Морфология лимфатических узлов в эксперименте (возрастные и цирканнуальные аспекты)

Полученные данные о сезонной динамике клеточного состава лимфатических узлов (ЛУ) обеих локализаций свидетельствуют о повышении их лимфоцитопоэтической функции в весенне-летний период.

По-видимому, в паховых лимфатических узлах (ПЛУ) именно это сказывается на увеличении их массы и размеров весной и летом.

Брыжеечные лимфатические узлы БЛУ имеют непосредственное отношение к кишке и, следовательно, к факторам внешней среды, в то время как ПЛУ находятся в более опосредованном отношении к последним.

Для БЛУ с их непосредственным отношением к факторам внешней среды, по-видимому, решающим в увеличении массы и размеров осенью и зимой является, судя по соотношению клеток, барьернофильтрационная и иммуноцитопотическая деятельность, которая стимулируется преимущественно в осенне-зимний период.

Цель исследования: получение новых данных с применением количественных методов исследования о структурной органи- зации нормальных лимфатических узлов кролика на различных уровнях организации с учетом их регионарных и возрастных особенностей, соотношения между некоторыми этими уровнями организации, определения особенности морфологии лимфатических узлов по сезонам года.

Материалы и методы исследования

Материалом послужили висцеральные БЛУ и соматические ПЛУ лимфатические узлы 160 клинически здоровых кроликов-самцов породы шиншилла четырех возрастных групп, отражающих основные этапы постнатального онтогенеза от периода но-ворожденности до половой зрелости новорожденных, юных (1 месяц, период окончания молочного питания), пубертатных (3 месяца), зрелых (5 месяцев). Каждая возрастная группа животных (по 40 кроликов) исследована по сезонам. В одну возрастную сезонную группу входило 10 кроликов.

Экспериментальное исследование проводились в соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной диагностики (GLP), этическими нормами, изложенными в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и в соответствии с приказом М3 РФ № 267 от 16.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики» и М3 СССР № 755 от 12.08.1977 г.

У кроликов определяли массу, температуру на кожных участках и в прямой кишке, показатели крови (общее число эритроцитов и лейкоцитов, гемоглобин, СОЭ, лейкоцитарная формула), регистрировали электрокардиограмму.

Во время препарирования на уровне органа давали качественную характеристику ЛУ, вели их подсчет, определяли массу и размеры.

Для фиксации ЛУ использовали 10 %-й и 20 %-й водные растворы формалина. На уровне ворот изготавливали стандартные серийные срезы, окрашивали гематокси-лин-эозином, азур-2-эозином, по Футу, по

Ван Гизону, по Вейгерту, по Фельгену. Давали описательную характеристику структурным компонентам ЛУ.

Давалась качественная характеристика структурам изучаемых органов, проводился количественный морфометрический анализ, включающий стереометрию, количественную характеристику на светооптическом уровне (денситометрия, густота расположения клеточных элементов, клеточный состав). Для морфометрического исследования применялась программа морфометрии «Photo М» (Chernigovsky Loffe Phys Tech inst, версия 1.2.12.2000), а также использовали имидж-анализ.

На клеточном уровне во всех структурных компонентах ЛУ с использованием сетки равномерного шага определяли клеточный состав, который выражали в процентах. При помощи сетки случайного шага определяли число митозов (индекс выражали в промилле) и плотность клеток на единицу площади с последующим пересчетом на единицу объема - 1 мм3.

Результаты и обсуждение

Тканевый уровень. В БЛУ изменения толщины капсулы от 12,0 ± 2,4 мкм у новорожденных до 14,1 ± 1,0 мкм в 5 месяцев недостоверны; относительная площадь капсулы уменьшается с 9,7 до 1,7 % от периода новорожденное™ до 5 месяцев; относительная площадь трабекул от 1 до 5 месяцев увеличивается с 0,9 до 3,5 %; относительная общая площадь синусов возрастает от новорожденное™ до 5 месяцев от 31,7 до 40,1 %.

В ПЛУ изменения толщины капсулы от 11,4 ± 3,2 мкм у новорожденных до 13,8 ± 4,8 мкм в 5 месяцев недостоверны; относительная площадь капсулы уменьшается от новорожденное™ до 5 месяцев с 8,0 до 3,4 %; относительная площадь трабекул увеличивается от 1 до 5 месяцев с 1,4 до 3,4 %; относительная общая площадь синусов снижается от периода новорожден-ности до 5 месяцев с 31,3 до 24,2 %. Характеристика ретикулярной стромы показала, что если в узлах новорожденных кроликов отмечаются только два принципиально различных типа расположения ретикулярных волокон (упорядоченный в корковом веществе с направлением оси перпендикулярно капсуле и ячеистый в мозговом веществе), то к 3 месяцам ретикулоархитектоника усложняется. Появляется густая сеть на месте мантии лимфоидных узелков, а в области светлых центров ретикулярные волокна имеют вид отдельных штрихов [1,3, 4, 5].

Лимфоидные узелки у новорожденных кроликов в исследованных ЛУ отсутствуют. В БЛУ от 1 до 5 месяцев их число без светлых центров не изменяется (20,9 ± 4,2 в 1 месяц и 19,1 ± 4,4 в 5 месяцев), а их число со светлыми центрами увеличивается с 13,4 ± 6,6 до 36,7 ± 12,0. В ПЛУ количество лимфоидных узелков без светлых центров в 1 месяц составляет 14,3 ± 2,0, в 5 месяцев - 14,5 ± 3,4 (в 1 месяц со светлыми центрами они отсутствуют). В БЛУ относительная общая площадь лимфоидных узелков в 1, 3 и 5 месяцев равна соответственно 13,5; 20,3; 16,5 %, ПЛУ - 10,1; 13,6; 12,6 %. Их относительная площадь в БЛУ преобладает в осенне-зимний период (у месячных кроликов в весенне-летний период - 9,2 %, в осенне-зимний - 13,6 %, в 3 месяца - 21,2 и 20,7 % соответственно, в 5 месяцев 14,9 и 17,1 % соответственно), а в ПЛУ - в весенне-летний период (у месячных кроликов в весенне-летний период -

11,9 %, в осенне-зимний - 9,5 %, в 3 ца - 16,7 и 9,8 % соответственно, в 5 цев - 13,8 и 10,6 % соответственно).

Отношение длины окружности меся- меся-

цен-

трального среза к числу лимфоидных узелков в срезе по моде составило 0,46 мм. Вариационная кривая этих величин имела островершинный характер с достоверным коэффициентом эксцесса. Поскольку мода находилась одновременно для узлов обеих локализаций и всех возрастных групп (средние арифметические их отличаются недостоверно), показатель эксцесса (Ех = 2,9 при tex = 4,6) указывает на накопление частот вблизи моды, то есть на по- стоянство отношения длины периметра центрального среза к числу лимфоидных узелков независимо от локализации узлов и возраста животных.

Относительная площадь коркового плато в БЛУ в 1 месяц составляет 7,7 %, в 5 месяцев -11,3 %; внутренняя часть коркового вещества уменьшается в этом возрастном интервале с 22,2 % до 9,5 %; ширина мякотных тяжей у новорожденных - 22,4 ± 1,4 мкм, в 5 месяцев - 49,9 ± 3,2 мкм; относительная площадь мякотных тяжей у новорожденных 16,4 %, в 5 месяцев - 17,4 %. В ПЛУ относительная площадь коркового плато в 1 месяц равна 22,2 %, а к 5 месяцам уменьшается до 9,5 %; внутренняя часть коркового вещества составляет в 1 месяц 30,7 %, в 5 месяцев - 32,7 %; ширина мякотных тяжей в ПЛУ новорожденных равна в среднем 21,2 ± 2,20 мкм, в 5 месяцев -38,5 ± 3,6 мкм; относительная площадь мякотных тяжей у новорожденных - 17,4 %, к 5 месяцам уменьшается до 9,7 %.

Поскольку лимфоидные узелки и мякотные тяжи ЛУ имеют отношение к гуморальному звену иммунных реакций, а пара-кортикальная зона - к клеточному (Сапин М. Р. с соавт., 1978), то на основании приведенных нами морфометрических данных об элементах лимфатической ткани БЛУ и ПЛУ кролика, можно предполагать, что БЛУ с их развитыми лимфодными узелками и мякотными тяжами, как В-зависимыми зонами в иммунных реакциях нормальных кроликов, в большей мере имеют отношение к гуморальному звену, а ПЛУ с их выраженной внутренней частью коркового вещества, как Т-зависимой структурой, - к клеточному [1,2, 3, 5, 6, 7].

Клеточный уровень. В ЛУ лизаций по мере увеличения мантии лимфоидных узелков обеих лока-возраста в отмечается

увеличение содержания малых лимфоцитов: в БЛУ - с 37,7 % в 1 месяц до 49,0 % в 3 месяца и до 54,7 % в 5 месяцев; в ПЛУ содержание малых лимфоцитов в них увеличивается с 44,4 до 61,0 и до 53,1 % соответственно. В светлых центрах происходит снижение процента бластов и больших лимфоцитов и увеличение процента ретикулярных клеток и макрофагов.

Так, в БЛУ в 1 месяц бласты и большие лимфоциты составляют 30,0 %, в 3 месяца -21,8 %, в 5 месяцев - 21,2 %; в ПЛУ в 3 месяца - 28,0 %, в 5 месяцев - 24,0 %. Ретикулярные клетки в светлых центрах БЛУ составляют в 1 месяц 11,4 %, в 3 месяца -14,0 %, в 5 месяцев - 14,7 %; в ПЛУ в 3 месяца - 12,6 %, в 5 месяцев - 13,6 %. Макрофагов в светлых центрах БЛУ содержится в 1 месяц - 1,8 %, в 3 месяца - 2,8 %, в 5 месяцев - 2,2 %; в ПЛУ в 3 месяца -0,9 %, в 5 месяцев - 1,2 %. В диффузной лимфатической ткани коркового вещества ЛУ происходит уменьшение содержания бластов и больших лимфоцитов, увеличение количества макрофагов. В мякотных тяжах с возрастом снижается процент ретикулярных клеток, больших лимфоцитов и бластов и увеличивается число малых лимфоцитов, плазматических клеток и макрофагов [1,2, 3, 5].

Митотическая активность с возрастом снижается в ЛУ обеих локализаций. В корковом плато БЛУ митотический индекс (в промилле) у новорожденных 11,2 ± 1,2, в 1 месяц - 11,2 ± 1,1, в 3 месяца - 7,4 ± 0,8, в 5 месяцев - 5,8 ± 0,4; в корковом плато ПЛУ он составляет у новорожденных 15,0 ± 1,8, в 1 месяц - 10,0 ± 0,9, в 3 месяца - 5,0 ± 0,6, в 5 месяцев - 4,4 ± 0,3.

Заключение

Поскольку содержание бластных форм и митозов свидетельствует о состоянии лимфоцитопоэтической функции, увеличение числа плазмоцитов говорит об усилении функции иммуноцитапоэза, а содержание макрофагов - об интенсивности барьерно-фильтрационной деятельности узлов, то на основании анализа возрастной динамики клеточного состава структур брыжеечных и паховых узлов кролика можно сделать следующие выводы.

Динамика бластных форм, больших лимфоцитов и митозов говорит о том, что в интервале новорожденность - 5 месяцев происходит ослабление интенсивности лимфоцитопоэза в ЛУ кролика, которое больше выражено в БЛУ, чем в ПЛУ. Усиление барьерно-фильтрационной и имму-ноцитопоэтической функций ЛУ по мере увеличения возраста кроликов более ражено в БЛУ.

Сезонные изменения клеточного става также более выражены в БЛУ, вы-

со- они

проявляются однотипно для всех структур в увеличении числа бластов, больших лимфоцитов и делящихся клеток в весеннелетний период и тенденции к увеличению плазматических клеток и макрофагов осенью и зимой. В светлых центрах БЛУ кроликов 5 месяцев бласты и большие лимфоциты составляют 21,5 % летом и 15,4 % зимой, митотический индекс летом равен 24,4 %о, зимой - 14,9 %о.

Годовая динамика соотношения клеток ПЛУ менее выражена, чем в БЛУ, и проявляется в тенденции к увеличению процента бластов, больших лимфоцитов и делящихся клеток в весенне-летний период.

Так, в светлых центрах лимфоидных узелков ПЛУ пятимесячных кроликов бласты и большие лимфоциты летом составляют 27,1 %, зимой - 25,2 %, митотический индекс летом равен 10,9 %о, зимой - 10,6 %о. Более выраженная реакция клеточного состава БЛУ по сравнению с ПЛУ на смену времен года может быть объяснена с точки зрения положения этих органов в организме и отношения к ним других органов.