Некоторые показатели микроэкологии слизистой оболочки полости рта у больных раком легкого в условиях противоопухолевой химиотерапии

С современных позиций нормальная микрофлора – микробиота – рассматривается как качественное и количественное соотношение популяций микробов отдельных органов и систем, поддерживающих биохимическое, метаболическое и иммунологическое равновесие организма хозяина, необходимое для сохранения здоровья человека. При продолжительном приеме цитостатических препаратов и иммунодепрессивном влиянии опухоли микробиоценозы выходят из состояния равновесия, что приводит к снижению колонизационной резистентности [1, 2]. Эти процессы сопровождаются значительным уменьшением числа нормальных симбионтов в естественных местах их обычного обитания; полным исчезновением некоторых видов симбионтов и увеличением содержания атипичных форм, а также микробов, в норме не встречающихся в организме; появлением микробов в полостях, органах и тканях, в которых они обычно не встречаются. Уменьшение количества нормальных симбионтов обычно не сопровождается клиническими проявлениями. Но уже на этой стадии нарушается одна из главных функций, осуществляемых нормальной флорой, – защита организма от агрессии болезнетворных микробов [6]. В условиях ослабления защитных свойств организма преимущество в размножении могут получить гнилостные микробы или грибковая флора, что приводит к развитию местных воспалительных процессов (стоматит, заеды, налеты на слизистой оболочке и т.д.). Развитие гнилостной микрофлоры в полости рта приводит к возникновению процессов гниения (разложение белков с образованием фенола, скатола, индола, крезола, сероводорода, аммиака и др. токсических веществ) и процессов брожения.

Целью нашего исследования явилось изучение механизма нарушения колонизационной резистентности организма больных раком легкого в условиях цикловой противоопухолевой химиотерапии.

Материал и методы

Нами было обследовано 20 мужчин и 3 женщины с морфологически подтвержденным диагнозом рак легкого (РЛ) II–IVстадии, находившиеся на обследовании и лечении в отделении химиотерапии НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. Все больные получали противоопухолевую химиотерапию по одной из схем: 1) паклитаксел – 175 мг/м2 в 1-й день, карбоплатин – 300 мг/м2 во 2- й день внутривенно; 2) адриабластин – 50 мг/м2 в 1-й день, циклофосфан – 750 мг/м2 и метотрексат – 30 мг/м2 во 2-й день внутривенно; 3) винкристин 1,2 мг/м2 и карбоплатин – 300 мг/ м2 в 1-й день, циклофосфан – 600 мг/м2 во 2-й день и этопозид – 120 мг/м2 с 3-го по 5-й дни внутривенно. Группу сравнения составили 18 здоровых мужчин и 2 здоровые женщины.

Материалом для исследования явилась не-стимулированная смешанная слюна, мазки со слизистой оболочки полости рта. Содержание секреторного иммуноглобулина А в слюне определяли методом радиальной иммунодиффузии с использованием моноспецифических сывороток [4]. Определение активности лизоцима проводили с использованием бактериальной суспензии культуры микрококка. Степень лизиса культуры живого микрококка определяли на фотоэлектроколориметре. Исследование качественного состава микрофлоры ротовой полости и мокроты проводили методом посевов на стандартные питательные среды. У культур выделенных стафилококков и стрептококков изучали признаки патогенности, определяли чувствительность к антибиотикам [3, 5].

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Результаты проведенного исследования показали, что содержание sIgA у больных РЛ составляло 0,37 ± 0,04 г/л, в группе сравнения этот показатель был достоверно выше - 0,70 ± 0,05 г/л (табл.1). После проведения первого цикла химиотерапии содержание sIgA составило 0,36 ± 0,07 г/л. После второго цикла химиотерапии этот показатель достоверно снижался до 0,27 ± 0,05 г/л. Содержание лизоцима слюны в группе сравнения составило 44,50 ± 2,50 мкг/мл, в то время как у больных РЛ этот показатель был достоверно ниже - 30,20 ± 4,30 мкг/мл. После первого цикла противоопухолевой химиотерапии количество лизоцима составило 28,50 ± 2,70 мкг/мл, после второго цикла этот показатель достоверно снижался до 19,30 ± 3,80 мкг/мл (табл. 1). Таким образом, слюна больных РЛ до проведения противоопухолевой химиотерапии отличается более низким содержанием уровня sIgA и лизоцима, чем в группе сравнения. После проведения второго цикла противоопухолевой химиотерапии у больных РЛ наблюдается достоверное снижение этих показателей.

Было установлено, что микрофлора ротовой полости у здоровых людей значительно отличалась по качественному составу от таковой у больных РЛ (табл. 2), еще до проведения химиотерапии. Микрофлора ротовой полости в группе сравнения была представлена в основном кокковой флорой: стафилококки, стрептококки. Кроме того, обнаруживались энтеробактерии, грибы рода Кандида. Наиболее часто высевались представители рода стрептококков – 57 % от всех высеваемых в этом биотопе микроорганизмов. Представители рода стафилококков занимали 22 %, на долю энтеробактерий приходилось до 15 %, около 4 % занимали грибы рода Кандида и 2 % нейссерии. При этом было отмечено, что высеваемые стафилококки и стрептококки не имели признаков патогенности. У больных РЛ до начала химиотерапии микрофлора ротовой полости также была представлена кокковой флорой, высевались энтеробактерии, грибы рода Кандида. На долю стафилококков и стрептококков приходилось по 35 %, энтеробактерии составляли 20 %, грибы рода Кандида – 10 %. Высеваемые стафилококки и стрептококки не имели признаков патогенности.

После первого цикла химиотерапии в группе больных РЛ на долю стафилококков приходилось 40 %, на долю стрептококков – 29 %, энтеробактерии составляли 19 % и грибы рода Кандида - 12 %. После второго цикла химиотерапии доминирующее положение в микробиоценозе ротовой полости занимают стафилококки, количество их достигало 54 %, реже высевались стрептококки - 8 %. Высеваемость грибов рода Кандида увеличилась до 24 %, энтеробактерии составили 14 %.

Таблица 1

Содержание секреторного иммуноглобулина А и лизоцима в слюне больных раком легкого в условиях противоопухолевой химиотерапии, X ± m

Группы обследуемых	Показатели
	SIg A (г/л)	Лизоцим (мкг/мл)
Здоровые лица, группа сравнения (n=20)	0,70 ± 0,05	44,50 ± 2,50
Больные раком легкого до начала лечения (n=20)	0,37 ± 0,04 p<0,05	30,20 ± 4,30 p<0,05
Больные раком легкого после I цикла химиотерапии (n=24)	0,36 ± 0,07 p1>0,05	28,50 ± 2,70 p1>0,05
Больные раком легкого после II цикла химиотерапии (n=17)	0,27 ± 0,05 p1<0,05	19,30 ± 3,80 p1<0,05

Примечание: p – уровень достоверности результатов между группой сравнения и группой больных раком легкого до лечения;

p₁ - уровень достоверности результатов между группами больных раком легкого до лечения и после I, II циклов.

Таблица 2

Высеваемость микроорганизмов ротовой полости здоровых людей и больных раком легкого в условиях противоопухолевой химиотерапии, (%)

Группы обследуемых	Стафилококки	Стрептококки	Энтеробактерии	Нейссерии	Грибы рода Кандида
Здоровые лица, группа сравнения (n=20)	22	57	15	2	4
Больные раком легкого до начала лечения (n = 20)	35	35	20	-	10
Больные раком легкого после I цикла химиотерапии (n = 24)	40	29	19	-	12
Больные раком легкого после II цикла химиотерапии (n = 17)	54	8	14	-	24

Примечание: процентное содержание микроорганизмов рассчитано на группу обследуемых.

Таблица 3

Биологические свойства отдельных представителей прокариотической микрофлоры ротовой полости онкологических больных после химиотерапии, Х ± m

Вид микроорганизмов	Гемолитические свойства, мм		Лецитиназная активность, мм		Плазмокоагулазные свойства, ч
	После I цикла химиотерапии	После II цикла химиотерапии	После I цикла химиотерапии	После II цикла химиотерапии	После I цикла химиотерапии	После II цикла химиотерапии
Стафилококки	10,10 ± 0,20	15,50 ± 0,25 р<0,05	9,20 ± 0,12	15,80 ± 0,21 р<0,05	4,20 ± 0,19	2,20 ± 0,15 р<0,05
Стрептококки	8,50 ± 0,23	16,00 ± 0,35	7,40 ± 0,16	11,80 ± 0,17	4,50 ± 0,26	2,50 ± 0,17
		р<0,05		р<0,05		р<0,05

Примечание: p – уровень достоверности результатов между I и II циклами химиотерапии.

Таблица 4

Препарат	Микроорганизмы
	Стафилококки			Стрептококки
	Сроки исследования
	До лечения	После I цикла химиотерапии	После II цикла химиотерапии	До лечения	После I цикла химиотерапии	После II цикла химиотерапии
Ампицилин	14 ± 0,08	9 ± 0,05 р<0,05	8 ± 0,05 р<0,05 p1<0,05	13 ± 0,11	12 ± 0,09 р<0,05	7 ± 0,08 р<0,05 p1<0,05
Ванкомицин	21 ± 0,17	17 ± 0,11 р<0,05	14 ± 0,09 р<0,05 p1<0,05	23 ± 0,20	21 ± 0,17 р<0,05	16 ± 0,09 р<0,05 p1<0,05
Клиндамицин	25 ± 0,15	23 ± 0,13 р<0,05	21 ± 0,07 р<0,05 p1<0,05	23 ± 0,13	19 ± 0,10 р<0,05	11 ± 0,10 р<0,05 p1<0,05
Гентамицин	21 ± 0,12	17 ± 0,09 р<0,05	15 ± 0,05 р<0,05 p1<0,05	20 ± 0,07	19 ± 0,06 р<0,05	10 ± 0,05 р<0,05 p1<0,05
Цефоперазон	27 ± 0,13	23 ± 0,07 р<0,05	19 ± 0,06 р<0,05 p1<0,05	29 ± 0,14	25 ± 0,17 р<0,05	19 ± 0,11 р<0,05 p1<0,05

Примечание: p – уровень достоверности результатов между группой сравнения и группой больных раком легкого до лечения; p₁ - уровень достоверности результатов между группами больных раком легкого до лечения и после I, II циклов.

Чувствительность к антибиотикам некоторых групп микроорганизмов, выделенных из ротовой полости больных раком легкого, до и в различные сроки после химиотерапии, мм

Стрептококки и стафилококки после первого цикла химиотерапии проявляли умеренные признаки патогенности (табл. 3). При этом зона гемолиза стафилококков составляла 10,10 ± 0,20 мм, зона лецитиназы – 9,20 ± 0,12 мм, время свертывания плазмы – 4,20 ± 0,19 ч. У выделенных стрептококков зона гемолиза – 8,50 ± 0,23 мм, зона лецитиназы – 7,40 ± 0,16 мм, время свертывания плазмы составило 4,50 ± 0,26 ч. После второго цикла химиотерапии увеличиваются признаки патогенности. Зона гемолиза у стафилококков достоверно увеличилась до 15,50 ± 0,25 мм, зона лецитиназы – до 15,80 ± 0,21 мм. Снизилось время свертывания плазмы – 2,20 ± 0,15 ч. У выделенных стрептококков зона гемолиза эритроцитов и зона лецитиназы увеличилась и составила 16,00 ± 0,35 мм и 11,80 ± 0,17 мм соответственно. Время свертывания плазмы снизилось до 2,50 ± 0,17 ч.

При определении чувствительности к антибиотикам (табл. 4) было выявлено, что у больных раком легкого до лечения стафилококки и стрептококки были устойчивы к действию ампицилина, зона задержки роста составляла

14 ± 0,08 мм и 13 ± 0,11 мм соответственно. Стафилококки проявляли высокую чувствительность к действию ванкомицина (21 ± 0,17 мм), клиндамицина (25 ± 0,15 мм), гентамицина (21 ± 0,12 мм) и цефоперазона (27 ± 0,13 мм). Стрептококки также проявляли чувствительность к действию этих антибиотиков. После первого цикла химиотерапии повышается устойчивость стафилококков и стрептококков к действию ампицилина (9 ± 0,05 и 12 ± 0,09 мм соответственно). Снижается чувствительность стафилококков и стрептококков к действию ванкомицина – 17 ± 0,11 и 21 ± 0,17 мм соответственно. Сниженную чувствительность стафилококков и стрептококков получили и к действию клиндамицина, гентамицина и цефоперазона. После второго цикла химиотерапии стафилококки наиболее чувствительны к действию клиндамицина – 21 ± 0,07 мм и цефоперазона – 19 ± 0,06 мм. При этом повышается устойчивость к действию ванкомицина и гентамицина – 14 ± 0,09 мм и 15 ± 0,05 мм соответственно, повышается резистентность к действию ампицилина – 8 ± 0,05 мм. Стреп- тококки наиболее чувствительны к действию цефоперазона и ванкомицина – 19 ± 0,11 мм и 16 ± 0,09 мм соответственно. Повышается резистентность к действию клиндамицина, гентамицина и ампицилина (табл. 4).

Таким образом, в составе микрофлоры ротовой полости у больных РЛ до лечения чаще обнаруживаются представители рода стафилококков и стрептококков. После проведения каждого цикла противоопухолевой химиотерапии увеличивается количество стафилококков, грибов рода Кандида и снижается количество стрептококков, нарастают признаки патогенности. Отмечается тенденция к обеднению видового и родового разнообразия микроорганизмов. По мере нарастания числа циклов противоопухолевой химиотерапии происходят значительные изменения в качественном составе микрофлоры мокроты. Постепенно доми- нирующее положение занимают представители рода стафилококков. Наблюдается увеличение высеваемости грибов рода Кандида. Стафилококки и стрептококки наиболее чувствительны к действию цефоперазона и устойчивы к ампицилину.