Липидный спектр сыворотки крови и некоторые показатели клеточного иммунитета при сальмонеллёзном и остром алкогольном гастроэнтеритах

Введение. В настоящее время выделяют инфекционный и острый гастроэнтерит, развивающиеся в результате употребления крепких алкогольных напитков (Varela-Rey et al., 2013). Алкоголь и сальмонеллёз могут приводить к поражению пищеварительной системы (de Menezes et al., 2013). Таким образом, помимо инфекционной этиологии, причиной гастроэнтеритов может быть токсическое влияние алкоголя (Swanson et al., 2010; Ddine, Colpo, 2012).

Целью настоящей работы было исследование корреляционных связей липидов сыворотки крови и некоторых показателей клеточного иммунитета у больных при сальмонеллёзном и остром алкогольном гастроэнтерите.

Материал и методика. Исследовали корреляционную зависимость липидного спектра сыворотки крови и CD3, CD4, CDg, CD19 лимфоцитов, индекса CDVCDg у 30 больных острым алкогольным гастроэнтеритом (ОАГЭ) и 30 пациентов больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом (СГЭ).

Критериями включения в исследование больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом служили: (1) лабораторно подтвержденный (бактериологическим или серологическим методом) диагноз сальмонеллеза, (2) среднетяжелое течение заболевания, (3) поступление больного в стационар в 1-3-й день болезни, (4) добровольное согласие пациентов на участие и использование результатов их обследования. Из исследования исключались: бактерионосители сальмонелл, больные с тяжелым течением сальмонеллеза, больные, у которых от начала заболевания прошло более 3 суток, а также пациенты с хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта и тяжелой сопутствующей патологией (сахарный диабет, нарушение функции печени, почек, онкологические процессы) и хроническими воспалительными заболеваниями в фазе обострения.

Алкогольный гастроэнтерит - это неинфекционный гастроэнтерит (К 52.1), связанный с токсическим действием алкоголя (Т 51) (Международная..., 1995). Все больные острым алкогольным гастроэнтеритом, поступившие в стационар после значительной алкогольной нагрузки, заболели остро и отрицали наличие хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта. В группу вошли пациенты с отрицательными результатами обследования на сальмонеллы, шигеллы, эшерихии, кампилобактерии, ротовирусы, энтеровирусы и норовирусы.

Липиды выделяли по Фолчу (1957) и фракционировали модифицированным методом (Макаров, 2004) с определением процентного содержания минорных липидных компонентов сыворотки крови одновременно с основными липидными фракциями с применением метода денситометрии и современного высокоточного денситометра Shimadzu CS-9000 (Япония).

Общие липиды определяли по Маршу (1966). Изучено относительное содержание следующих фракций общих липидов: общих фосфолипидов (ФЛ), свободного холестерина (СХ), свободных жирных кислот (СЖК), триглицеридов (ТГ), эфиров холестерина (ЭХ); фракций общих фосфолипидов: суммарных лизофосфолипидов (ЛФЛ), сфингомиелина (СМ), фосфатидилхолина (ФХ), фосфатидилэтаноламина (ФЭ). Результаты содержания каждого липида выражались в процентах относительно уровня общих липидов, а фракций фосфолипидов - относительно уровня общих фосфолипидов.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием компьютерных программ Excel и Biostat. Исследовалась линейная корреляция, критерий Стьюдента. Проведение работы одобрено этическим комитетом.

Результаты и обсуждение. Результаты сравнения исследуемых групп по среднему содержанию анализируемых показателей представлены в табл. 1-3.

Таблица 1

Липидный состав сыворотки крови у здоровых лиц, больных сальмонеллёзным и острым алкогольным гастроэнтеритами

Общие липиды	Показатели липидов (М±т) в отн. %
	больные сальмонеллёзным гастроэнтеритом (СГЭ) (п=50)	больные острым алкогольным гастроэнтеритом (ОАГЭ) (п=50)	Р
ФЛ	22,7±0,4	13,2±0,5	<0,001
сх	16,5±0,4	15,1+0,6	>0,05
сжк	6,4±0,2	6,0±0,3	>0,05
тг	22,6±0,5	29,5±0,6	<0,001
эх	31,2±0,6	34,1±1,0	<0,02

Примечание. Здесь и далее Р - достоверность различий показателей у больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом и больных острым алкогольным гастроэнтеритом.

Таблица 2 Характеристика фосфолипидного состава сыворотки крови у здоровых лиц, больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом и больных с острым алкогольным гастроэнтеритом

Фосфолипиды	Показатели фосфолипидов (М±т) в отн. %
	больные сальмонеллёзным гастроэнтеритом (СГЭ) (п=50)	больные острым алкогольным гастроэнтеритом (ОАГЭ) (п=50)	Р
ЛФЛ	15,0+0,5	30,3±0,7	<0,001
СМ	25,3+0,4	24,0±0,5	<0,05
ФХ	49,1+0,7	32,4+1,0	<0,001
ФЭ	10,4+0,4	12,9+0,3	<0,001

В результате исследования (табл. 4) у больных с сальмонеллёзным гастроэнтеритом не было обнаружено корреляционных связей между CD3, СВ4-лимфоцитами и процентным содержанием общих фосфолипидов, триглицеридов, эфиров холестерина, ЛФЛ, СМ и ФЭ.

Таблица 3 Показатели CD_3iCD₄ , СВ1₉-клеток, иммунорегуляторного индекса CD₄/CD₈ у больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом, острым алкогольным гастроэнтеритом и здоровых лиц

Показатель иммунитета	Группы обследованных (М±ш)
	больные сальмонеллёзным гастроэнтеритом (СГЭ) (п= 30)	больные острым алкогольным гастроэнтеритом (ОАГЭ) (п=30)	Р
CD3 (в %)	61,3+1,3	66,5±4,5	>0,05
CD4(b%)	53,2±4,8	54,2+5,1	>0,05
CD8(b%)	18,4+3,2	21,0+3,2	>0,05
СП4/СП8(ед.)	2,8±0,08	2,5±0,06	<0,01
CD19(b%)	10,5±0,7	8,1±0,5	<0,01

Таблица 4

Корреляционная зависимость между показателями CD3 CD4 , СВ19-клеток, иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 и липидного спектра сыворотки крови у больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом

Показатель	Коэффициент корреляции (г) с относительным (в %) содержанием липидных фракций
	ФЛ	СХ	СЖК	тг	ЭХ	Л ФЛ	СМ	ФХ	ФЭ
CD3 (в%)	0,21 р>0,05	0,56 р>0,05	0,52 р>0,05	-0,19 р>0,05	-0,12 р>0,05	-0,37 р>0,05	-0,05 р>0,05	0,78 р<0,01	0,11 р>0,05
cd4	0,16	0,65	0,45	-0,22	-0,11	-0,47	-0,06	0,69	0,15
(в%)	р>0,05	р<0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р<0,05	р>0,05
cd8	-0,48	0,50	-0,16	0,17	0,01	-0,12	-0,66	0,10	0,09
(в%)	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05
CD4/ CDg	0,11	0,40	0,53	-0,25	-0,31	-0,30	0,41	0,41	-0,10
	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05
cd19	0,56	0,06	-0,22	-0,43	-0,55	-0,67	0,27	0,57	0,69
(в%)	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р<0,05	р>0,05	р>0,05	р<0,05

Установлена средняя степень прямой корреляционной зависимости между CD3, СВ4-лимфоцитами и содержанием свободного холестерина и СЖК. Высокая степень корреляционной зависимости установлена только между уровнем CD3, СВц-лимфоцитов и фосфатидилхолина. Показатели CDg имели прямую среднюю степень корреляционных связей со СХ и обратную с ФЛ и СМ. С остальными липидными фракциями у CDg-лимфоцитов корреляционные связи отсутствовали.

Значения иммунорегуляторного индекса CD4/CDg имели среднюю степень корреляционной зависимости с СЖК. С остальными липидными фракциями корреляция была слабой или отсутствовала. Показатели CD 19 имели прямую среднюю степень корреляции с ФЛ, ФХ и ФЭ и обратную с ТГ, ЭХ и ЛФЛ. В остальных случаях корреляция была слабой или отсутствовала. Анализ корреляционных связей (табл. 5) у больных острым алкогольным гастроэнтеритом между уровнем CD лимфоцитами и липидами сыворотки крови показал наличие высокой степени обратной зависимости между CD3 клетками и ФЭ (г= -0,9). Средняя степень обратной корреляции установлена между CD3 лимфоцитами и свободным холестерином и прямая между CD3 клетками и содержанием ФХ.

Таблица 5

Корреляционная зависимость между показателями CD3, CD4, CD 19-клеток, иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 и липидного спектра сыворотки крови у больных острым алкогольным гастроэнтеритом

Показатель	Коэффициент корреляции (г) с относительным (в %) содержанием липидных фракций
	ФЛ	СХ	СЖК	ТГ	ЭХ	ЛФЛ	СМ	ФХ	ФЭ
CD3	0,24	-0,63	-0,11	0,19	-0,51	-0,19	-0,47	0,51	-0,90
(в%)	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р<0,001
С04	-0,13	-0,86	-0,57	0,63	-0,70	0,33	-0,21	0,14	-0,46
(в%)	р>0,05	р<0,01	р>0,05	р<0,05	р<0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05
cd8	-0,91	0,06	-0,02	0,81	0,42	0,02	0,90	-0,82	0,57
(в%)	р=0,001	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р=0,001	р<0,01	р>0,05
CD4/ CD8	0,26	-0,82	-0,52	0,16	-0,27	-0,30	-0,16	0,55	-0,72
	р>0,05	р<0,01	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р<0,05
cd19	0,37	-0,31	-0,08	0,40	-0,51	0,04	-0,46	0,49	-0,60
(в%)	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05	р>0,05

Содержание СХ, ЭХ и CD4 лимфоцитов имело высокую степень обратной корреляционной связи. То есть чем ниже уровень CD4 в крови, тем выше содержание свободного и эфиров холестерина. Средняя степень корреляционной зависимости была установлена между CD4 клетками и СЖК, ТГ и ФЭ. Причем для триглицеридов корреляционная зависимость была прямой. Высокую степень корреляции с CDg лимфоцитами имели такие фракции липидного спектра, как ФЛ, ТГ, СМ и ФХ. Причем с ФЛ и ФХ корреляционная связь CDs клеток была обратной, а с ТГ и СМ - прямой. То есть, чем выше содержание CDg клеток, тем ниже уровень фосфатидихолина. Это может служить доказательством прямого участия CD§ лимфоцитов (супрессоров) в биохимических процессах, протекающих на биомембранах и в сыворотке крови. Вммунокомпетентные клетки, таким образом, активно участвуют в патогенезе токсического, алкогольного поражения желудочно-кишечного тракта.

Между иммунорегуляторным индексом CD4/CD8 и уровнем свободного холестерина и фосфатидилэтаноламина выявлена высокая степень обратной корреляции. Остальные липидные и фосфолипидные фракции имели среднюю или слабую степень корреляционной зависимости с данным индексом. У больных с острым алкогольным гастроэнтеритом наблюдалась средняя степень прямой корреляционной связи показателей CD 19 лимфоцитов и ФХ и обратной с ЭХ, СМ и ФЭ.

Прямая корреляция средней степени между содержанием СХ, СЖК и уровнем CD4 лимфоцитов у больных сальмонеллёзным гастроэнтеритом, вероятно, отражает нарушение процессов этерификации холестерина и гидролизных связей глицерофосфолипидов в результате чего образуются свободные жирные кислоты (Макаров, Стариков, 2010). CDs лимфоциты у больных острым алкогольным гастроэнтеритом, возможно, активируют сфингомиелинлипазу, что проявляется в виде обратной корреляционной зависимости между CDs лимфоцитами и сфингомиелином и напоминает ситуацию по СМ при онкозаболеваниях (Макаров и др., 2007). Поскольку основная функция CD 19 лимфоцитов заключается в выработке антител, то и обратная зависимость между CD 19 клетками и фосфатидилэтаноламином у больных острым алкогольным гастроэнтеритом может быть следствием дестабилизирующего действия антител на мембрану энтероцитов.

Алкоголь оказывает угнетающее действие на клеточный иммунитет (Макаров, 2002), снижает содержание CD3 лимфоцитов; чем ниже данный показатель, тем ниже уровень ФХ в сыворотке крови. Уменьшение содержания CD3, CD4 и CD19 лимфоцитов и значений иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 может приводить к уменьшению уровня ФЭ в биомембанах и увеличению его в крови. Иммунологические реакции, таким образом, являются основой появления такого маркёра острого отравления этиловым алкоголем, как фосфатидилэтаноламин (Jain et al., 2014). Высокие обратные корреляционные связи CDs лимфоцитов и общих фосфолипидов отражают прямое отрицательное влияние данного кластера лимфоцитов на процентное содержание ФЛ, что показано в предыдущих исследованиях (Макаров, Погорельская, 2015).

Заключение. Иммунологическое действие CD клеток осуществляется через биохимические процессы, отражением чего является изменение процентного состава липидного спектра сыворотки крови. Воспалительный процесс при сальмонеллёзном гастроэнтерите, индуцированный CD клетками, может происходить через изменение липидного состава клеточных мембран, что отражается в изменении липидного спектра сыворотки крови.

Токсическое действие алкоголя опосредуется через CD лимфоциты, по-видимому, за счёт растворения алкоголем их мембран или ингибирования гастроэнтерите гастроэнтериту

эндогенных липаз. При остром алкогольном наблюдаются альтернативные сальмонеллёзному корреляционные связи показателей клеточного иммунитета и липидного спектра сыворотки крови.

Макаров П.В. Липидный спектр сыворотки крови и некоторые показатели клеточного иммунитета при сальмонелезном и остром алкогольном гастроэнтеритах / П.В. Иакаров, Л.В. Погорельская // Вести. ТвГУ. Сер.: Биология и экология. 2016. № 1. С. 47-54.