забор которой проводили натощак из-под язычной области. Материал подвергался дегидратации на строго горизонтальной поверхности обезжиренного предметного стекла в течение 24 часов в объеме капли 20 мкл. Исследование проводилось на базе кафедры анатомии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России с помощью лабораторного Микроскоп Leica DM 1000. Полученные изображения фаций ротовой жидкости анализировали с использованием качественных и количественных параметров на базе программы Видеотест Мор-фо. Качественный анализ включал описание общей кристаллографической картины, описание кристаллов, выявление маркеров патологии.

Для количественного анализа с расчетом статистических показателей использовали определение ширины кристаллической структуры (ШКС, мкм), длины кристаллической структуры (ДКС, мкм), ширины краевой зоны (ШКЗ, мкм), соотношение ширины центральной и краевой зон (СКЦ, у. е.).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯИ ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты анализа кристаллограмм контрольной группы пациентов продемонстрировали четкое разделение пространств фаций на центральную и периферическую зоны. В центральной зоне минеральные вещества образовывали множественные древовидные и папоротникообразные кристаллы с ответвлениями I и II порядка. В периферической зоне присутствовали преимущественно белковые компоненты, которые формировали так называемые «крылья бабочки» (рис. 1).

На кристаллограммах пациентов с РАС до лечения в ходе качественного анализа были выявлены размытые, нечеткие граница между периферической и центральной зонами, резкие нарушение с кристаллопостроением как белковой составляющей фации, так и минеральной. В центральной части кристаллы имели фрактальный характер, а в периферической зоне фации определились единичные, хаотичные, короткие трещины (рис. 2).

а

Рис. 1. Кристаллограмма пациента контрольной группы: а – периферическая зона фации; б – центральная зоны фации

б

Рис. 2. Кристаллограмма пациента с РАС до лечения

Через 7 дней от начала лечения в полости рта сохранялись афты на стадии эпителизации в обеих группах. В I группе, где применяли общепринятую схему лечения, граница между центральной и периферической зонами была выражена нечетко. У края фации были видны тонкие отрывистые трещины, также определились по площади фасции мелкозернистые гранулы и древовидные кристаллы (рис. 3).

Показатель ширины краевой зоны достоверно отличался от первоначального значения ( р < 0,05), но при этим, этот же параметр наряду со значениями длины кристаллической структуры, соотношения ширины центральной и краевой зон имели статистическое различие с цифрами аналогичных параметров контрольной группы ( р < 0,01).

Во II группе после 7 дней местной терапии РАС с применением геля «Колегель-ДНК-Л» также при анализе кристаллической картины наблюдались признаки воспаления. Граница между зонами была выражена слаба, в области краевой зоны наблюдались множественные трещины, местами обрывистые и хаотично направленные, также в ходе анализа фаций были обнаружены мелкозернистые гранулы, а в центральной зоне присутствовали дефектные закристаллизованные структуры (рис. 4).

Количественный анализ показал достоверно значимую разницу параметров длины кристаллической структуры и ширины краевой зоны по отношению к первоначальным значениям ( р < 0,05), помимо этого, значение ДКС [(40,92 ± 0,73) мм] были в 1,1 раз больше относительно I группы [(36,72 ± 0,67) мм].

Однако II группа имела достоверную разницу ширины краевой зоны с контрольной группой ( р < 0,01) (см. табл.).

Рис. 3. Кристаллограмма пациента I группы на 7-й день лечения

Рис. 4. Кристаллограмма пациента II группы на 7-й день лечения

Сравнительный количественный анализ фаций пациентов

Количественный параметр	ШКС, мм	ДКС, мм	ШКЗ, мм	СКЦ, у. е.
Контроль	2,07 ± 0,05	42,89 ± 0,76	47,26 ± 0,55	0,85 ± 0,01
До лечения	1,79 ± 0,08	34,28 ± 1,56**	78,32 ± 2,48**	2,37 ± 0,27**
I группа	1,84 ± 0,05	36,72 ± 0,67**	63,37 ± 1,37*,**	2,18 ± 0,19**
II группа	1,97 ± 0,06	40,92 ± 0,73*	55,38 ± 0,94*,**	1,42 ± 0,38

Примечание: * – достоверность различий по отношению к показателю до лечения, р ˂ 0,05; ** – достоверность различий по отношению к показателю контроля, р ˂ 0,01.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Кристаллографическое исследование пациентов с РАС позволило исследовать ротовую жидкость и выявить признаки воспаления до лечения, а также сохраняющиеся нарушения и на 7-й день терапии. На основании полученных результатов качественного анализа можно заключить, что в группе, где применяли дезоксирибонуклеат натрия, на 7-й день наблюдалось больше упорядоченных кристаллических структур относительно кристаллограмм I группы. Количественный анализ на основании параметров длины кристаллической структуры и соотношения ширины центральной и краевой зон продемонстрировал отсутствие достоверной разницы значений II группы от контрольной группы в отличии от показателей I группы.

На основании чего можно заключить, что кристаллографическое исследование позволило доказать эффективность применения дезоксирибонуклеата натрия в местной терапии РАС, но данное исследование требует необходимости изучения отдаленных сроков наблюдения при помощи метода клиновидной дегидратации.