Научные статьи \ Прикладные науки. Медицина. Технология \ Mедицинские науки \ Патология. Клиническая медицина \ Заболевания пищеварительной системы. Болезнь пищеварительного тракта

Микробный пейзаж больных с ограниченной стерильной некротической деструкцией, перенесших лапаротомию в динамике комплексного лечения

Автор: Саганов Владислав Павлович, Раднаева Лариса Доржиевна, Хитрихеев Владимир Евгеньевич, Дониров Батор Аюржанович, Будашеев Вячеслав Петрович

Журнал: Вестник Бурятского государственного университета. Философия @vestnik-bsu

Статья в выпуске: 12, 2014 года.

Бесплатный доступ

Предложен новый метод диагностики микробного пейзажа больных с острым панкреатитом.

Острый панкреатит, газовая хроматография масс-спектрометрия

Короткий адрес: https://sciup.org/148182176

IDR: 148182176 | УДК: 616.37

Текст научной статьи Микробный пейзаж больных с ограниченной стерильной некротической деструкцией, перенесших лапаротомию в динамике комплексного лечения

В неотложной панкреатологии определяющим фактором в тактике лечения больных с некротической деструкцией является наличие или отсутствие инфекции в поджелудочной железе и забрюшинном пространстве, определение которой на сегодняшний день является весьма актуальной проблемой [1-3, 7, 8]. Не редко в пользу хирургического лечения склоняет ложноположительный результат контаминации некроза поджелудочной железы и забрюшинной клетчатки [4-6]. Это во многом определяет поиск современных маркеров панкреатогенной инфекции.

Материал и методы

Метиловые эфиры жирных кислот и триметилсилильные эфиры исследовались методом ГХ-МС на газовом хроматографе Agilent Packard HP 6890 с квадрупольным масс-спектрометром HP MSD 5973N в качестве детектора. Для хроматографирования использовали колонку – ко-

лонку HP-5MS с внутренним диаметром 0,25 мкм. Процентный состав смеси вычислялся по площади газо-хроматографических пиков. Качественный анализ основан на сравнении времен удерживания и полных масс-спектров соответствующих чистых соединений с использованием библиотеки данных NIST08.L и стандартных смесей (Bacterial Acid Methyl Esters (CP Mix, Supelco, Bellefonte, PA, USA), а также по количеству введенного стандарта (дейтерометиловый эфир тридекановой кислоты).

Определен микробный пейзаж 14 больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом и в сравнительном контексте 18 условно здоровых людей.

Результаты

Динамика изменений концентрации микроорганизмов у оперированных больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом представлена в таблице 1.

Таблица 1

№	Микроорганизмы, кл/гх10*5	Здоровые	При поступлении	Середина лечения	При выписке	Норма
1	Streptococcus (оральные)	114,8±26.1 [50-275] ³	129,1±76,9 [0-305]	56,4±49,5 [0-155]	77,0±49,5 [14-140]	249
2	Eubacterium lentum (группа А)	56,3±37,7 [95-74] ^2,3,4	424,5±44,4 [0-982]	409,7±93,0 [277-589]	291,5±71,5 [220-363]	68
3	Bacillus cereus	27,5±6,9 [0-64] ⁴	11,3±7,0 [0-45]	12,4±12,3 [0-37]	3,4±3,3 [0-10]	23
4	Peptostreptococcus anaerobius	0	2,8±2,7 [0-11]	0	0	0
5	Clostridium hystolyticum	39,7±12,5 [2-116]	22,6±22,5 [0-90]	0	0	95
6	Nocardia, 14:1d11	252,6±56,2 [102-326]	258,0±52,8 [164-403]	259,0±42,8 [164-303]	262,0±38,0 [224-300]	262
7	Peptostrepto-coccus	1,6±1,5	520,8±443,9	258,0±52,8	0	0

	anaerobius	[0-14] ²	[0-1850]	[0-1403]
8	Moraxella/Acinetobacter	3,0±1,6 [2-10] ^2,3	18,3±7,2 [0-35]	12,7±6,4 [0-21]	4,1±3,9 [0-8]	0
9	Pseudomonas aeruginosa	2,4±1,9 [2-20] ^2,3,4	58,3±10,4 [29-74]	43,4±22,0 [0-72]	19,5±4,5 [15-24]	0
10	Clostridium propionicum	84,4±32,9 [0-220]	56,4±56,3 [0-169]	0	0	288
11	Актиномицеты	36,6±4,9 [15-59]	31,3±2,5 [26-36]	23,0±4,0 [15-28]	21,0±3,0 [7-25]	77
12	Pseudonocardia	24,2±5,4 [6-60]	34,8±23,4 [6-104]	16,0±6,4 [6-28]	29,0±8,4 [16-99]	70
13	Streptomyces	49,7±13,7 [6-133] ²	72,8±42,2 [9-193]	39,0±17,3 [9-69]	29,0±6,4 [6-98]	62
14	Clostridium ramosum	2234,3±230,4 [1051-3241] ^3,4	2883,8±559,2 [1908-4397] ^3,4	3967,3±929,0 [2187-5318]	3811,5±1188, 5 [2623-5311]	2000
15	Fusobacteri-um/Haemo-phylus	3,7±2,1 [0-18] ^2,3,4	25,5±8,9 [0-41]	20,4±10,2 [0-32]	28,5±12,2 [6-63]	0
16	Alcaligenes	31,7±4,4 [6-46] ^2,3,4	118,0±20,2 [62-157]	119,3±19,0 [67-157]	109,3±15,0 [67-157]	48
17	Rhodococcus	283,7±45,4 [63-512] ^2,3	490,0±110 [212-751] ⁴	410,3±90,1 [234-531]	240,3±21,7 [200-298]	423
18	Staphylococcus intermedius	355,1±72,9 [119-778] ²	842,3±46,3 [11-1613] ⁴	444,0±233,6 [139-903]	404,0±233,6 [109-703]	756
19	Corineform CDC-group XX	125,9±22,5 [32-250]	335,0±17,0 [0-588]	341,3±120,7 [0-588]	164,5±12,7 [68-191]	605
20	Lactobacillus	5661,5±1868,3 [965-16220]	4168,0±2797 [581-9679]	3193,5±2612,5 [581-5806]	4131,0±969,0 [3062-5001]	6613
21	Campylobacter mucosalis	44,8±16,8 [0-142] ^2,3,4	221,0±64,7 [94-306]	204,3±34,7 [143-263]	184,3±14,7 [143-263]	99
22	Mycobacterium/Candida	106,8±25,3 [0-239]	359,8±110,9 [115-594]	275,5±91,5 [169-549]	375,571,5 [169-549]	549
23	сем. Enterobacteri-aceae (E. coli и пр.)	0,11±0,01 [0-0,02]	57,6±57,4 [0-230]	0	0	0
24	Eubacterium moniliforme sbsp	0	233,0±232 [0-700]	0	0	0
25	Cl. difficile	80,2±12,8 [43-155] ^2,3,4	439,3±25,9 [83-944]	339,3±23,9 [85-744]	299,0±25,9 [222-376]	385
26	Prevotella	0	0	34,5±11,5 [9-64]	0	38
27	Eubacterium moniliforme, E. nodatum, E. sabureum	6589,8± 1385,7 [1049-12508] ^2,3,4	17791,8± 5748,9 [3572-29580]	21329,3± 5745,3 [10278-29580] ⁴	10844,0± 1844,0 [9000-12688]	6912
28	Staphylococcus	123,0±19,3 [57-220] ^2,3	396,0±68,4 [264-581]	274,3±22,4 [120-637]	124,3±22,4 [120-237]	120
29	Bifidobacterium	2395,4±453,5 [355-3973]	6701,3±2571,4 [664-11533]	4129,5±754,9 [2031-5374]	3023,0±754,9 [2031-5374]	5067
30	Helicobacter pylori, h18	12,0±2,5 [0-22] ^2,4	95,0±48,5 [0-227] ^1,3	28,5±14,3 [0-66] ^2,4	100,1±17,3 [66-132]	14
31	Clostridium perfringens	19,6±3,4 [4-35] ^2,3,4	49,3±16,8 [24-97]	26,0±7,2 [12-46]	36,0±7,2 [12-46]	12
32	Enterococcus	1,9±1,3 [0-11] ^2,3,4	61,8±49,6 [0-208]	79,3±70,4 [0-290]	42,3±20,4 [3-71]	290
33	Eubacterium	0	0	0	0	59
34	Propionibac-terium spp (P. freudenreichii)	2033,4±339,1 [747-3305]	4150,0±1536,9 [967-8078]	2967,0±564,8 [965-4480]	2430,5±564,8 [965-4480]	4480
35	Streptococcus mutans (анаэробные)	253,7±45,8 [89-525] ^2,3,4	873,0±261,4 [139-1340] ³	304,8±63,2 [171-444]	584,8±63,2 [171-744]	229
36	Herpes	60,4±12,4 [19-112] ^2,3,4	366,3±166,2 [65-740] ³	187,0±45,7 [59-276]	287,0±45,7 [59-276]	59
37	Микр. грибы, кампесте-рол	130,1±27,5 [24-293] ^3,4	354,0±112,5 [63-552]	308,0±182,3 [29-842]	265,1±182,3 [29-842]	842
38	Nocardia asteroides	287,3±115,2 ^2,4 [184-1194]	677,5±112,5 [299-806]	641,5±259,4 [201-1321]	541,5±259,4 [201-721]	274
39	Цитомегало-вирус	30,2±3,7 [15-42] 2,3	235,0±67,4 [76-388]	230,2±36,9 [46-426]	83,2±36,9 [46-126]	166
40	Микр. грибы, ситостерол	130,1±27,5	227,0±86,8	166,8±72,6	86,8±22,6	384

		[24-293] ⁴	[35-446]	[82-384]	[82-112]
41	Ruminicoccus	372,6± 50,1 [119547] 2,3,4,5	1268,3± 363,2 ^3,4 [322 1997]	673,5± 79,4 [485 869]	873,5± 79,4 [485 869]	640
42	Actinomyce-tes 10Me14	165,4±20,0 [95-260] ⁴	153,3±37,3 [87-235] ⁴	129,5±64,7 [34-309]	79,5±14,7 [34-99]	309
43	E. lentum 7741 (группа В)	6,0±20,1 [0-190] ^2,3,4	290,3±86,4 [46-425] ^3,4	96,1±27,5 [0-381]	86,1±17,5 [0-181]	0
44	Actinomyces viscosus	503,4± 84,6 [165-855] ²	1309,0± 341,9 ⁴ [288-1719]	827,8± 154,9 [501-1190]	727,8± 154,9 [501-1190]	119 0

Примечание : ^{2, 3, 4} – достоверность различий (р<0,05) между сроками лечения и определения ГХ-МС больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом

Нами установлено увеличение микробной флоры выше нормы, имеющей тенденцию к повышению у больных с ограниченным стерильным ПН, которым было выполнено хирургическое вмешательство: Clostridium ramosum, Fusobacterium/Haemophylus, Helicobacter pylori, h18.

Отмечено снижение микроорганизмов от высоких до нормальных показателей: Peptostrep-tococcus anaerobius, Streptomyces, Rhodococcus, Staphylococcus intermedius, Cl. difficile, Staphylococcus, цитомегаловирус, Actinomyces viscosus. Также выявлено, что концентрация следующих микроорганизмов имела тенденцию к снижению, однако, не достигла нормальных показателей: Eubacterium lentum (группа А), Moraxella / Acinetobacter, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter mucosalis, Eubacterium moniliforme, E. Nodatum, E. sabureum, Clostridium perfringens, Streptococcus mutans (анаэробные), Herpes, Nocardia asteroides, Ru-minicoccus, E. lentum 7741 (группа В).

Отмечена тенденция к уменьшению количества микроорганизмов в конце лечения, не превышавших нормальные показатели при госпитализации в следующих случаях: Streptococcus (оральные), Bacillus cereus, Актиномицеты, Corineform CDC-group XX, Propionibacterium spp (P. freudenreichii), Actinomycetes 10Me14.

Выявлена недостаточность Bifidobacterium к концу лечения, что создает дисбиоз кишечника.

Таким образом, примененный метод газовой хроматографии масс-спектрометрии является перспективным методом диагностики микроорганизмов больных с острым панкреатитом, позволяет коррегировать результаты комплексного лечения этих больных и требует дальнейших исследований в этой области.

Список литературы Микробный пейзаж больных с ограниченной стерильной некротической деструкцией, перенесших лапаротомию в динамике комплексного лечения

Верховцева Н.В., Осипов Г.А. Свойства и трофические связи основных групп микроорганизмов отделов кишечника и фекалий по данным измерений микробных маркеров методом ГХ-МС//Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб. материалов междунар. конф. -М., 2004. -С. 20-21.
Минорные жирные кислоты биологических жидкостей урогенитальных органов и их значимость в диагностике воспалительных процессов/Т.А. Крымцева и др.//Журн. микроб. эпидем. и иммун. -2003 -№ 2. -С. 92-101.
Спектр и уровень содержания низкомолекулярных соединений микробного происхождения при периодической болезни/Ж.А. Кцоян и др.//Вестник РАМН. -2002. -№ 2. -С. 41-45.
Состав кожного сала, микроэкология кожи и кишечника у больных себорейным дерматитом и акне (исследование методом газовой хроматографии масс-спектрометрии)/И.В. Полеско и др.//Рос. журн. кож. и вен. бол. -2007. -№ 2. -С. 43-50.
Хабиб О.Н., Белобородова Н.В., Осипов Г.А. Детектирование молекулярных маркеров бактерий в ткани клапанов сердца в норме и при патологии с применением метода газовой хроматографии и масс-спектрометрии//Журн. микроб. эпидем. и иммун. -2004. -Т. 7, № 3. -С. 62-65.
1992. Meningococcal endotoxin in lethal septic shock plasma studied by gas chromatography, mass-spectrometry, ultracentrifugation and electron microscopy/P. Brandtzaeg et al. J. Clin. Investig. 89. -Р. 816-823.
Comparison of species distribution and antimicrobial susceptibility of aerobic actinomycetes from clinical specimens/M.M. McNeil et al.//Rev Infect Dis. 1990. Sep-Oct. -12(5). -Р. 778-83.
Evaluation of a commercial microbial identification system based on fatty acid profiles for rapid, accurate identification of plant pathogenic bacteria/D.E. Stead et al.//J. Appl. Bacteriol. -1992. -72. -Р. 315-321.

Еще