Молекулярно-генетические подтипы плоскоклеточного рака пищевода

Рак пищевода – одна из наиболее актуальных проблем в современной онкологии. Прежде всего, это обусловлено тем, что при своевременно установленном диагнозе выполняются различные хирургические вмешательства, в том числе резекции пищевода с пластикой желудочным стеблем или толстой кишкой. Применение высокотехнологичных методов лечения, таких как лапароскопическая резекция пищевода с пластикой, стентирование требует полного представления об особенностях прогрессирования, стадии развития опухоли, наличия регионарных метастазов. Кроме того, фундаментальные вопросы, касающиеся особенностей пато-морфогенеза плоскоклеточного рака пищевода, до сих пор остаются малоизученными.

Целью нашего исследования было морфологическое, иммуногистохимическое изучение биопсийного и операционного материала при плоскоклеточном раке пищевода.

Материалы и методы. Биопсийный и операционный материал от 20 пациентов с установленным плоскоклеточным раком пищевода, в том числе у 12 мужчин и 8 женщин. Средний возраст больных составил 49 лет. Для понимания морфобиологических особенностей структуры плоскоклеточного рака пищевода нами было выполнено иммуногистохимическое исследование, включающее определение Ki-67, p53, р63, СК17, СК5/6, CD44, EGFR, E-кадгерина, рецепторов к эстрогену, прогестерону, коллагена IV типа. Использовались первичные антитела фирмы Ventana «ready to use» в иммуногистостейнере BenchMark Ventana производства США.

Результаты. По степени дифференцировки плоскоклеточный рак был представлен следующими морфологическими вариантами: высокодифференцированным с ороговением (G1, 5 случаев), умереннодифференцированным (G2, 7 случаев), низкодифференцированным (G3, 8 случаев). Глубина инвазии зависела от степени дифференцировки рака пищевода. При G1 плоскоклеточном раке пищевода инвазия была не глубже подслизистой и внутренней мышечной оболочки, в то же время при G2-G3 плоскоклеточном раке достигала наружных мышечных слоев и серозной оболочки. Степень выраженности воспалительной клеточной инфильтрации варьировала и была резковыраженной при G1 карциноме, минимальной при G3 раке.

Сравнительный анализ иммуногистохимических маркеров в ткани опухоли позволил выделить определенные закономерности. Так, было отмечено полное отсутствие рецепторов к гормонам (эстрогену, прогестерону) в ткани опухоли независимо от степени дифференцировки и глубины ее инвазии.

Белок межклеточной адгезии Е-кадгерин давал слабую мембранную экспрессию в различных морфологических вариантах плоскоклеточного рака пищевода, т.е. не имел, на наш взгляд, существенной прогностической ценности.

В то же время, экспрессия белков EGFR, CD44, p53, Ki-67, р63, СК5/6, СК17 имела определенные закономерности в ткани опухоли.

На основании проведенного сравнительного иммуногистохимического исследования разных типов плоскоклеточного рака пищевода мы предложили выделить четыре биологических подтипа.

Первый биологический подтип плоскоклеточного рака характеризовался резкой мембранной экспрессией белка EGFR (3+), резкой мембранной экспрессией белка межклеточной адгезии CD44 (диффузная экспрессия, более 75% площади опухоли), негативной ядерной реакцией мутантного белка p53, умеренной ядерной экспрессией белка Ki-67 (30–35% ядер клеток опухоли). Следует отметить, что при этой форме плоскоклеточной карциномы имелась выраженная цитоплазматическая экспрессия цитокератина CK5/6 всей толщи опухоли, экспрессия белков СК17, р63 была негативной. Такой молекулярно-генетический вариант мы обозначили как дифференцированный, EGFR позитивный. При сопоставлении данного варианта и степени дифференцировки в 80% наблюдений он соответствовал G1 плоскоклеточному раку с ороговением, в 20% – G1 плоскоклеточному раку без ороговения. Второй биологический подтип характеризовался резкой мембранной экспрессией белка EGFR (3+), наличием мембранной реакции белка CD44 в периферических отделах опухоли, высоким уровнем ядерной экспрессии мутантного белка р53 (80–85%), индекса пролиферативной активности Ki-67 (65– 85% ядер клеток). Экспрессия цитокератина СК5/6 имелась в отдельных кластерах опухоли, мозаичной была экспрессия цитокератина СК17, ядерная экспрессия белка р63. Такой подтип опухоли мы обозначили как небазальный, EGFR позитивный.

Третий биологический подтип характеризовался отсутствием мембранной экспрессии белка EGFR (0,+1), негативной реакцией клеток опухоли белка CD44 как в центральных, так и в периферических ее отделах, высоким уровнем пролиферативной активности Ki-67 (70–85%) и уровня апоптоза р53 (80–90%). Экпрессия цитокератинов СК5/6, СК17 была негативной во всех участках опухоли, в то же время ядерная экспрессия белка р63 была резко выраженной в 80–90% ядер клеток. Молекулярно-генетический подтип опухоли мы обозначили как базальный, EGFR негативный.

Четвертый биологический подтип характеризовался отсутствием мембранной экспрессии белка EGFR, белок межклеточной адгезии CD44 в 40% наблюдений был резко позитивный, в 60% – негативный. Уровень экспрессии белка апоптоза р53 была очень высокой (80–90% ядер клеток), индекс пролиферативной активности Ki-67 определялся в пределах 60–75% ядер клеток опухоли. Экпрессия цитокератина СК5/6 была негативной во всех участках опухоли, в то же время ядерная экспрессия белка р63, СК17 была резко выраженной в 90–95% ядер клеток. Такой молекулярно-генетический подтип плоскоклеточного рака мы определили как недифференцированный, EGFR негативный.

Заключение. Полученные результаты морфологического, иммуногистохимического исследований позволяют считать плоскоклеточный рак пищевода гетерогенной структурой,

МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ

имеющей свои молекулярно-генетические подтипы – дифференцированный, EGFR позитивный; небазальный, EGFR позитивный; базальный, EGFR негативный; недифференцированный, EGFR негативный.

Вероятно, рецепторная активность к EGFR исчезает с утратой дифференцированных клонов клеток опухоли, что необходимо учитывать при разработке таргетной терапии. Отсутствие рецепторов гормонов к эстрогену, прогестерону в ткани опухоли независимо от пола пациента указывает на тот факт, что данная категория новообразований не является гормонально-зависимой.

Полученные сведения об особенностях морфобиологического строения плоскоклеточного рака пищевода и его молекулярно-генетических подтипах позволят разработать персонализированный подход в хирургическом лечении и таргетной терапии.