Накопление мутантного белка p53 при аномалиях экспрессии белка клеточной адгезии Е-кадхерина в колоректальных опухолях

Злокачественный и метастатический потенциал любой опухоли, связан с ее пролиферативной и апоптотической активностью и степенью межклеточного взаимодействия опухолевых клеток. Одним из основных регуляторов кле- точного цикла является супрессорный белок р53, экспрессирующийся в большинстве колоректальных опухолей. Гиперэкспрессия белка р53 обычно ассоциируется с высоким риском развития местных рецидивов и низкой выживаемостью. Одним из маркеров прогрессии эпителиальных опухолей является снижение экспрессии Е-кадхерина (E-cad), опосредующего адгезионные межклеточные контакты типа «зоны слипания» (zona adhaerence). Известно, что образование эпителиального пласта (развитие межклеточных контактов) коррелирует с накоплением белка p53 дикого типа, в то время как снижение экспрессии E-cad или разобщение межклеточных контактов, наоборот, вызывает дестабилизацию и возникновение и накопление мутантного белка p53 и, как следствие, ингибируют апоптоз опухолевых клеток.

Цель исследования – изучить уровень экспрессии белка p53 в колоректальных опухолях с различными аномалиями в экспрессии белка E-cad.

Материал и методы. Материалом исследования послужили послеоперационные образцы ткани опухоли 70 больных раком толстой кишки (♀ - 38, ♂ - 32), получивших лечение в Казахском НИИ онкологии и радиологии в 2006-08 гг. После стандартной процедуры фиксации и проводки материал подвергался гистологическому и иммуногистохимическому (ИГХ) исследованию. ИГХ исследование проводилось с использованием моноклональных антител к p53 (клон DO-7) и к E-cad (клон NCH-38) производства Dako (Denmark).

Все больные были разделены на 2 группы по типу экспрессии E-cad: группа 1 - с нормальной экспрессией (>80% E-cad+ клеток, мембранная экспрессия Е-cad) и группа 2 с аномальной экспрессией E-cad (<80% E-cad+, мембранноредуцированная, цитоплазматическая или гетерогенная экспрессия E-cad). Оценка экспрессии p53 проводилась путем подсчета процента позитивных опухолевых клеток на 1000 клеток при помощи компьютерной системы анализа изображений «ВидеоТест – Мастер морфология 4.0». Статистическая обработка выполнена при помощи статистического пакета SPSS 13 (SPSS Corp., USA).

Результаты. Преобладающим гистологическим типом изученных колоректальных опухолях была аденокарцинома различной степени дифференцировки, она была отмечена в 78,5% случаев (55 из 70), слизистая аденокарцинома была отмечена в 14,3% (10 из 70). Прочие гистотипы (перстневидно-клеточный, плоскоклеточный и недифференцированный рак) были единичными и составили 7,2% (5 из 70).

По типу экспрессии Е-cad все колоректальные опухоли были разделены на 2 группы: с нормальной (группа 1) и аномальной (группа 2) экспрессией E-cad. Нормальная экспрессия E-cad сохранялась в 19 из 70 КО (27,1%). У 51 больного с опухолями толстой кишки (72,9%) отмечались различные аномалии в экспрессии E-cad, такие как цитоплазматическая, гетерогенная и мембранно-редуцированная экспрессия. Кроме того, в группе 1 в 13 из 19 КО (72,2%) отмечалась экспрессия E-cad на >80% опухолевых клеток. В то время как в группе 2 экспрессия E-cad на >80% сохранялась лишь в 8 из 51 КО (16,0%). Среднее количество p53+ клеток в группе с нормальной экспрессией (группа 1) E-cad составил 32,3%. А в группе с аномальной экспрессией E-cad (группа 2) – 59,8%. Возрастание числа опухолей с аномальной экспрессией E-cad, ассоциированное с увеличением количества p53+ клеток, является статистически достоверным (p<0,015). Выявлена отрицательная корреляционная зависимость между уровнем и характером экспрессии Е-cad и количеством клеток с повышенной экспрессией белка p53 мутантного типа в опухолях толстой кишки (r=-0,373, p=0,028).

Выводы. В ходе проведенного нами исследования характера и уровня экспрессии E-cad и супрессорного белка p53 в колоректальных опухолях было продемонстрировано, что мутации Е-cad и разобщение межклеточных контактов могут вызывать накопление в опухолевых клетках белка р53. Выявленная статистически обратно пропорциональная зависимость между изученными молекулярно-биологическими маркерами опухолей толстой кишки позволяет предположить, что E-cad не только обусловливает метастатический потенциал опухолей толстой кишки за счет снижения адгезии опухолевых клеток, но и обладает механизмами регуляции клеточного цикла в клетках опухолей толстой кишки.