Молекулярно-генетические аспекты психонейроиммунных взаимоотношений у здоровых европеоидов

THE MOLECULAR-GENETIC ASPECTS OF PSYCHONEU-ROIMMUNOLOGICAL INTERACTIONS IN HEALTHY EUROPEAN SUBJECTS. I. G. Solovjova, M. A. Gubina*, A. S. Stenina, T. J. Abramova, D. E. Soboleva*, V. S. Kozhevnikov, A. G. Romazhchenko*, C. P. Korolenko**, V. V. Abramov. Novosibirsk, Institute of Clinical Immunology, Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Institute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk State Medical University. A b s t r a c t: In the present study it has been found associations of polymorphism in the dopamine-ß-hydroxylase gene (DBH 444G/A polymorphism) and psychoneuroimmuno-logical parameters in healthy European subjects. K e y w o r d s: dopamine-β-hydroxylase, polymorphism, psycho neuroimmunology.

Большое количество клинических и экспериментальных исследований, в том числе выполненных на базе лаборатории нейроиммунологии НИИ клинической иммунологии СО РАМН, посвящено изучению особенностей психонейроиммун-ных взаимодействий как у здоровых индивидуумов, так и при различных заболеваниях [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11 и др.]. Молекулярно-генетические аспекты указанных взаимоотношений изучены недостаточно.

Дофамин-β-гидроксилаза (DBH) конвертирует превращение дофамина в норадреналин, в связи с чем DBH является ключевым ферментом, регулирующим дофамин/норадренергический баланс. Показана ассоциация полиморфизма гена DBH с уровнем дофамина, норадреналина и DBH в плазме крови [14]. Структурный ген, кодирующий DBH, состоит из 12 экзонов и локализуется в хромосоме 9q34. Среди описанных полиморфизмов гена DBH:

444G/A, 910G/T, 1603C/T, 1912C/T, -1021C/T, 5´-ins/del. DBH 444G/A – полиморфизм гена DBH во втором экзоне – оказывает влияние на процесс мРНК-сплайсинга и не приводит к изменению структуры белковой молекулы [13].

Согласно литературным данным, полиморфизм DBH ассоциируется с рядом психических и поведенческих расстройств [8, 10, 12]. Cubells et al. (1998) показали, что у европейцев американского происхождения с расстройствами настроения и тревожностью 444А аллель ассоциируется с низкой DBH-активностью в цереброспинальной жидкости, 444G аллель – с высокой. N. Bhaduri et al. (2005) обнаружили тенденцию к повышению трансмиссии 444А аллеля у пациентов-ирландцев с синдромом гиперактивности. Аналогичные данные получены в индийской популяции.

Цель – выявление ассоциаций однонуклеотидного полиморфизма гена дофамин-β-гидроксилазы в экзоне 2 (DBH 444G/A) с психонейроиммуноло-гическими параметрами у здоровых европеоидов.

Материал и методы . Обследовано 65 здоровых европеоидов в возрасте 40—60 лет (жители Новосибирска), из них 16 мужчин (24,6 %), 49 женщин (75,4 %). Геномную ДНК выделяли из клеток периферической крови методом высаливания с применением протеиназы К. Генотипирование проводилось методом полимеразной цепной реакции и рестрикционного анализа [8]. Изучали полиморфизм гена DBH в экзоне 2 ( DBH 444G/A). Для определения личностных характеристик и особенностей психоэмоциональной сферы использовали личностный опросник Г. Айзенка Epi, опросник Спилбергера, опросник Бека, Торонтскую алекситимическую шкалу (TAS). Типологические особенности высшей нервной деятельности (ВНД) исследовали с помощью экспертной психологической программы группы авторов под руководством профессора Б. Я. Первомайского (программное обеспечение Т. И. Клейн) (МСП «Катарсис. Психологический центр», Луганск, 1992). Уровни пролактина, ТТГ, кортизола и инсулина в периферической крови определяли иммунохи-миолюминесцентным методом с использованием автоматического анализатора «IMMULITE-2000» (HPS, USA). Для исследования симпатопарасим-патического баланса использовали временной и спектральный анализ сердечного ритма – программно-аппаратный комплекс («Полиспектр» («Нейрософт», Иваново). Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови определяли методом проточной цитофлуорометрии с помощью аналитической системы «FACS Calibur» фирмы «Becton Dickinson» (США) с использованием моноклональных антител против CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD19⁺, HLA-DR⁺. Активность моноцитов и нейтрофилов исследовали по продукции эффекторных молекул. Содержание IgG, IgA, IgM в сыворотке крови определяли турбодиметрическим методом с использованием диагностикумов производства ЗАО НПО «Синтэко» (Москва). Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ «Statistica 6.0».

При сравнении оппозитных групп по психонейро-иммунологическим характеристикам использовали U-критерий Манна–Уитни.

Результаты и обсуждение . Анализ частоты встречаемости аллельных вариантов гена DBH в 444 позиции ( DBH 444G/A) показал, что среди обследованных здоровых европеоидов частота встречаемости аллелей G и А составляла 0,52 и 0,48 соответственно. Получено следующее распределение генотипов: G/G – у 20 чел. (30,8 %), A/G – у 28 (43 %) и A/A – у 17 (26,2 %).

У здоровых обследуемых с A/G и А/А генотипами наблюдаются однонаправленные изменения психонейрофизиологических параметров. Исходя из этого, были сформированы две группы: с G/G генотипом – 20 чел. (30,8 %) (группа 1) и с A/G и А/А генотипами – 45 чел. (69,2 %) (группа 2). Группы значимо не различались по полу и возрасту.

Исследование личностных особенностей показало, что обследуемые с A/G и А/А генотипами имеют более высокие показатели по шкале «интраверсия – экстраверсия» (р=0,03) и менее склонны к депрессии (р=0,02) в сравнении с обследуемыми с G/G генотипом (табл. 1). По другим тестируемым параметрам психоэмоциональной сферы значимых различий не получено.

Таблица 1

DBH 444G/A, личностные особенности и параметры психоэмоциональной сферы у здоровых европеоидов

Параметры психоэмоциональной сферы	G/G генотип (группа 1) (n=20)	A/G и A/A генотип (группа 2) (n=45)	p
Нейротизм*	11 (7÷14)	9 (6÷13)	>0,05
Экстраверсия*	7 (6÷11)	10 (8÷13)	0,03
Искренность*	4 (2÷5)	4 (3÷5)	>0,05
Уровень депрессии**	12 (7÷16)	7 (2÷13)	0,02
Уровень алекситимии***	68 (63÷80)	63 (59÷69)	0,06

Примечание. Данные, полученные при использовании: * – опросника Г. Айзенка Epi; ** – опросника Бека; *** – Торонтской алекситимической шкалы (TAS). р – здесь и далее достоверность различий по U-критерию Манна–Уитни.

Исследование уровня гормонов в периферической крови выявило у носителей A/G и А/А генотипов значимо более высокий уровень пролактина в сравнении с группой гомозигот по G-аллелю (р=0,01). Группы значимо не различаются по уровням кортизола, ТТГ и инсулина (табл. 2).

Таблица 2

DBH 444G/A и уровень гормонов в периферической крови у здоровых европеоидов

	G/G генотип (группа 1) (n=20)	A/G и A/A генотипы (группа 2) (n=45)	p
Пролактин (mlU/L)	136 (117÷203)	221 (154÷276)	0,01
ТТГ (uIU/ml)	1,09 (0,84÷1,75)	1,17 (0,73÷1,94)	>0,05
Кортизол (nmol/L)	349 (260÷423)	337 (285÷469)	>0,05
Инсулин (uIU/ml)	5,1 (3,1 ÷ 12)	7,1 (4,3÷9,8)	>0,05

При анализе ассоциаций DBH 444G/A полиморфизма с нейрофизиологическими параметрами получены данные о том, что у обследуемых с A/G и А/А генотипами регистрируется более низ- кий уровень инертности процессов торможения в сравнении с оппозитной группой – 57 (40÷63) и 62 (54÷70) (р=0,02).

Параметры, характеризующие вегетативный баланс в состоянии покоя, приведены в таблице 3.

Таблица 3

DBH 444G/A и особенности вегетативного баланса у здоровых европеоидов

	G/G генотип (группа 1) (n=20)	A/G и A/A генотип (группа 2) (n=45)	p
TP (мс2)	1392 (787÷2328)	1612 (1212÷2655)	>0,05
VLF (мс2)	824 (304÷1585)	855 (585÷1599)	>0,05
LF (мс2)	297 (223÷359)	398 (246÷716)	>0,05
HF (мс2)	151 (75÷262)	229 (141÷470)	0,02
LF/HF (у. е.)	2,4 (1,2÷3,9)	1,7 (1,1÷3,1)	>0,05
RRNN (мс)	808 (758÷894)	806 (758÷869)	>0,05
SDNN (мс)	35 (27÷44)	37 (32÷48)	>0,05
RMSSD (мс)	19,5 (13,5÷25,5)	22 (15÷32)	0,06
ЧСС (уд. /мин.)	74,1 (67,1÷79)	75 (68÷80)	>0,05
Мода (у. е.)	0,81 (0,77÷0,87)	0,81 (0,73÷0,88)	>0,05
Амплитуда моды (у. е.)	49,4 (41,8÷60,1)	44,5 (36,5÷55,8)	>0,05
Вариационный размах (у. е.)	0,19 (0,15÷0,25)	0,23 (0,19÷0,29)	0,02
Индекс вегетативного равновесия (у. е.)	267 (172÷381)	173 (133÷292)	0,04
Вегетативный показатель ритма (у. е.)	7 (4,9÷7,9)	5,4 (4,1÷6,7)	0,06
Индекс напряжения (у. е.)	171 (100÷255)	120 (77÷173)	0,06

Примечание. TP – абсолютное значение общей мощности спектра сердечного ритма (СР) (мс2); VLF – абсолютное значение общей мощности спектра СР в очень низкочастотном диапазоне (мс2); LF – абсолютное значение общей мощности спектра СР в низкочастотном диапазоне (мс2); HF – абсолютное значение общей мощности спектра СР в высокочастотном диапазоне (мс2); RRNN – средняя длительность интервалов R-R (мс); Мо – наиболее часто встречающееся значение R-R; ИВР – индекс вегетативного равновесия (у. е.); ПАПР – показатель активности процессов регуляции (у. е); ИН – индекс напряжения регуляторных систем, отражает степень централизации управления СР (у. е.).

По данным спектрального и временного анализов сердечного ритма в группе 1 обнаружен более высокий уровень активности парасимпатического отдела вегетативной нервной системы (ВНС) в сравнении с оппозитной группой, о чем свидетельствуют показатели мощности высокочастотной составляющей (HF) (р=0,02), значение вариационного размаха (р=0,02), отражающие вклад в управление сердечным ритмом парасимпатического отдела ВНС, и более низкое значение индекса вегетативного равновесия (р=0,04). Аналогичные данные получены при проведении ментальной пробы и при гипервентиляции.

Исследование параметров иммунной системы у здоровых европеоидов в зависимости от DBH 444G/A полиморфизма не выявило различий по показателям Т-клеточного звена иммунной системы. В таблице 4 приведены параметры моноцитарно-макрофагального и гуморального звеньев в зависимости от DBH 444G/A полиморфизма.

Показано, что у обследуемых группы 2 определяется более высокий уровень IgM в перифе- рической крови (р=0,05) и более высокий уровень моноцитарного фагоцитоза (р=0,05) в сравнении с оппозитной группой. В то же время показатель активности моноцитов значимо выше в группе с G/G генотипом (р=0,05).

Таблица 4

DBH 444G/A и параметры моноцитарномакрофагального и гуморального звеньев иммунной системы у здоровых европеоидов

Параметры иммунной системы	G/G генотип (группа 1) (n=20)	A/G и A/A генотип (группа 2) (n=45)	p
Фагоцитоз (гранулоцитоз) (%)	64,5 (59÷76)	72 (70÷76)	>0,05
Фагоцитоз (моноцит.) (%)	58 (54÷63)	65 (55÷68)	0,05
IgM (г/л)	1,4 (1,0÷1,9)	1,7(1,5÷2,6)	0,05
IgA (г/л)	2,6 (2,2÷3,1)	2,3 (1,2÷3,8)	>0,05
IgG (г/л)	12,4 (10,4÷17,2)	15,2 (12,4÷23,2)	>0,05

При исследовании сопряженности аллельных вариантов DBH 444G/A с психонейроиммунологи-ческими параметрами у здоровых европеоидов оказалось, что носители А/А и А/G генотипов в сравнении с пациентами с G/G генотипом имеют более высокий уровень экстраверсии; менее выраженную склонность к депрессивным проявлениям; более высокий уровень пролактина в периферической крови; низкий уровень инертности тормозных процессов; преобладание активности парасимпатического отдела вегетативной нервной системы; более высокие параметры моноцитарного фагоцитоза и более высокий уровень IgM в периферической крови. Полученные данные подтверждают наличие стойких функциональных связей между различными уровнями регуляции в организме. Результаты исследования согласуются с опубликованными ранее данными и дополняют их.

Таким образом, полиморфизм гена DBH 444G/A ассоциируется не только с особенностями личностной и психоэмоциональной сфер, нейрофизиологическими параметрами, но и с различиями в функционировании эндокринной и иммунной систем, т. е. с индивидуальными различиями по психонейроиммунологическим характеристикам.