Моделирование микробной контаминации ран in vitro

Был проведен отбор сред для культивирования, поскольку в ранах присутствуют не только вещества, служащие для питания, но и вещества с бактерицидным эффектом, делая среду менее благоприятной для размножения стафилококков. Исследовали следующие среды: мясопептонный агар (МПА), среду RPMI-1640 и менее питательную среду 199. Культивирование проводили в полистироловых чашках Петри диаметром 35 мм, и без помещения в них покровных стекл. Перед началом эксперимента S. aureus выращивали в течение суток на мясопептонном агаре (МПА) при 37 ° С. После чего выросшую культуру взвешивали в стерильном физиологическом растворе до концентрации 1*108 м.к./мл по стандарту мутности 0,5 по Мак Фарланду [6, 8].

В результате проведенных исследований было установлено, что через одни сутки покровные стекла и дно чашек было густо покрыто одиночными клетками, их цепочками, однослойными и многослойными колониями (среды RPMI и 199). Однослойные колонии были при использовании мясопептонного агара (МПА). Особенно четкими были результаты на пластиковой поверхности. В менее питательной среде 199 в составе колоний образованы довольно длинные, метахроматически окрашенные розовые волокна, т.е. было начало формирования матрикса (рис. 1).

а)                                                          б)

в)

Рис. 1. S. aureus на пластиковой поверхности, окрашенные кристалл виолетом

А - образование однослойных колоний (МПА); Б - образование многослойных колоний (среда RPMI– 1640); В - образование волокнистого матрикса (среда 199). Увеличение х 1000

Исходя из полученных результатов, можно сделать заключение, что для моделирования in vitro биопленки целесообразно использовать среду 199, которая, до некоторой степени, может отражать неблагоприятные для S. aureus условия, складывающиеся при их проникновении в макроорганизм.

Таким образом, в сравнительных экспериментах было установлено, что музейный штамм S. aureus выживал и хорошо размножался в среде 199 в течение первых суток культивирования с образованием одно- и многослойных колоний.

На основании проделанной работы можно констатировать, что подобная простая методика культивирования микроорганизмов может быть использована для определения адгезии аутофлоры и образования его биопленки в случае плановых оперативных вмешательств, а также выбора антимикробных препаратов, предотвращающих данные процессы.