Минимальная остаточная болезнь при увеальной меланоме: исследование прогностической значимости



XX РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС • ПОСТЕРЫ

МЕЛАНОМА И ОПУХОЛИ КОЖИ

Минимальная остаточная болезнь при увеальной меланоме: исследование прогностической значимости

Зарецкий А.Р.

Цель исследования. Разработать технологию оценки остаточной болезни в биологических жидкостях пациентов с локализованной увеальной меланомой и оценить информативность теста на остаточную болезнь в качестве фактора прогноза.

Материалы и методы. На первом этапе исследования разрабатывали методику детекции небольших фракций ДНК с мутациями в «горячих точках» генов GNAQ и GNA11 на фоне избытка ДНК без мутаций. В качестве контрольных образцов использовали референсные панели ДНК фирмы Horizon Dx (США), а также образцы опухолевой ткани с верифицированными мутациями в этих генах. На втором, ретроспективно-проспективном этапе проверяли пригодность разработанной методики для детекции соответствующих мутаций в циркулирующей ДНК плазмы крови пациентов с метастатической увеальной меланомой. На третьем, проспективном этапе исследования проводили поиск мутаций в циркулирующей ДНК плазмы крови у пациентов с локальными стадиями увеальной меланомы до и после условно радикального хирургического лечения. Циркулирующую ДНК консервировали в цельной крови с помощью набора «ПлазмаПротект ДНК» (ООО «Номотек», Россия) и выделяли с помощью набора «QiaAmp Circulating Nucleic Acids Kit» (Qiagen, Германия). Опухолевую ткань пациентов тестировали на мутации в «горячих точках» генов GNAQ и GNA11 по стандартным протоколам, после чего образцы циркулирующей ДНК каждого пациента тестировали именно на мутацию, выявленную в его опухоли. Параллельно оценивали молекулярные факторы прогноза, а именно мутации в «горячих точках» генов SF3B1 и EIF1AX, экспрессию белка BAP1 и патогенные варианты в промоторной области гена TERT.

Результаты. Нами был успешно разработан метод детекции 4 основных мутаций в «горячих точках» генов GNAQ и GNA11, соответствующих аминокислотным заменам p. Gln209Pro и p. Gln209Leu. Чувствительность метода составила 3–5 копий, избирательность – 0,1%-0,05% в зависимости от типа мутации, что не уступает показателям метода цифровой ПЦР, считающегося «золотым стандартом» для подобных задач. Пилотное тестирование на образцах 5 пациентов показало возможность детекции мутаций опухолевого происхождения в циркулирующей ДНК плазмы крови пациентов как с метастатической, так и с локализованной увеальной меланомой. Второй и третий этапы исследования продолжаются. В докладе будут показаны результаты второго этапа и подведены промежуточные итоги по третьему этапу.

Выводы. Мутации опухолевого происхождения в плазме крови пациентов с увеальной меланомой могут быть использованы как маркер минимальной остаточной болезни. Опухолевая ДНК может быть обнаружена в крови пациентов с локальными стадиями увеальной меланомы, что говорит о нарушении гематоофтальмического барьера и, возможно, о начальном этапе гематогенной диссеминации опухоли. Прогностическая значимость этого явления будет установлена в ходе проводимого нами проспективного исследования.