Новые маркеры аутоиммунного воспаления при атеросклерозе

В настоящее время убедительно доказано, что атеро-генность сыворотки крови обусловлена присутствием множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛПНП), аутоантител к ним, иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, и реактивности системы комплемента. Иммунизация окисленными ЛПНП (окЛПНП) животных, содержащихся на обогащенной холестерином диете, вызывает развитие у них атеросклероза только в 50% случаев. Полученные экспериментальные результаты свидетельствуют о том, что иммунная реакция организма на окЛПНП может быть как про-атерогенной, так и анти-атерогенной. Подобные результаты не могут быть получены у людей, поэтому необходимы принципиально новые биохимические и иммунологические маркеры для ранней диагностики, прогноза течения атеросклеротического процесса и контроля эффективности терапии данной патологии.

Цель исследования: разработка новых простых и доступных маркеров для ранней диагностики атеросклероза на доклинической стадии и прогностических тестов оценки характера аутоиммунной реакции на ммЛПНП (атерогенный или анти-атерогенный аутоиммунный ответ на ммЛПНП у людей) для выбора тактики лечения.

Материалы и методы. В работе исследовали сыворотки крови 750 относительно здоровых людей, 742 неврологических больных с инструментально подтвержденным атеросклерозом каротидных артерий. Забор крови проводили натощак из локтевой вены, отделяли сыворотку и определяли содержание ммЛПНП согласно методике, разработанной нами [1]. ммЛПНП сыворотки крови агрегировались в буфере, содержащем 15% поли-винилпирролидон (ПВП) 12600±2700 («Синтвита», Россия), и степень агрегации измеряли спектрофотометрически при длине волны 450 нм после 10 мин инкубации. При уровне содержания более 10 ЕД констатировали повышенный уровень ММ-ЛПНП. Иммунные комплексы, содержащие ммЛПНП (ИК-ммЛПНП) определяли согласно методике, разработанной нами [2]. ИК-ммЛПНП агрегировали в специальном буфере, содержащем ПЭГ3350 и ПВП-12600, осаждали центрифугированием и в преципитате определяли холестерин. Атерогенность иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, определяли в тестах связывания комплемента морской свинки и агрегации тромбоцитов человека [3]. Комплемент активирующую функцию гетерофильных антител (КАФГА) определяли по разработанной ранее методике [4]. В гемолитическом тесте КАФГА вместо гемолитической сыворотки кролика использовали эндогенные гетерофильные антитела, присутствующие в сыворотке крови человека. Функциональную активность системы комплемента оценивали в гемолитическом тесте с «нагрузкой» в виде 0,29М NaCl в инкубационной смеси, как описано в работе [5]. Оценку состояния стенки сонных артерий проводили ультразвуковым методом исследования. Проводили импульсно-волновое доплеровское сканирование. Толщину интимо-медиального слоя сонных артерий измеряли с помощью компьюторной программы Prosound (R. Seltzer, USA).

Результаты и обсуждение. 1. Исследования ммЛПНП в сыворотке крови у 750 относительно здоровых людей выявили повышенный уровень у 285 человек (38%). Из них были отобраны молодые люди до 40 лет (n=21) с повышенным уровнем ммЛПНП при нормальном холестерине и проведены дуплексные сканирования ветвей дуги аорты. В результате исследования у 12 человек (57%) было выявлено утолщение интимо-медиального слоя сонных артерий и подтвержден инструментально наличие атеросклероза. У остальных 9 человек (43%) данный показатель оставался в пределах нормальных величин и свидетельствовал о том, что повышенный уровень ммЛП у данных лиц не привел к морфологическим изменениям (утолщению) интимо-медиального слоя в сонных артериях.

• 2 . У больных с атеросклерозом каротидных и коронарных артерий в 100% наблюдается повышенный уровень ммЛПНП.

• 3 .Интересные результаты получены при исследовании иммунных комплексов, содержащих мЛПНП, у 69 неврологических больных. Для оценки информативности новой тест-системы определения иммунных комплексов, содержащих мЛПНП, были использованы коммерческие ИФА наборы «MDA-oxidised LDL» и «OLAB IgG anti oxidized LDL» фирмы «Biomedica» (Австрия). По данным ультразвукового сканирования дуги аорту больные были

распределены на 4 группы: 1 гр. – отсутствие изменений в ТИМ; 2 гр. – атеросклеротическая бляшка (АСБ) (<50% ссужение просвета); 3 гр. – АСБ (от 50 до 70%); 4 гр. – АСБ (более 70% cсужения просвета артерий). Определение МДА-окЛПНП дало следующие средние значения по группам 1,2,3,4 соответственно: (2,8±3,3; 2,7±3,7; 1,1±1,6; 2,3±3,3 мкг/мл). Результаты по антителам к окЛПНП (345±327; 411±489; 232±308; 264±317 МЕ/мл). Получены следующие данные по иммунным комплексам, содержащим ммЛПНП (холестерин в преципитате ИК, мг/дл): 13,3±12,9; 16,5±10,9; 17,6±20,0; 9,9±5,6. Таким образом, полученные результаты не выявили однозначных сдвигов в тестированных показателях в зависимости от тяжести атеросклеротического процесса и подтверждается противоречивыми литературными данными. Дальнейший анализ иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, при делении групп на подгруппы (1 подгруппа – меньше 10 мг/дл холестерина в ИК, 2 подгруппа – больше 10 мг/дл холестерина в ИК), выявил обратную связь с тяжестью атеросклеротического процесса. Т.е. количество больных с повышенным уровнем холестерина в иммунных комплексах уменьшалось от 2 группы к 4 группе. Следовательно, это позволяет констатировать о повышенной ате-рогенности ИК, содержащих ммЛПНП, и быстрой элиминации их из циркуляции.

Заключение. Разработанные новые маркеры позволят заняться ранней диагностикой атеросклероза на доклинической стадии, прогнозировать течение патологического процесса, а также контролировать эффективность проводимой терапии.