Морфологическая характеристика тучных клеток в плаценте свиньи при физиологической и патологической беременности

Введение. Одной из первоочередных задач ветеринарных специалистов свиноводческих комплексов является получение здорового приплода. Основную роль в развитии эмбриона и рождении жизнеспособного потомства играет плацента [11]. Ссылаясь на учение о гистогематических барьерах, плацентарный барьер является единственным в своем роде непостоянным образованием, связывающим два, по сути чужих в антигенном плане, организма, – матери и плода [9, 10]. Принимая во внимание экспрессию клетками трофобласта чужеродных антигенов, обнаружено отсутствие взаимного отторжения плаценты и плода [6]. Вопрос проявления резидентных тучных клеток в иммунологии плаценты животных представляет большой интерес и остается открытым. Данный тип клеток широко представлен во многих органах и тканях и выполняет ряд модулирующих физиологических реакций, вырабатывая гепарин, гистамин, специфические и неспецифические протеазы. В состав гранул тучных клеток также входят: гиалуроновая кислота, факторы роста, производные ненасыщенных жирных кислот, серотонин, хемоаттрактанты нейтрофилов, дофамин, нейропептиды, протамин, хондроитинсульфат, иммунорегуля-торные цитокины, фосфолипиды, окислительные ферменты (супероксиддисмутаза и пероксидаза) [3, 8]. Разнообразный биохимический состав масто-цитов позволяет им индуцировать воспалительный процесс, координировать врожденные и адаптивные реакции.

Плацента, являясь иммунологически привилегированным органом, локализует в себе множество иммунокомпетентных клеток: CD56 + NK-клетки (80 %), Т-лимфоциты (CD3+) (10 %) и CD14 + макрофаги (10 %) [4]. Тучные клетки детально описаны в тканях плаценты человека при гестозах [1]. В ветеринарной медицине сведения о проявлении мастоцитов в тканях плаценты малочисленны, что и послужило поводом к их изучению.

Цель исследования : изучение морфофункционального состояния тучных клеток плаценты свиньи в норме и патологически протекающей беременности.

Материалы и методы исследования. Исследования проводились на кафедре морфологии, экспертизы и хирургии Уральского ГАУ, КФХ Дергачевой С.И. (г. Полевской) в 2015–2017 гг. В качестве объекта исследования служила эпителиохориальная плацента свиней (n = 25), от которых был отобран материал. В зависимости от наличия либо отсутствия патологии плодоношения выделяли 4 группы плацент: без патологии, мертворождение, мумификация, сочетанная патология мертворождения и мумификации. Процентное соотношение нормального и патологического родового периода представлено на рисунке 1.

Рис.1. Процентное соотношение нормы и патологии в родовом периоде

Кусочки плаценты размером 1,5×1,0×0,5 фиксировали в 10 %-м водном растворе нейтрального формалина, заливали в парафин. Срезы готовили на санном микротоме МС-3, толщина срезов составила 5–7 мкм.

Окрашивание препаратов проводили по традиционным методикам гематоксилином и эозином для общей оценки полноценности развития и морфологического состояния тканей плаценты. Для выявления уникальной тучноклеточной реакции применяли специфическое метахроматическое окрашивание толуидиновым синим и окрашивание Азуром II. Фотографирование и анализ полученных препаратов проводили на световом микроскопе Leica DM750 (Германия) с применением фотокамеры ICC50.

Для проведения ультрамикроскопических измерений материал отбирали при помощи бритвенного лезвия в форме пластинки толщиной 0,09 см и помещали в предварительно очищенный раствор глутарового альдегида 2,5 %-й концентрации. В этом растворе пластинки разрезали на фрагменты величиной 0,1 мм3 и фиксировали в другой порции этого раствора в течение 4–5 ч. Далее кусочки тканей промывали в фосфатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 2 ч при температуре +4 оС. В качестве сред для заливки нами использованы аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получа- ли на ультратомеLKB-III, контрастировали 2 %-м спиртовым раствором уралнилацетата в течение 15 мин и цитратом свинца по Рейнольдсу. Препараты просматривали на электронном микроскопе Morgagni 280 D c увеличением от 1 800 до 44 000 [7].

Оценку морфологических изменений в тканях плаценты проводили по трем основным компонентам: изменения эпителия ворсин хориона (синцитио-и цитотрофобласт), сосудистого звена и соединительнотканного компонента.

Число мастоцитов определяли на 1 мм2 [2]. Для высчитывания индекса дегрануляции (ИД) тучных клеток пользовались формулой Линднера: ИД = (А×0 + Б×1 + В×2 + Г×3)/n, где А – неактивные мастоциты (рис. 2, а); Б – слабо дегранулирующие мастоциты (рис. 2, б); В – умеренно дегранулирующие мастоци-ты (рис. 2, в); Г – сильно дегранулирующие мастоци-ты (рис. 2, г); n – суммарное количество проанализированных тучных клеток. Полученные значения индекса дегрануляции представляют в условных единицах (у.е.) [5].

Степень дегрануляции оценивали как отношение числа сильнодегранулирующих тучных клеток к общему числу анализируемых клеток, выраженное в процентах [2].

а

б

в                                                                       г

Рис. 2. Степень дегрануляции тучных клеток в плаценте свиньи: а – неактивная тучная клетка; б – слабо дегранулирующая тучная клетка; в – умеренно дегранулирующие тучные клетки; г – сильно дегранулирующая тучная клетка. Окрашивание Азур II, ув. 1000

Приведенные в тексте анатомические и гистологические термины соответствуют международным и медицинским терминам.

Результаты исследования. При гистологическом исследовании плаценты свиней, у которых ди- агностировали мумификацию одного или нескольких плодов, мертворожденых поросят, отмечалось общее укорочение ворсин хориона в сравнении с плацентами без патологии беременности (рис. 3, 4).

Рис. 3. Плацента свиньи с патологией мертворождения (окрашивание г.-э., ув. 100)

Рис. 4. Плацента свиньи с патологией мертворождения и мумификации (окрашивание г.-э., ув. 100)

Со стороны синцитио- и цитотрофобласта наблюдалась пролиферативная активность эпителия, гиперплазия, слущивание верхних слоев клеток, локальный некроз фрагментов ворсин (рис. 5). В некоторых случаях одновременно наблюдалась вакуолизация с очагами некроза эпителия цитотрофобласта и синцитиотрофобласта. Отложение фиб-ринойда в межворсинчатом пространстве в большом количестве наблюдалось у свиней с патологией мумификации (рис. 6). Отмечалось незначительное отложение фибринойда у свиноматок без патологии беременности.

Рис. 5. Плацента свиньи. Гиперплазия и некроз эпителия ворсин хориона (окрашивание г.-э., ув. 400)

В сосудистом звене отмечалось перерастяжение кровеносных сосудов, массовый диапедез эритроцитов. В просвет сосудов регистрировалось слущивание клеток эндотелия, внутрисосудистый гемолиз эритроцитов, активное образование внутрисосудистых тромбов. У свиней с сочетанной патологией в зонах некротического распада тканей были локализованы очаги кровоизлияний. Со стороны соединительнотканного компонента у свиней с мертворождением наблюдался отек стромы ворсин.

Рис. 6. Плацента свиньи. Отложение фибринойда в межворсинчатом пространстве (окрашивание г.-э., ув. 200)

Анализируя количественный и качественный состав мастоцитов, выявили, что популяция тучных клеток свиней без патологии плодоношения харак- теризуется относительно небольшой величиной по сравнению со свиньями с патологией плодоношения (табл.).

Количество (кл/1 мм2) и функциональная характеристика тучных клеток в плаценте свиноматок

Показатель	Без патологии	Мертворожденные	Мумифицированные	Мертворожденные и мумифицированные
Сильнодегранулирующие ТК (0)	9,8±3,56	25±8,71	30,4±6,45	47,37±13,3*
Умеренно дегранулирующие ТК (+)	6±1,58	8,4±3,43	14,85±4,29	25,75±6,11*
Слабо дегранулирующие ТК (++)	4,8±3,34	11,8±3,27	11,28±3,94	19±6,84*
Неактивные ТК (+++)	19,2±0,83	29,25±7,36	27,7±6,39	40,12±8,91
Общее кол-во, S = 1 мм2	39,8±6,09	71,8±13,8*	84,28±7,67*	132,25±19,86*
Степень дегрануляции, %	23,8±6,3	34,4±11,08	35,8±8,2	35,5±7,5
Индекс дегрануляции, у.е.	1,14±0,16	1,43±0,32	1,56±0,22	1,6±0,15

* Разница с 1-й группой достоверна (p < 0,01).

Наибольшее количество тучных клеток на еди-   мертворождение и мумификацию носит однона- ницу площади регистрируется у свиней с сочетанной правленный характер (рис. 7).

патологией беременности. Реакция мастоцитов на

Рис. 7. Ворсина плаценты свиньи при рождении мумифицированных плодов. Дегрануляция тучных клеток (ув. 2200)

Выводы

• 1.    Общие морфологические изменения в тканях плаценты животных с различной патологией беременности характеризуется хроническими дистрофическими, а также некробиотическими и сосудисто-стромальными процессами.

• 2.    Плотность тучных клеток на единицу площади в тканях плаценты всех видов животных возрастает при наличии патологии плодоношения. При физиологическом течении беременности единичные тучные клетки локализованы в основном периваску-лярно.

• 3.    Реакция тучных клеток на патологический очаг проявляется в виде активной дегрануляции. Наиболее высокая степень дегрануляционной активности наблюдается при наличии мумифицированных плодов либо резорбционного эмбриона. Секреция носит направленный характер в сторону очагов некроза.