Образование биологически активных пептидов в мясном сырье под влиянием лизатов стартовых бактериальных культур

Автор: Чернуха И.М., Машенцева Н.Г., Вострикова Н.Л., Ковалев Л.И., Ковалева М.А., Афанасьев Д.А.

Журнал: Сельскохозяйственная биология @agrobiology

Рубрика: Функциональность пищевых продуктов

Статья в выпуске: 6 т.55, 2020 года.

Бесплатный доступ

В настоящее время препараты, основанные на лизатах бактерий, используются главным образом в медицине. В пищевых производствах, в том числе в мясной промышленности при получении функциональных продуктов, бактериальные лизаты пока что мало распространены. Их перспективность для получения функциональных продуктов предсказуема, но эффективность и специфичность действия, которые зависят от особенностей штамма и метода дезинтеграции клеток, требует изучения. У стартовых культур идентифицирован набор пептидаз, в частности эндопептидазы, аминопептидазы, дипептидазы, трипептидазы и пролинспецифические пептидазы, что стимулирует интерес к применению лизатов этих микроорганизмов в пищевых биотехнологиях. В настоящей работе мы показали, что лизаты штаммов Pediococcus pentosaceus 28, Staphylococcus carnosus 108, Lactobacillus curvatus 1, P. acidilactici 38, L. sakei 103, L. sakei 105, L. curvatus 2 и L. acidophilus AT-41, полученные при физическом разрушении клеток, обладают наиболее широкими спектрами ферментов и биологически активных веществ. Нашей целью было определение биохимического состава и ферментативной активности лизатов стартовых бактериальных культур и их роли в образовании биологически активных пептидов в мясном сырье. Рассмотрены два способа получения лизатов из клеток стартовых культур - ферментативный и физический. Первый способ заключается в ферментативной обработке суспензии бактериальных клеток ферментом лизоцимом с последующим отделением экстракта от клеточного дебриса путем центрифугирования, второй - в ультразвуковой обработке. По результатам исследований было выявлено, что наиболее эффективным является физический способ лизиса. Проведена комплексная оценка полученных лизатов - определены протеолитическая, липолитическая и коллагеназная активности, содержание органических кислот, концентрация белка и количество свободных аминокислот. С применением тест-систем API®ZYM определены ферментативные активности лизатов, характерные для использованных видов микроорганизмов. Наиболее широкий спектр внутриклеточных ферментов, а именно лейциновая и валиновая ариламидаза, кислая фосфатаза, нафтол-AS-BI-фосфогидролаза и b-галактозидаза, представлен в лизатах штаммов L. curvatus 2, L. acidophilus AT-41, P. acidilactici 38 и S. carnosus 108. Наибольшую протеолитическую активность выявили в лизатах штаммов S. carnosus 108 (115,94 ед. ПС/мг белка), L. acidophilus AT-41 (66,7 ед. ПС/мг белка), L. curvatus 1 (91,03 ед. ПС/мг белка) и L. curvatus 2 (72,20 ед. ПС/мг белка). Содержание яблочной, молочной и янтарной кислот в лизатах варьировало в пределах соответственно 0,002-0,02; 0,02-0,06 и 0,2-0,9 мг/100 г образца. Наиболее широкий спектр свободных аминокислот представлен в образце лизата из P . acidilactici 38 (13 из 17 исследуемых аминокислот), узкий спектр - в образце лизата из L . sakei 105 (7 из 17 исследуемых аминокислот). Сравнительный анализ полученных двумерных электрофореграмм ферментированного мясного сырья показал как общее действие (снижение количества белкового материала), так и специфичность влияния лизатов на ряд белков в зависимости от используемого лизата стартовой культуры (белки-мишени, в частности актин скелетной мышцы, образование белковых конъюгатов). Полученные данные позволяют рассматривать лизаты стартовых культур как источник ряда ферментов для практического применения в пищевой промышленности (например, для повышения функционально-технологических и биокоррегирующих характеристик мясных продуктов).

Еще

Лизаты, стартовые культуры, ферментолиз, биологически активные пептиды, двумерный электрофорез, ief-page, maldi-tof, масс-спектрометрическая идентификация

Короткий адрес: https://sciup.org/142229449

IDR: 142229449   |   DOI: 10.15389/agrobiology.2020.6.1182rus

Список литературы Образование биологически активных пептидов в мясном сырье под влиянием лизатов стартовых бактериальных культур

  • Чернуха И.М., Котенкова Е.А., Василевская Е.Р., Иванкин А.Н., Лисицын А.Б., Федулова Л.В. Изучение биологических эффектов ягод годжи разного географического происхождения на крысах с алиментарной гиперхолестеринемией. Вопросы питания, 2020, 89(1): 37-45 (doi: 10.24411/0042-8833-2020-10004).
  • Vostrikova N.L., Chernukha I.M. Identification of tissue-specific proteins and peptides forming innovative meat products corrective properties to confirm authenticity of meat raw materials. Foods and Raw Materials, 2018, 6(1): 201-209 (doi: 10.21603/2308-4057-2018-1-201-209).
  • Marco M.L., Heeney D., Binda S., Cifelli C.J., Cotter P.D., Foligne B., Ganzle M., Kort R., Pasin G., Pihlanto A., Smid E.J., Hutkins R. Health benefits of fermented foods: microbiota and beyond. Current Opinion in Biotechnology, 2017, 44: 94-102 (doi: 10.1016/j.copbio.2016.11.010).
  • Al Alwan I., Khadora M., Amir L., Nasrat G., Omair A., Brown L., Al Dubayee M., Badri M. Turner syndrome genotype and phenotype and their effect on presenting features and timing of diagnosis. International Journal of Health Sciences, 2014, 8(2): 195-202 (doi: 10.12816/0006086).
  • §anlier N., Gokcen B.B., Sezgin A.C. Health benefits of fermented foods. Review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2019, 59(3): 506-527 (doi: 10.1080/10408398.2017.1383355).
  • Cooper G.M. The cell: a molecular approach. Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts, 2000.
  • Vinogradov E., Sadovskaya I., Grard T., Murphy J., Mahony J., Chapot-Chartier M.-P., van Sinderen D. Structural studies of the cell wall polysaccharide from Lactococcus lactis UC509.9. Carbohydrate Research, 2018, 461: 25-31 (doi: 10.1016/j.carres.2018.03.011).
  • Matthews A., Grimaldi A., Walker M., Bartowsky E., Grbin P.R., Jiranek V. Lactic acid bacteria as a potential source of enzymes for use in vinification. Applied and Environmental Microbiology, 2004, 70(10): 5715-5731 (doi: 10.1128/AEM.70.10.5715-5731.2004).
  • Kunji E.R., Mierau I., Hagting A., Poolman B., Konings W.N. The proteolytic systems of lactic acid bacteria. Review. Antonie Van Leeuwenhoek, 1996, 70(2-4): 187-221 (doi: 10.1007/bf00395933).
  • Law J., Haandrikman A. Proteolytic enzymes of lactic acid bacteria. International Dairy Journal, 1997, 7(1): 1-11 (doi: 10.1016/0958-6946(95)00073-9).
  • Kunji E.R., Mierau I., Poolman B., Konings W.N., Venema G., Kok J. Fate of peptides in peptidase mutants of Lactococcus lactis. Molecular Microbiology, 1995, 21(1): 123-131 (doi: 10.1046/j.1365-2958.1996.6231339.x).
  • Savijoki K., Ingmer H., Varmanen P. Proteolytic systems of lactic acid bacteria. Review. Applied Microbiology and Biotechnology, 2006, 71(4): 394-406 (doi: 10.1007/s00253-006-0427-1).
  • Jurkiewicz D., Zielnik-Jurkiewicz B. Bacterial lysates in the prevention of respiratory tract infections. Review. Polish Journal of Otolaryngology, 2018, 72(5): 1-8 (doi: 10.5604/01.3001.0012.7216).
  • Hugo W.B. The mode of action of antibacterial agents. The Journal of Applied Bacteriology, 1967, 30(1): 17-50 (doi: 10.1111/j.1365-2672.1967.tb00273.x).
  • Mehmeti I., Kiran F., Osmanagaoglu O. Comparison of three methods for determination of protein concentration in lactic acid bacteria for proteomics studies. African Journal of Biotechnology, 2011, 10(11): 2178-2185 (doi: 10.5897/AJB10.1881).
  • Vadehra D.V., Wallace D.L., Harmon L.G. Comparison of methods of extracting intracellular proteases from bacteria. Applied Microbiology, 1965, 13(6): 1010-1013.
  • Kearney S.C., Dziekiewicz M., Feleszko W. Immunoregulatory and immunostimulatory responses of bacterial lysates in respiratory infections and asthma. Review. Ann. Allergy Asthma Immunol., 2015, 114(5): 364-369 (doi: 10.1016/j.anai.2015.02.008).
  • Lei Y., Kuang S.-J., Liao C.-S. Effects of bacterial lysates and all trans-retinoic acid on airway inflammation in asthmatic mice. Chinese Journal of Contemporary Pediatrics, 2018, 20(6): 514518 (doi: 10.7499/j.issn.1008-8830.2018.06.016) (Chinese).
  • Nicoletti G., Saler M., Tresoldi M.M., Faga A., Benedet M., Cristofolini M. Regenerative effects of spring water-derived bacterial lysates on human skin fibroblast in in vitro culture: preliminary results. Journal of International Medical Research, 2019, 47(11): 5777-5786 (doi: 10.1177/0300060519880371).
  • Lombardi F., Palumbo P., Mattei A., Augello F.R., Cifone M.G., Giuliani M., Cinque B. Soluble fraction from lysates of selected probiotic strains differently influences re-epithelialization of HaCaT scratched monolayer through a mechanism involving nitric oxide synthase 2. Biomol-ecules, 2019, 9(12): 756 (doi: 10.3390/biom9120756).
  • Kim H., Kim H.R., Jeong B.J., Lee S.S., Kim T.-R., Jeong J.H., Lee M., Lee S., Lee J.S., Chung D.K. Effects of oral intake of kimchi-derived lactobacillus plantarum k8 lysates on skin moisturizing. Journal of Microbiology and Biotechnology, 2015, 25(1): 74-80 (doi: 10.4014/jmb.1407.07078).
  • Jung Y.-O., Jeong H., Cho Y., Lee E.-O., Jang H.-W., Kim J., Nam K., Lim K.-M. Lysates of a probiotic, Lactobacillus rhamnosus, can improve skin barrier function in a reconstructed human epidermis model. International Journal of Molecular Science, 2019, 20(17): 4289 (doi: 10.3390/ijms20174289).
  • Ahumada-Cota R.E., Hernandez-Chicas U., Milián-Suazo F., Chávez-Berrocal M.E., Navarro-Ocaca A., Martínez-Gómez D., Patiño-López G., Salazar-Jiménez E.P., Eslava C.A. Effect and analysis of bacterial lysates for the treatment of recurrent urinary tract infections in adults. Pathogens, 2020, 9(2): E102 (doi: 10.3390/pathogens9020102).
  • Pfefferle P.I., Prescott S.L., Kopp M. Microbial influence on tolerance and opportunities for intervention with prebiotics/probiotics and bacterial lysates. Review. The Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2013, 131(6): 1453-1463 (doi: 10.1016/j.jaci.2013.03.020).
  • Lau S. Bacterial lysates in food allergy prevention. Review. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology, 2013, 13(3): 293-295 (doi: 10.1097/ACI.0b013e328360ede9).
  • Roberts J.D., Suckling C.A., Peedle G.Y, Murphy J.A., Dawkins T.G., Roberts M.G. An exploratory investigation of endotoxin levels in novice long distance triathletes, and the effects of a multi-strain probiotic/prebiotic, antioxidant intervention. Nutrients, 2016, 8(11): 733 (doi: 10.3390/nu8110733).
  • Didovyk A., Tonooka T., Tsimring L., Hasty J. Rapid and scalable preparation of bacterial lysates for cell-free gene expression. ACS Synth. Biol, 2017, 6(12): 2198-2208 (doi: 10.1021/acssyn-bio.7b00253).
  • Fadda S., Sanz Y., Vignolo G., Aristoy M.C., Oliver G., Toldra F. Characterization of muscle sarcoplasmic and myofibrillar protein hydrolysis caused by Lactobacillus plantarum. Applied and Environmental Microbiology, 1999, 65(8): 3540-3546.
  • Przybylski R., Firdaous L., Chataigné G., Dhulster P., Nedjar N. Production of an antimicrobial peptide derived from slaughterhouse byproduct and its potential application on meat as preservative. Food Chemistry, 2016, 211: 306-313 (doi: 10.1016/j.foodchem.2016.05.074).
  • Чернуха И.М., Машенцева Н.Г., Афанасьев Д.А., Вострикова Н.Л. Биологически активные пептиды мяса и мясных продуктов: обзор. Часть 2. Функциональность мясных биоактивных пептидов. Теория и практика переработки мяса, 2020, 5(12): 12-19.
  • Афанасьев Д.А., Машенцева Н.Г., Чернуха И.М. Биологически активные пептиды как продукт микробной ферментации мясного сырья и готовых мясных продуктов. Пищевая промышленность, 2019, 4: 20-22 (doi: 10.24411/0235-2486-2019-10009).
  • Афанасьев Д.А., Клабукова Д.Л., Машенцева Н.Г., Ахремко А.Г., Куликовский А.В., Чернуха И.М. Влияние стартовых культур на технологические и биохимические показатели сырокопченых колбас. Мясная индустрия, 2016, 12: 18-22.
  • de Man J.C., Rogosa M., Sharpe M.E. A medium for the cultivation of Lactobacillus. Journal of Applied Bacteriology, 1960, 23: 130-135 (doi: 10.1111/j.1365-2672.1960.tb00188.x).
  • M®hre H.K., Dalheim L., Edvinsen G.K., Elvevoll E.O., Jensen I.-J. Protein determination — method matters. Foods, 2018, 7(1): 5 (doi: 10.3390/foods7010005).
  • Полыгалина Г.В., Чередниченко B.C., Римарева Л.В. Определение активности ферментов. М., 2003. Ryhanen L., Rantala-Ryhanen S., Tan E.M.L., Uitto J. Assay of collagenase activity by a rapid, sensitive, and specific method. Collagen and Related Research, 1982, 2(2): 117-130 (doi: 10.1016/S0174- 173X(82)80028-9).
  • Чернуха И.М., Машенцева Н.Г., Вострикова Н.Л., Ковалев Л.И., Ковалева М.А., Афанасьев Д.А., Бажаев А.А. Образование биологически активных пептидов в мясном сырье под влиянием протеаз различного происхождения. Сельскохозяйственная биология, 2018, 53(6): 1247-1261 (doi: 10.15389/agrobiology.2018.6.1247rus).
  • Ковалев Л.И., Шишкин С.С., Ковалева М.А., Иванов А.В., Вострикова Н.Л., Чернуха И.М. Протеомное изучение белков в образцах свинины и выработанных из нее мясных продуктах. Всё о мясе, 2013, 3: 32-34.
  • Kovalyov L.I., Kovalyova M.A., Kovalyov P.L., Serebryakova M.V., Moshkovskii S.A., Shish-kin S.S. Polymorphism of delta 3,5-delta2,4-dienoyl-coenzyme A isomerase (the ECH1 gene product protein) in human striated muscle tissue. Biochemistry, 2006, 71(4): 448-453 (doi: 10.1134/s0006297906040146).
  • Shishkin S.S., Kovalev L.I., Kovaleva M.A., Krakhmaleva I.N., Lisitskaya K.V., Eremina L.S., Ivanov A.V., Gerasimov E.V., Sadykhov E.G., Ulasova N.Yu., Sokolova O.S., Toropygin I.Yu., Popov V.O. Database. Proteomics of prostate cancer. Acta Naturae, 2010, 2(4): 95-104 (doi: 10.32607/20758251-2010-2-4-95-104).
  • Zvereva E.A., Kovalev L.I., Ivanov A.V., Kovaleva M.A., Zherdev A.V., Shishkin S.S., Lisitsyn A.B., Chernukha I.M., Dzantiev B.B. Enzyme immunoassay and proteomic characterization of troponin I as a marker of mammalian muscle compounds in raw meat and some meat products. Meat Science, 2015, 105: 46-52 (doi: 10.1016/j.meatsci.2015.03.001).
  • Venegas-Ortega M.G., Flores-Gallegos A.C., Martínez-Hernández J.L., Aguilar C.N., Nevárez-Moorillón G.V. Production of bioactive peptides from lactic acid bacteria: a sustainable approach for healthier foods. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2019, 18(4): 10391051 (doi: 10.1111/1541-4337.12455).
  • Tabatabaie F., Mortazavi A. Studying the effects of ultrasound shock on cell wall permeability and survival of some LAB in milk. World Journal of Applied Science, 2008, 3(1): 119-121.
  • Donkor O.N., Henriksson A., Vasiljevic T., Shah N.P. Proteolytic activity of dairy lactic acid bacteria and probiotics as determinant of growth and in vitro angiotensin-converting enzyme inhibitory activity in fermented milk. Lait, 2007, 87(1): 21-38 (doi: 10.1051/lait:2006023).
  • García-Cano I., Rocha-Mendoza D., Ortega-Anaya J. Lactic acid bacteria isolated from dairy products as potential producers of lipolytic, proteolytic and antibacterial proteins. Applied Microbiology and Biotechnology, 2019, 103: 5243-5257 (doi: 10.1007/s00253-019-09844-6).
  • Parra L., Requena T., Casal V., Gymez R. Proteolytic activity of lactobacilli in a model goats' milk curd system. Letters in Applied Microbiology, 1996, 23(6): 375-378 (doi: 10.1111/j. 1472-765x.1996.tb01340.x).
  • Bascomb S., Manafi M. Use of enzyme tests in characterization and identification of aerobic and facultatively anaerobic gram-positive cocci. Clinical Microbiology Reviews, 1998, 11(2): 318-340.
  • Son S.-H., Jeon H.-I., Yang S.-J., Sim M.-H., Kim Y.-J., Lee N.-K., Paik H.-D. Probiotic lactic acid bacteria isolated from traditional Korean fermented foods based on p-glucosidase activity. Food Science and Biotechnology, 2018, 27(1): 123-129 (doi: 10.1007/s10068-017-0212-1).
  • Colombo M., Castilho N.P.A., Todorov S.D., Nero L.A. Beneficial properties of lactic acid bacteria naturally present in dairy production. BMC Microbiology, 2018, 18: 219 (doi: 10.1186/s12866-018-1356-8).
  • Kivanij M., Yilmaz M., Qakir E. Isolation and identification of lactic acid bacteria from boza, and their microbial activity against several reporter strains. Turkish Journal of Biology, 2011, 35: 313-324 (doi: 10.3906/biy-0906-67).
  • Kim S., Huang E., Park S., Holzapfel W., Lim S.D. Physiological characteristics and anti-obesity effect of Lactobacillus plantarum K10. Korean Journal for Food Science of Animal Resources, 2018, 38(3): 554-569 (doi: 10.5851/kosfa.2018.38.3.554).
  • Esteban-Torres M., Mancheco J.M., de las Rivas B., Mucoz R. Production and characterization of a tributyrin esterase from Lactobacillus plantarum suitable for cheese lipolysis. Journal of Dairy Science, 2014, 97(11): 6737-6744 (doi: 10.3168/jds.2014-8234).
  • Esteban-Torres M., Reverón I., Santamaría L., Mancheco J.M., de Las Rivas B., Muñoz R. The Lp_3561 and Lp_3562 enzymes support a functional divergence process in the lipase/esterase toolkit from Lactobacillus plantarum. Frontiers in Microbiology, 2016, 19(7): 1118 (doi: 10.3389/fmicb.2016.01118).
  • Ramakrishnan V., Goveas L.C., Narayan B., Halami P.M. Comparison of lipase production by Enterococcus faecium MTCC 5695 and Pediococcus acidilactici MTCC 11361 using fish waste as substrate: optimization of culture conditions by response surface methodology. International Scholarly Research Notices, 2013, 2013: 980562 (doi: 10.5402/2013/980562).
  • El Soda M., Abd El Wahab H., Ezzat N., Desmazeaud M.J., Ismail A. The esterolytic and lipolytic activities of the Lactobacilli. II. Detection of the esterase system of Lactobacillus helvet-icus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus lactis and Lactobacillus acidophilus. Lait, 1986, 66: 431-443 (doi: 10.1051/lait:1986428).
  • Kim H.M., Lee D.E., Park S.D., Kim Y.T., Kim Y.J., Jeong J.W., Jang S.S., Ahn Y.T., Sim J.H., Huh C.S., Chung D.K., Lee J.H. Oral administration of Lactobacillus plantarum HY7714 protects hairless mouse against ultraviolet B-induced photoaging. The Journal of Microbiology and Biotechnology, 2014, 24(11): 1583-1591 (doi: 10.4014/jmb.1406.06038).
  • Hong Y.F., Lee H.Y., Jung B.J., Jang S., Chung D.K., Kim H. Lipoteichoic acid isolated from Lactobacillus plantarum down-regulates UV-induced MMP-1 expression and up-regulates type I procollagen through the inhibition of reactive oxygen species generation. Molecular Immunology, 2015, 67(2, Part B): 248-255 (doi: 10.1016/j.molimm.2015.05.019).
  • Shirzad M., Hamedi J., Motevaseli E., Modarressi M.H. Anti-elastase and anti-collagenase potential of Lactobacilli exopolysaccharides on human fibroblast. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology, 2018, 46: 1051-1061 (doi: 10.1080/21691401.2018.1443274)
  • Шайхиев А.А. Аминокислотный состав молочнокислых бактерий. Вопросы питания, 1977, 2: 63-65.
  • Nuryana I., Andriani A., Lisdiyanti P., Yopi. Analysis of organic acids produced by lactic acid bacteria. IOP Conference Series Earth and Environmental Science, 2019, 251(1): 012054 (doi: 10.1088/1755-1315/251/1/012054).
  • Guedon E., Renault P., Ehrlich S.D., Delorme C. Transcriptional pattern of genes coding for the proteolytic system of Lactococcus lactis and evidence for coordinated regulation of key enzymes by peptide supply. Journal of Bacteriology, 2001, 183(12): 3614-3622 (doi: 10.1128/JB.183.12.3614-3622.2001).
  • Gitton C., Meyrand M., Wang J. Proteomic signature of Lactococcus lactis NCDO763 cultivated in milk. Applied and Environmental Microbiology, 2005, 71(11): 7152-7163 (doi: 10.1128/AEM.71.11.7152-7163.2005).
  • Williams A.G., Noble A.J., Tammam J., Lloyd D., Banks J.M. Factors affecting the activity of enzymes involved in peptide and amino acid catabolism in non-starter lactic acid bacteria isolated from Cheddar cheese. International Daily Journal, 2002, 12(10): 841-852 (doi: 10.1016/S0958-6946(02)00063-8).
  • Liu M., Renckens B., Bayjanov J.R., Nauta A. The proteolytic system of lactic acid bacteria revisited: A genomic comparison. BMC Genomics, 2010, 11(1): 36 (doi: 10.1186/1471-2164-11-36).
  • Gu Y., Majumder K., Wu J. QSAR-aided in silico approach in evaluation of food proteins as precursors of ACE inhibitory peptides. Food Research International, 2011, 44(8): 2465-2474) (doi: 10.1016/j.foodres.2011.01.051).
Еще
Статья научная