Молекулярно-генетические особенности и клиническое течение опухолей гортани при HPV-инфекции

Согласно общемировой статистике, в 2012 г. зарегистрировано 157 тыс. новых случаев рака гортани. Рак гортани входит в группу опухолей области головы и шеи и находится на 14-м месте в структуре онкологической заболеваемости среди мужчин; среди женщин рак этой локализации встречается значительно реже: из 157 тыс. новых случаев на долю женщин приходится только чуть менее 19 тыс. Смертность от рака гортани за год составила 83 тыс. человек [23]. При этомисследо-ванию заболеваемости раком гортани в России, в частности в Сибири и на Дальнем Востоке, посвящено небольшое количество работ [3–7].

Самым частым вариантом опухоли является плоскоклеточная карцинома. Известно, что канцерогенным действием, наряду с курением и потреблением алкоголя, обладает и вирус папилломы человека [11]. Канцерогенез опухолей гортани является многоступенчатым и растянутым во времени процессом, занимающим чаще всего десятки лет и протекающим на фоне хронических воспалительных заболеваний [25], а зачастую и на фоне хронической инфекции HPV [13]. Согласно метаанализу Hobbs C.G.L. et al. [12], при наличии HPV-инфекции вероятность возникновения опухоли гортани увеличивается в 5,4 раза.

Проведенный обзор литературы об особенностях инфицирования HPV гортани показал, что частота встречаемости вируса варьирует от 24 до 28 % случаев [1, 16, 18]. Обращает на себя внимание факт, что HPV, независимо от своего канцерогенного эффекта, способен модулировать клиническое течение опухолевого процесса и влиять на исход заболевания. При этом разные авторы описывают разнонаправленный характер влияния вируса. С одной стороны, у HPV-позитивных больных на фоне терапии отмечается более благоприятное течение заболевания по сравнению с HPV-негативными, что выражается в увеличении показатели общей и безрецидивной выживаемости [22]. Вероятность смерти у HPV-позитивных пациентов рака гортани на 50 % ниже по сравнению с HPV-негативными [19], причиной чего может быть увеличение радиочувствительности зараженных клеток за счет дезрегуляции клеточного цикла и индукции апоптоза

[8]. С другой стороны, ряд авторов отмечает увеличение количества метастатически пораженных лимфоузлов при HPV-инфекции опухолей головы и шеи [9, 14, 24], что является неблагоприятным прогностическим фактором и должно приводить к снижению выживаемости пациентов. Таким образом, представляется актуальным изучить влияние HPV-инфекции на клинико-патологические показатели и течение заболевания и параллельно оценить влияние HPV на некоторые молекулярные маркеры, такие как экспрессия микроРНК, которые принимают непосредственное участие в регуляции клеточного цикла, апоптоза, инвазии и пролиферации клеток [10, 15, 17, 21].

Материал и методы

Материалом для исследования служил биопсийный и/или операционный материал 55 пациентов с плоскоклеточными карциномами гортани, взятый до проведения химиолучевого лечения. Диагноз был подтвержден гистологически. ДНК выделялась с помощью фенол-хлороформной экстракции и исследовалась методом ПЦР в режиме реального времени на наличие 12 высокоонкогенных типов HPV наборами «AmpliSens» (Россия) согласно протоколу производителя. Кроме того, проведена оценка экспрессии микроРНК-21, -18а, -155, -200а, -200с, -205, -221, -494 в опухолевой и прилежащей нормальной ткани среди пациентов. Для молекулярно-генетического анализа использованы методы экстракции РНК из ткани набором реагентов miRVana™ (Ambion, USA), обратнотранскриптазная ПЦР и ПЦР в режиме реального времени проведены согласно описанным ранее методикам [2]. Уровень экспрессии микроРНК в ткани рассчитан по методу Pfaffl [20].

На каждого пациента были собраны клиникоморфологические данные: пол, возраст, дата начала заболевания, TNM-классификация опухоли, гистологическое строение опухоли, характер проводимого лечения, показатели скорректированной общей выживаемости.

При статистической обработке данных использовались критерии Фишера, Манна – Уитни, Уэлша. Анализ функции выживания осуществлялся с помощью процедуры Каплана – Мейера и критерия

Long Rank test, а также с помощью модели пропорциональных рисков Кокса.

Результаты и обсуждение

Когорта пациентов с раком гортани проанализирована на предмет поражения ткани 12 типами вируса папилломы человека высокого онкогенного риска. Инфицированность HPV опухолевой ткани составила 14,5 % (8/55). В подавляющем большинстве вирус-позитивные случаи являлись моноинфекцией (89 %). Ведущим типом в вирус-позитивных образцах в опухолевой ткани пациентов являлся HPV16 (71,4 %), а остальные HPV31/45/51 встречались по 14,2 %.

Проведена сравнительная оценка экспрессии микроРНК-21, -18а, -155, -200а, -200с, -205, -221, -494 среди HPV-позитивных и HPV-негативных пациентов. Однако ассоциации уровня экспрессии микроРНК с HPV-инфицированием у больных раком гортани не обнаружено (p>0,05), что, вероятно, связано с особенностями выборки и спектра анализируемых микроРНК .

При оценке ассоциаций HPV с клиникоморфологическими параметрами было установлено отсутствие связи вируса с распространенностью опухолевого процесса (T-критерий), лимфогенным метастазированием (N-критерий), степенью дифференцировки, наличием ороговения и инвазией опухоли в подлежащие ткани (p>0,05). Тем не менее показано, что у HPV-позитивных пациентов чаще наблюдается полная регрессия опухоли после воздействия лучевой терапии в неоадъювантном режиме в сравнении с HPV-негативными (p=0,02). Кроме того, лучший ответ на проведение химиолу- чевого лечения отмечался в случае ранней стадии T (p=0,002), а также при назначении более высоких суммарных доз гамма-терапии на очаг опухоли (>45 Гр.) (p=0,002).