Липидпероксидация и гемостаз у аскорбатзависимых животных при их содержании на рационе без аскорбата, с его дефицитом и избытком

Автор: Шаповалова Е.М.

Журнал: Известия Самарского научного центра Российской академии наук @izvestiya-ssc

Рубрика: Экологическая физиология и биохимия

Статья в выпуске: 1-4 т.11, 2009 года.

Бесплатный доступ

Рассмотрены различия в реакции липидпероксидации и гемостаза у аскорбатзависимых и аскорбатнезависимых организмов на отсутствие, дефицит и избыток витамина С в питании. Обсуждается значение этих данных в выбор доз витамина С при лечении заболеваний, протекающих с явлениями гипероксидации и наклонностью к ускоренному тромбинообразованию.

Аскорбат. липидпероксидация, гемостаз

Короткий адрес: https://sciup.org/148198429

IDR: 148198429

Текст научной статьи Липидпероксидация и гемостаз у аскорбатзависимых животных при их содержании на рационе без аскорбата, с его дефицитом и избытком

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Несмотря на большое число наблюдений, одни из которых свидетельствует о влиянии акорбата на коагулоактивность тромбоцитов [1, 14, 32], другие – о его влиянии на уровень отдельных, нередко единичных, про- или антикоагулянтов [26, 27, 28, 33, 34], остаются неясным, как отсутствие, дефицит и избыток в питании витамина С сказывается на готовности организма адекватно реагировать на воздействия, изменяющие тромбиногенез, следовательно, и наклонность к кровоточивости или к тромбофилии [2, 12, 36]. Приблизиться к решению этой проблемы представляется возможным при соблюдении таких условий: 1. Использовать в опытах аскорбатзависимых животных (в противном случае результаты опытов нельзя относить к человеку), 2. Использовать в опытах рацион, сбалансированный по макро - и микронутриентам, так как эффект витаминов существенно зависит от полноценности питания [25, 32], 3. Контролировать гемостаз тестами, позволяющими оценить непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (ТкТР), изменения которых указывают на развитие наклонности к тром-бообразованию или к кровоточивости. 4. Наряду с оценкой гемостаза важно контролировать состояние липидпероксидации в тромбоцитах, так как изменения этого процесса в них модифицирует гемостаз [8], в то время как аскорбат проявляет себя в малых лозах в качестве антиоксиданта, а в больших - прооксиданта, следовательно, этим может определяться дозазависимость эффекта аскорбата на свертываемость крови [9, 18].

Цель нашей работы - изучить динамику изменений НВСК, коагулоактивности тромбоцитов, толерантности к тромбину (ТкТР), липидпероксидации (ЛПО) и антиоксидантного потенциала (АОП) тромбоцитов в отсутствие, при дефиците и избытке витамина С в рационе аскорбатзависимых и независимых от него животных.

Шаповалова Елена Михайловна , кандидат фарма-цевти-ческих наук, доцент кафедры аналитической и органической химии. Тел (345-2) 92-10-64

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Опыты проведены на морских свинках-самцах (294, 272 ± 27 г) - корректном объекте для моделей С-гипо- и С-авитаминоза [17, 23] и аскорбатнезави-симых белых крысах. В связи с зависимостью гемостаза от метеофакторов и сезона [7] во все опыты включали контрольную группу. Содержали свинок на рационе, обеспечивающем прогрессирующий прирост массы тела и приплод: сено, свёкла, овес, морковь, печеный хлеб, молоко, дрожжи и водопроводная вода - полноценный рацион [13]. Содержание витамина С в суточной порции такого рациона (по результатам определений) составляет 5.5 мг/кг массы тела, что близко к расчетной величине, установленной по таблицам химического состава пищевых продуктов. Рацион без витамина С содержал те же продукты, но сено, свёклу и морковь предварительно автоклавировали, а молоко -кипятили (согласно рекомендациям Всесоюзной конференцией по витаминам, М., 1934). После обработки витамин С в составе рациона не находили - это С-авитаминный рацион . Как С-гиповитаминный рацион использовали С-авитаминный , ежедневно добавляя к нему 25, 50 или 75% аскорбата от суточной потребности (т.е. от 5.5 мг на кг массы тела в сутки). Источниками витамина А и каротина в С-авитаминном рационе являлись морковь, молоко и сено, практически не разрушающиеся при использованной обработке [21]. Суточную потребность в витаминах группы В, РР и D обеспечивали высушенные на свету дрожжи (0.4 г/кг массы тела). Источник витамина Е - овес (его количество в рационе не ограничивали). Такие рационы использовались ранее при изучении гемостаза [3, 5,14]. При изучении эффекта нагрузок аскорбатом свинкам вводили на фоне полноценного рациона его двух-, трёх-, четырехкратные и бόльшие суточные дозы аскорбата (водный раствор глазной пипеткой в полость рта в утренние часы).

Крысы получали сбалансированный казеиново-крахмальный рацион, содержащий минералы и витамины в соответствии с суточной потребностью [16]

Пробы крови брали в шприц с 3,8% раствором цитрата натрия (9:1 по объему) из обнаженной v. jugularis у наркотизированных и фиксированных на препаровочном станке животных. Рану закрывали 2-3 швами (кетгут). В плазме крови определяли содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ), отражающее интенсивность НВСК [3, 12, 20, 30]: 1. Продукты деградации фибрина (ПДФ) - маркеры ВТФ [36] - определяли по описанию [6], 2. Уровень растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ), увеличивающийся при росте гемокоагуляции [26, 36], определяли фенантролиновым тестом [18], 3. Уровень D-димеров - маркеры фибринообразования [9, 30] - устанавливали латексной агглютинацией (набор «D-dimertest», Roche), 4. Уровень ф. Р ₃ в плазме - по Rabiner & Groder в описании [2]. 5.Ф. Р 4 – также по описанию [2]. Факторы Р 3 и Р 4 - косвенные маркеры ВТФ, их уровень в плазме пропорционален уровню тромбина, ускоряющего реакцию высвобождения тромбоцитов [27], 6. Концентрацию в плазме осаждаемого тромбином фибриногена (её снижение при других признаках ускоренного ВТФ свидетельствует об активации НВСК [36]) - определяли спектрофотометрически [4].

Толерантность к тромбину устанавливали согласно патенту [8] методом, основанным на оценке степени снижения в плазме уровня фибриногена, осаждаемого тромбином. Расчет - по формуле, приведенной в описании к патенту.

Перекисное окисление липидов в тромбоцитах и их антиоксидантный потенциал оценивали, определяя: 1. Содержание первичных липидпероксидов - диеновых конъюгат (ДК), 2. Содержание вторичных липидпероксидов - продуктов, взаимодействующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), 3. Период индукции (ПИ) и 4. Скорость окисления (СО).

Использовали изолированные и отмытые тромбоциты [22]. Количество диеновых конъюгат (ДК) устанавливали по оптической плотности ( λ = 232 нм) гептановой фазы. Количество продуктов, реагирующих с тоиобарбитуровой кислотой (ТБК-продукты), определяли флуорометрически [24]. Интенсивность флуоресценции возбуждения определяли при помощи флуориметра «Биан 130». Кинетические величины прямого инициированного окисления липидов молекулярным О ₂ в присутствии динитрилазобисизомаслянной кислоты (инициатора свободнорадикального окисления) также определяли в экстрактах. Выражали период индукции (ПИ) как время, затрачиваемое на поглощение пробой 25 мм ³ О 2 , а скорость окисления (СО) – углом наклона линейного участка кинетической кривой. Схемы опытов - перед описанием каждой серии (и в таблицах).

АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ

Математическую обработку результатов прово- дили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [11], используя вариационную статистику для малых рядов наблюдений и вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (m) и среднеквадратическое отклонение (σ). Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование, рассчитывая такие же статистические показатели. Различия считали достоверными при значениях р < 0.05.

В работе использованы : 1. Тромбин и фибриноген бычьей крови («Технология-стандарт»), 2. Тромбопластин (кадаверный лиофильно высушенный, «Технология-стандарт»). 3. Каолин (легкая фракция фирмы «Технология-стандарт»), 4. Набор «D-dimer test» («Roche»), 5. Изопропанол - ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), 6. Хлорбензол - ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), 7. Бутанол – х. ч., 8.Ацетат свинца х.ч. 9. Хлорид кальция х.ч. 10. Буфер Михаэлиса «Технология-стандарт», 11. Витамин С (Hemofarm D.D.)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Схема и результаты опытов 1-й серии представлены табл. 1, где видно, что без аскорбата в рационе у животных уже через 2 недели в тромбоцитах растет уровень липидпероксидов. Сокращение периода индукции (ПИ) выявилось через 4 и заметнее через 6 и 8 недель от начала опыта. Рост скорости индуцированного окисления (СО) и рост уровня липидпероксидов обнаруживается через 4 недели, прогрессируя до конца наблюдений. При поступлении с рационом аскорбата в количестве, составляющем 25% от потребности, динамика сдвигов ЛПО сохраняется, однако прирост уровня липидпероксидов менее выражен. С увеличением количества аскорбата до 50% и особенно до 75% от потребности замедление прироста липидпероксидов ещё значительнее. Так, при количестве, составляющем 75% от потребности, сдвиги обнаруживаются лишь через 8 недель, не превышая найденных через 2 недели на фоне питания С-авитаминным рационом.

С увеличением количества витамина С в рационе (в 2 раза выше потребности - 11.0 мг/кг) уже через 4 недели падает в тромбоцитах уровень ДК, ТБК и скорость окисления, удлиняется период индукции (ПИ). После 6 и особенно 8 недель от начала опыта сдвиги в том же направлении усиливаются (заметнее снижается уровень ДК, ТБК и удлиняется ПИ, заметнее снижалась и скорость окисления).

С увеличением количества аскорбата в 4 раза от потребности отклонения до 6-й недели не выявлялись, а через 8 недель уровень липидпероксидов ДК и ТБК оказался выше контрольных значений, сократился период индукции, и повысилась ско- рость окисления. При введении аскорбата в количестве, превышающем потребность в 8 раз, тенденция роста содержания липидпероксидов и скорости окисления, наряду с тенденцией к укорочению периода индукции, выявились через 6 недель, и отклонение в этом случае оказалось выше, чем при 4- кратной дозе аскорбата после 8 недель введения. Примерно такие же сдвиги вызвало 16-кратное количество витамина С в рационе, однако появлялись они быстрее - после 6 недель (исключение составил только сдвиг периода индукции, который обнаружился лишь после 8 недель опыта).

Таблица 1. Изменения ЛПО и АОП в тромбоцитах морских свинок неполучавших витамина С, получавших его в количестве, равной потребности, ниже потребности и в превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (строки 1,2, 3 и 4 - соответственно после 2, 4, 6 и 8 недель)

Показатели

Контроль (получали аскорбат по 5.5 мг/кг), n=10

Животные (n – 5 на каждом этапе) получали АК (мг/кг массы тела) в дозах:

0.0

1.375

2,75

4,125

11,0

22,0

44,0

88,0

ДК, А/мг ЛП

0.079 ± 0.0

0.083 ± 0.002*

0.086 ± 0.004*

0.097 ± 0.004*

0.099 ± 0.005*

0.082 ± 0.005

0.083 ± 0.006

0.089 ± 0.004*

0.094 ± 0.005*

0.080 ± 0.007

0.081 ± 0.006

0.084 ± 0.003*

0.086 ± 0.003*

0.079 ± 0.004

0.077 ± 0.005

0.080 ± 0.002

0.083 ± 0.004*

0.074 ± 0.007

0.069 ± 0.009*

0.063 ± 0.005*

0.059 ± 0.006*

0.078 ± 0.009

0.083 ± 0.008

0.079 ± 0.011

0.086 ± 0.009*

0.081 ± 0.009

0.077 ± 0.007

0.074 ± 0.007

0.089 ± 0.004*

0.076 ± .0.005

0.077 ± 0.004

0.084 ± 0.008*

0.090 ± 0.008*

ТБК, ед./мг ЛП

0.47 ± 0.02

0.48 ± 0.01

0.53 ± 0.04*

0.58 ± 0.02*

0.62 ± 0.03*

0.48. ± 0.01

0.51 ± 0.04

0.56 ± 0.02*

0.61 ± 0.10*

0.47 ± 0.01

0.51 ± 0.02

0.55 ± 0.06

0.57 ± 0.03*

0.48 ± 0.09

0.45 ± 0.07

0.47 ± 0.08

0.52 ± 0.02*

0.50 ± 0.03

0.43 ± 0.04*

0.40 ± 0.03*

0.37 ± 0.05*

0.48 ± 0.07

0.46 ± 0.09

0.52 ± 0.08

0.55 ± 0.06*

0.47 ± 0.08

0.49 ± 0.09

0.50 ± 0.07

0.57 ± 0.03*

0.48 ± 0.04

0.55 ± 0.05*

0.59 ± 0.04*

0.58 ± 0.05*

ПИ, мин/мл

70.1 ± 2.00

73.1 ± 1.06

65.2 ± 1.04*

63.3 ± 1.01*

55.6. ± 1.04

71.5 ± 1.04

66.4 ± 2.06

64.3 ± 1.14

57.2. ± 1.04*

68.2 ± 1.05

67.1 ± 1.08

65.5 ± 1.19

59.0. ± 1.05*

72.5 ± 1.07

73.2 ± 1.06

68.7 ± 1.09

71.1. ± 1.03

74.5 ± 1.02

77.9 ± 1.07*

82.6 ± 1.09*

87.8. ± 1.10*

74.2 ± 1.07

72.7 ± 1.06

75.5 ± 1.11

64.0. ± 1.03*

71.6 ± 1.06

69.3 ± 2.07

67.4 ± 1.10

60.2. ± 1.03*

70.3 ± 2.05

68.7 ± .1.02

67.9 ± 1.10

66.2. ± 1.06*

СО, мм³/мл/

мин

0.68 ± 0.04

0.72 ± 0.07

0.77 ± 0.05*

0.82 ± 0.04*

0.90. ± 0.02*

0.69 ± 0.08

0.74 ± 0.07

0.78 ± 0.05*

0.80. ± 0.03*

0.67 ± 0.06

0.70 ± 0.07

0.71 ± 0.06

0.77. ± 0.06*

0.71 ± 0.04

0.72 ± 0.06

0.74 ± 0.08

0.76. ± 0.04*

0.67 ± 0.04

0.62 ± 0.04*

0.55 ± 0.09*

0.51 ± 0.04*

0.64 ± 0.06

0.66 ± 0.05

0.70 ± 0.11

0.75 ± 0.02*

0.60 ± 0.06

0.59 ± 0.05

0.73 ± 0.09

0.78 ± 0.06*

0.67 ± 0.03

0.69 ± 0.02*

0.70 ± 0.05*

0.68 ± 0.07*

Обозначения: ДК – диеновые конъюгаты, ТБК – липоперекиси, взаимодействующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ – период индукции, СО – скорость окисления, ЛП – липид

Отсутствие аскорбата в рационе ведет к ускорению липидпероксидации, выявляющемуся уже через 2 недели после перехода на С-авитаминный рацион, и нарастающему в дальнейшем. Количества аскорбата, составляющие часть суточной потребности, ограничивают эти сдвиги и отодвигают сроки их наступления в степени, пропорциональной дозе. Двукратный избыток витамина С в питании предупреждает появление сдвигов ЛПО, а при использовании его в течение четырёх недель в небольшой степени тормозит её и повышает АОП тромбоцитов. Четырёхкратный избыток аскорбата к концу наблюдений ускоряет ЛПО и снижает АОП тромбоцитов лишь после 8 недель. Аналогично влияет и 8-кратная доза, действие которой чуть более выражено, чем 4-кратной. Доза аскорбата, превышающая потребность в 16 раз, ускоряет ЛПО и снижает АОП заметнее, чем 8-кратная доза.

Данные табл. 2, полученны у этих же свинок и в те же срок при изучении уровня маркеров НВСК и толерантности к тромбину. Видно, что у свинок, рацион которых лишен витамина С, через 2, 4 и 6 недель от начала опыта повышен уровень факторов (фф.) Р 3 и Р 4 . К концу 8 недели их содержание оказалось ниже контрольного значения. Снижается через 6 и заметнее через 8 недель и уровень фибриногена. Уровень ПДФ, несколько увеличившийся к концу 6-й недели, через 8 недель оказывается ниже контрольного значения. Уровень РКМФ возрос уже через 4 недели, но через 8 недель также упал ниже контрольной величины. Ниже контрольного к концу опыта оказался и уровень D-димеров. Толерантность к тромбину, снизилась против контроля через 6 недель (на 14%) и через 8 недель (на 37%, р<0.05).

Таблица 2. Интенсивность НВСК, фибринолиз и ТкТР у свинок неполучавших аскорбата, получавших его в дозе, равной суточной потребности, в дозах, ниже потребности и в дозах, превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (строки 1,2, 3 и 4 - соответственно после 2, 4, 6 и 8 недель опыта)

Показатели	Контроль (5.5 мг/кг)	Свинки (n – 5 на каждом этапе) получали АК (мг/кг массы тела) в дозах:
Показатели	Контроль (5.5 мг/кг)	0.0	1.375	2,75	4,125	11,0	22,0	44,0	88,0
		84.0 ± 1.0*	81.2 ± 1.1	82.0 ± 1.0	80.9 ± 1.0	83.6 ± 1.4	82.7 ± 1.3	84.4 ± 1.9	87. ± 2.8
Ф. Р 3 ,%	80.2 ± 1.3	85.7 ± 1.1*	84.0 ± 1.6	85.6 ± 1.5	84.0 ± 1.2	85.4 ± 1.6	84.1 ± 1.6	86.7 ± 2.1	86.4 ± 1.9
Ф. Р 3 ,%	80.2 ± 1.3	85.9 ± 1.0*	84.9 ± 1.1*	82.4 ± 2.3	85.9 ± 1.4	85.1 ± 1.7	86.1 ± 1.9	89.7 ± 1.0*	85.0 ± 1.8
		70.0 ± 1.3*	73.6 ± 1.0*	75.1 ± 0.8*	77.3 ± 1.0*	87.0 ± 1.8*	88.3 ± 1.1*	89.9 ± 1.3*	91.6 ± 1.9*
		3.4 ± 0.06	3.3 ± 0.04	3.0 ± 0.02	3.0 ± 0.05	3.2 ± 0.09	3.4 ± 0.05	3.6 ± 0.09	3.7 ± 0.06
	3.0 ± 0.02	3.6 ± 0.03*	3.4 ± 0.07	3.2 ± 0.05	3.1 ± 0.04	3.4 ± 0.09	3.2 ± 0.06	3.5 ± 0.07	3.6 ± 0.07
Ф. Р 4, с	3.0 ± 0.02	3.7 ± 0.03*	3.5 ± 0.04	3.3 ± 0.08	3.3 ± 0.07	3.5 ± 0.11	3.4 ± 0.09	4.1 ± 0.07*	3.7 ± 0.08
		2.5 ± 0.02*	2.7 ± 0.02*	2.8 ± 0.01*	2.9 ± 0.04	3.6 ± 0.07*	3.7 ± 0.06*	4.2 ± 0.06*	4.3 ± 0.07*
		2.2 ± 0.07	2.2 ± 0.11	2.1 ± 0.11	2.0 ± 0.10	2.1 ± 0.08	2.1 ± 0.09	2.2 ± 0.05	2.2 ± 0.04
	2.4 ± 0.02	2.1 ± 0.11	2.2 ± 0.17	2.2 ± 0.14	2.2 ± 0.11	2.0 ± 0.09	2.2 ± 0.06	2.3 ± 0.07	2.2 ± 0.07
ФГ, г/л	2.4 ± 0.02	1.9 ± 0.04*	2.1 ± 0.06	2.3 ± 0.08	2.1 ± 0.11	2.2 ± 0.08	2.2 ± 0.06	2.4 ± 0.05	2.5 ± 0.06
		1.5 ± 0.02*	1.9 ± 0.01*	2.1 ± 0.03	2.2 ± 0.09	2.2 ± 0.12	2.6 ± 0.03	2.7 ± 0.09*	3.0 ± 0.06*
		14.2 ± 1.3	14.7 ± 1.1	15.1 ± 1.1	15.0 ± 1.9	14.6 ± 1.4	14.4 ± 1.2	15.0 ± 1.3	15.4 ± 1.1
	14.1 ± 0.8	14.9 ± 1.1	15.3 ± 1.0	15.6 ± 1.0	15.1ё ± 1.3	14.7 ± 1.2	14.7 ± 1.1	15.1 ± 0.8	16.0 ± 0.9
ПДФ, мг%	14.1 ± 0.8	16.0. ± 0.7*	15.9 ± 1.0*	14.0 ± 0.6	14.7 ± 0.9	15.0 ± 1.3	15.2 ± 1.0	16.1 ± 0.6	17.2 ± 1.4
		11.5 ± 0.7*	12.1 ± 0.4*	12.8 ± 0.7*	14.3 ± 0.5	15.9 ± 0.9*	16.4 ± 0.9*	17.3 ± 0.8*	18.4 ± 0.9*
		23.1 ± 1.3	23.2 ± 1.1	23.2 ± 1.1	22.8 ± 1.1	23.2 ± 0.7	23.9 ± 0.8	24.7 ± 0.9	24.5 ± 1.1
РКМФ,		24.7 ± 0.9*	24.3 ± 1.2	22.4 ± 1.1	22.1 ± 0.8	23.6 ± 0.9	24.0 ± 0.9	25.1 ± 1.2	25.0 ± 1.3
РКМФ,	22.1 ± 0.8	20.0 ± 0.5	22.1 ± 0.7	22.9 ± 2.0	22.0 ± 0.9	23.9 ± 0.8	24.9 ± 0.7*	24.6 ± 1.7	25.3 ± 1.7
		17.6 ± 0.7*”	18.3 ± 0.5*	19.8 ± 1.0*	23.4 ± 0.3*	24.9 ± 0.8*	25.2 ± 0.9*	26.7 ± 1.1*	26.9 ± 1.5*
		0.21 ± 0.010	0.19 ± 0.013	0.20 ± 0.011	0.20 ± 0.012	0.19 ± 0.013	0.21 ± 0.015	0.21 ± 0.012	0.22 ± 0.012
	0.18 ± 0.0 10	0.18 ± 0.011	0.18 ± 0.011	0.20 ± 0.011	0.20 ± 0.012	0.18 ± 0.014	0.22 ± 0.013	0.22 ± 011	0.24 ± 011
D-Д, мкг/мл		0.17 ± 0.006	0.20 ± 0.061	0.21 ± 0.013 0.19 ± 0.008 0.17 ± 0.009	0.21 ± 0.018 0.17 ± 0.006 0.18 ± 0.009	0.21 ± 0.015	0.23 ± 0.014	0.24 ± 0.012	0.24 ± 0.009
		0.15 ± 0.003 *	0.16 ± 0.011 *	0.21 ± 0.013 0.19 ± 0.008 0.17 ± 0.009	0.21 ± 0.018 0.17 ± 0.006 0.18 ± 0.009	0.24 ± 0.011 *	0.25 ± 0.015 *	0.25 ± 0.013 *	0.27 ± 0.011 *
		96.8 ± 2.3	97.4±1.9	93.2±1.	97.6±1.7	98.2 ± 1.5	102 ± 1.7	101 ± 1.9	112 ± 1.8*
ТкТР, %		94.7 ± 2.6	97.9±1.4	95.4±1.7	93.6±1.9	102 ± 2.9	106 ± 2.8	106 ± 3.2	119 ± 2.0*
ТкТР, %	100 ± 2.3	86.0 ± 2.3*	90.5.±1.3	92.6±1.3	91.3±1.4	102 ± 1.9	108 ± 1.9	111 ± 2.9*	124 ± 2.1*
		63.2 ± 1.4*	67.19±1.1*	73.9±1.4*	91.9±1.4	99.8 ± 2.4	101 ± 2.4	112 ± 3.4*	129 ± 2.6*

Обозначения: как в тексте, знак * - достоверное отличие от контроля, знак + - от значений в 3-й колонке

В присутствии в рационе аскорбата в количестве, составляющем 25, 50 или 75% от суточной потребности, изменения, которые наблюдались в условиях С-авитаминного питания, заметно уменьшились уже при наименьшем количестве аскорбата, и ещё заметнее при введении аскорбата в количестве, составляющем 50% от потребности в нём. При количестве аскорбата, составляющем 75% от суточной потребности несколько ниже контроля в конце опыта оказался уровень ф. Р ₃ , и несколько выше контрольного - уровень РКМФ. Остальные величины были равны контрольным.

При введении аскорбата в количестве, 2-кратно превышающем потребность, через 8 недель обнаружился прирост уровня фф. Р3 и Р4, ПДФ, РКМФ и D-димеров. При введении аскорбата в количествах 4-, 8- и 16-кратных против потребности, к концу наблюдений (т.е. через 8 недель от начала опытов) также обнаружился рост уровня этих маркеров НВСК в степени, несколько превышающей найденный при 4-кратной дозе. Кроме того, при наибольшей из доз аскорбата найдено повышение ТкТР (на 12-20% против контроля), в то время как при меньших дозах наблюдалась лишь статистически неподтверждающаяся тенденция увеличения этого показателя.

В табл. 3 представлены схема и результаты опытов, проведенных на аскорбатнезависимых животных (белых крысах), у которых оценивали изменения ЛПО, АОП, НВСК и ТкТРфибринолиза при их содержании на рационе без добавления аскорбиновой кислоты и с её возрастающими количествам.

Здесь видно, что контрольная группа получала полноценный рацион, включавший витамин С в количестве, соответствующем суточной потребности для свинок (рацион для крыс, как отмечено выше, витамина С не содержит и крысы в нём не нуждаются).

Крысы подопытных групп получали по 22.0, 44,0 или 88 мг/кг массы, т.е. 4-, 8- или 16-кратный избыток, с тем, чтобы выяснить, как это влияет на ЛПО, АОП и гемостаз у животных, не нуждающихся в постоянном поступлении витамина С извне.

Таблица 3. ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменный уровень маркеров ВТФ, фибринолиз и ТкТР у крыс, получавших аскорбат в дозах, эквивалентных лечебным (верхняя строка - 2, вторая сверху - 4, третья сверху - 6 и четвертая - 8 недель; n = 5 на всех этапах)

Показатели	Крысы получали в составе рациона АК (мг/кг)
Показатели	5.5 (контроль)	22.0	44.0	88.0
	0.051 ± 0.002	0.046 ± 005	0.041 ± 004*	0.034 ± 003*
ДК, А/мг ЛП	0.048 ± 0.003	0.039 ± 008*	0.037 ± 009*	0.047 ± 008
	0.050 ± 0.003	0.035 ± 0.003*	0.055 ± 0.009	0.058 ± 0.009*
	0.052 ± 0.004	0.036 ± 0.007*	0.063 ± 0.007*	0.065 ± 0.006*
	0.76 ± 0.03	0.71 ± 0.06	0.68 ± 0.04*	0.61 ± 0.05*
	0.77 ± 0.05	0.65 ± 0.04*	0.67 ± 0.03*	0.82 ± 0.02*
ТБК, ед./мг ЛП	0.79 ± 0.06	0.62 ± 0.06*	0.74 ± 0.07	0.85 ± 0.06*
	0.78 ± 0.03	0.61 ± 0.05*	0.85 ± 0.07*	0.85 ± 0.09*
	45.3 ± 1.8	45.9 ± 2.0	52.7 ± 2.0*	52.9 ± 1.2*
	45.7 ± 1.6	54.5 ± 1.8*	54.7 ± 1.6*	40.3 ± 1.1*
ПИ, мин/мл	46.4 ± 1.7	54.8 ± 1.8*	42.1 ± 0.7	42.2 ± 0.8*
	45.1 ± 1.6	54.4 ± 1.7*	40.0 ± 1.3*	42.1 ± 1.1*
	0.77 ± 0.03	0.76 ± 0.04	0.70 ± 0.04*	0.67 ± 0.05*
СО, м³/мл/мин	0.74 ± 0.04	0.67 ± 0.03*	0.67 ± 0.03*	0.72 ± 0.09
СО, м³/мл/мин	0.76 ± 0.07	0.66 ± 0.04*	0.79 ± 0.09	0.84 ± 0.06*
	0.77 ± 0.05	0.65 ± 0.06*	0.85 ± 0.04*	0.86 ± 0.07*
	87.3 ± 1.7	87.9 ± 1.9	81.1 ± 1.2*	80.0 ± 1.1*
	90.2 ± 1.6	79.4 ± 1.8*	89.8 ± 1.8	93.2 ± 1.0*
Ф. Р 3 ,%	89.6 ± 1.8	77.9 ± 1.7*	97.1 ± 1.4*	97.9 ± 1.6*
	87.9 ± 1.8	77.1 ± 1.4*	99.6 ± 1.3*	98.8 ± 1.1*
	3.3 ± 0.02	3.3 ± 0.02	3.0 ± 0.01*	2.8 ± 0.02*
	3.1 ± 0.02	3.0 ± 0.02*	3.3 ± 0.04	3.4 ± 0.03*
Ф. Р 4, с	3.2 ± 0.04	2.9 ± 0.01*	3.9 ± 0.02*	4.0 ± 0.02*
	3.3 ± 0.05	2.7 ± 0.03*	3.9 ± 0.03*	4.1 ± 0.04*
	2.1 ± 0.05	2.2 ± 0.09	2.1 ± 0.07	2.0 ± 0.06
	2.0 ± 0.07	2.1 ± 0.08	2.3 ± 0.09	2.2 ± 0.08
ФГ, г/л	2.2 ± 0.05	2.2 ± 0.08	2.3 ± 0.08	2.5 ± 0.09
	2.3 ± 0.07	2.1 ± 0.06	1.9 ± 0.07*	1.8 ± 0.07*
	15.1 ± 1.0	14.9 ± 1.2	13.4 ± 1.0*	13.0 ± 1.0*
	15.3 ± 1.1	13.7 ± 0.4*	13.9 ± 0.4	14.8 ± 0.4
ПДФ, мг%	14.9 ± 1.2	13.3 ± 0.8*	15.9 ± 0.3*	15.7 ± 0.2*
	14.7 ± 1.5	13.5 ± 0.5*	16.7 ± 0.4*	16.1 ± 0.3*
	23.8 ± 1.3	24.2 ± 1.0	21.1 ± 1.0*	22.6 ± 1.1
	24.0 ± 0.8	22.2 ± 0.7*	22.9 ± 0.9	22.8 ± 0.7
РКМФ, мкг/мл	23.7 ± 1.1	21.7 ± 0.7*	25.6 ± 0.7*	25.9 ± 0.8*
	24.2 ± 0.9	21.2 ± 0.6*	26.5 ± 0.6*	26.4 ± 0.7*
	0.20 ± 0.01	0.17 ± 0.01	0.17 ± 0.01*	0.16 ± 0.02*
	0.17 ± 0.04	0.14 ± 0.03*	0.21 ± 0.03	0.20 ± 0.03
D-Д, мкг/мл	0.18 ± 0.09	0.14 ± 0.01*	0.24 ± 0.02*	0.25 ± 0.04*
	0.18 ± 0.07	0.13 ± 0.02*	0.24 ± 0.03*	0.24 ± 0.05*
		99.1 ± 3.4	97.0 ± 3.5	96.1 ± 3.3
ТкТР, %		102 ± 3.2	113 ± 3.4*	115 ± 3.2*
ТкТР, %	100 ± 3.0	120 ± 2.1*	127 ± 2.4*	133 ± 3.1*
		124 ± 3.0*	132 ± 3.1*	137 ± 3.0*

Обозначения: как к таблицам 1 и 2

С увеличением количества аскорбата в 4 раза уже через 2 недели наблюдалось замедление ЛПО и рост АОП (снижение в тромбоцитах уровня ДК, ТБК, удлинение ПИ и замедление СО). То же обнаружилось и через 4 недели от начала опыта. Однако через 6 недель значения всех этих показателей сравнялись с контрольными величинами, т.е. восстановилась исходная интенсивность перекисного окисления липидов, а через 8 недель выявилось достоверное ускорение ЛПО (прирост уровня ДК и

ТБК) и снижение АОП (укорочение ПИ и рост СО).

Введение с рационом 8-кратного количества аскорбата уменьшило (начиная с 4-й недели) уровень ДК и ТБК, замедлило скорость СО и удлинило ПИ, т.е. замедлило процессы ЛПО и повысило АОП. Все эти изменения далее не усиливались: степень убыли липидпероксидов, степень изменения показателей АОП через 6 и 8 недель сохраняли значения, выявлявшиеся через 4 недели. То же относится и к сдвигам толерантности к тромбину, которая увеличилась в те же сроки и примерно в той же степени, что и при 8-кратной дозе аскорбата.

При количестве аскорбата, превышающем суточную потребность в 16 раз, наблюдались такие же сдвиги, с той разницей, что эффект через 2 недели был выше, а через 4 недели (т.е. быстрее, чем при 8-кратной дозе) произошло выравнивание всех показателей с контрольными величинами. Спустя 8 недель появились такие же по степени признаки ускорения ЛПО и снижения АОП, какие нашли при 8-кратном количестве аскорбата.

ВЫВОДЫ

1. Исключение витамина С из рациона аскорбат-зависимых животных ускоряет липидпероксида-цию, повышает коагулоактивность тромбоцитов, интенсифицирует непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, которое затем замедляется при длительном нахождении на С-авитаминном питании.
2. Витамин С в количествах, не достигающих суточной потребности, ограничивает сдвиги ли-пидпероксидации, двукратный избыток предупреждает их появление, а в количествах, эквивалентных лечебным дозам, в первые недели проявляет антиоксидантный эффект, сменяющийся по мере удлинения длительности введения прооксидант-ным.
3. У аскорбатнезависимых животных витамин С в малых дозах обнаруживает первоначально антиоксидантный эффект, сменяющийся прооксидант-ным быстрее, чем это имеет место у аскорбатзави-симых животных, а в количествах, эквивалентных лечебным, дозазависимо снижает антиоксидантный потенциал и ускоряет липидпероксидацию в тромбоцитах.
4. Изменения в гемостазе у аскорбатзависимых и аскорбатнезависимых животных следуют за сдвигами интенсивности перекисного окисления липидов (при ускорении ЛПО и снижении АОП коагулоактивность тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови интенсифицируются, а толерантность к тромбину падает, при замедлении ЛПО и повышении АОП снижается коагулоактивность тромбоцитов, замедляется НВСК и растет ТкТР).

Полученные данные обосновывают необходимость глубокого изучения дозазависимости влияния аскорбата на гемостаз при использовании его в терапии заболеваний, сопровождающихся гемостатическими нарушениями.

Список литературы Липидпероксидация и гемостаз у аскорбатзависимых животных при их содержании на рационе без аскорбата, с его дефицитом и избытком

Андреенко Г.В., Лютоа Л.В. Значение аскорбиновой кислоты в сохранении функции противосвертывающей системы крови//Система свертывания крови и фибринолиз. Киев: Здоровья, 1969. С.8-9
Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. Томск: ТГУ, 1980. 310 с.
Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика. М.: МГУ, 2002. -75 с.
Бышевский А.Ш., Мохнатов В. Метод определения анти-плазмина в сыворотке крови//Система свертывания крови и фибринолиза. Киев: Здоровья. 1969. С. 220-221
Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция//Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство, 1978. 124 с
Бышевский А.Ш. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина: А.С. № 1659855, 1.03. 1991 г, публикация в Бюлл. № 24, 30.06. 1991
Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н. Витамины и здоровье женщины. Красноярск: КГУ, 1991. 192 с
Бышевский А.Ш. и др. Способ определения толерантности животных к тромбину. Патент РФ № 2219546, 20.12.2003
Бышевский А.Ш. и др. Связь гемостаза с перекисным окислением липидов. М.: Медицинская книга, 2003. 95 с
Воробьева Н.М. и др. Повышение Д-димера в период лечения антикоагулянтами и рецидивы венозных тромбозов -есть ли связь?//Матер. IV Всероссийской конф. «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии». М.: АМН РФ, 2009. С.108-109
Гланц С.А. Медикобиологическая статистика. М.: Практика. 1998. 112 с
Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. Казань: ФЭН АНТ, 2000. 367 с
Ковалевский К.Л. Содержание мелких лабораторных животных в вивариях. М.: Сельхозгиз, 1949. 135 с
Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови//М.: Медицина, 1975. 488 с.
Кузник Б.И. и др. Докл. симпозиума «Биологические проблемы Севера». Петрозаводск: Петрозаводский ун-т, 1976. С. 77-79
Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс. М.: Институт питания АМН ССР, 1952. 5 с
Меньшиков Ф.К. Об эритропоэтической функции костного мозга при экспериментальном авитаминозе С//М.: Сб. новостей НИИП, 1938. С.17-29
Мищенко В.П. и др. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз. Полтава: АСМИ (Украина), 2005. 159 с
Момот А.П. и др. Методика и клиническое значение паракоагуляционного фенантролинового теста. Клин. лабор. диагностика, 1999. № 4. С. 17-20.
Орлова О.В. и др. Маркеры тромбообразования и воспаления при остром клеточном, гуморальном и персистирующем отторжении сердечного трансплантата с гемо-динамическими нарушениями. Матер. IV Всероссийской конф. «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии». М., 2009. С.365-367
Савинов Б.Г. Каротин Киев: АН УССР, 1948. 131 с
Самаль А.Б. и др. рН среды как фактор регуляции функциональных свойств тромбоцитов//Гематол. и трансфу-зиол., 1989. Т.34, № 2. С. 35-38.
Смирнов М.И. Витамины//М.: Медицина. 1974. 495 с
Ушкалова В.Н. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометрическим, флуорометрическим и кинетическим методами//Лаб. дело. 1987. № 6. С. 446-460.
Шараев П.Н. Витамины и здоровье//Ижевск: «Экспертиза», 2004. 108 с
Широков В.Ю. Значение нарушений внутрисосудистого компонента микроциркуляции в патогенезе хронического генерализованного пародонтита у больных с патологией желудочно-кишечного тракта и в динамике лечения: Автореф. дис. … докт. мед. наук Саратов, 2009. 42
Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. Санкт-Петербург, 2000. 222 с
Casanueva E. Possible interplay between vitamin C deficiency and prolactin in pregnant women with premature rupture of membranes: facts and hypothesis//Med. Hypotheses, 2005. Vol, 64, № 2. P. 11-13.
Codoñer-Franch P. Mandarin juice improves the antioxidant status of hypercholesterolemic children//J. Pediatr.Gastroenterol. Nutr. 2008. Vol. 47, № 3. P.349-355.
Levi M. New treatment strategies for disseminated intravascular coagulation based on current understanding of the pathophysiology//Ann. Med., 2004. Vol, 36. № 1. P.41-49
Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer concentrations?//Lancet Neurol.. 2003. № 2. P. 77
Shirakawa A.K. 1, 25-dihydroxyvitamin D3 induces CCR10 expression in terminally differentiating human B cells//J. Immunol., 2008. Vol, 180, № 5. P. 2786-2795.
Junghans E. Die Bahandlung von gynecologischen Blutungen mit Vitamin C//Klinisch. Wschr., 1935. Vol. 14, № 25. S. 899-911
Jurk K. Platelets: physiology and biochemistry//Semin. Thromb. Hemost., 2005. Vol. 31, № 4. Р. 381-392.
Van Guilder G.P. Acute and chronic effects of vitamin C on endothelial fibrinolytic function in overweight and obese adult//J. Physiol., 2008. Vol.15, № 14. P. 3525-3535.
Wada H. Increastd plasma solubilit fibrinin patients with dissiminated iinravascular coagulation//Am. J. Hematol., 1996. №. 51. P. 255-260.

Еще

Статья научная