Оценка детоксицирующей эффективности экстракта сапропеля при интоксикации птиц Конфидором Экстра

Введение. Важной частью эффективного ведения сельского хозяйства является химический метод контроля численности вредителей. Современный рынок инсектицидов, применяемых в растениеводстве, ветеринарии, медицине и быту, представлен преимущественно фосфорорганическими соединениями, синтетическими пиретроидами, авермектинами и неоникотинои-дами. Неоникотиноиды (НН) – интенсивно развивающийся класс инсектицидов, акарицидов и фунгицидов, широко используемых в растениеводстве на посевах зерновых, плодовых и овощных культур. Одним из первых представителей этого класса является имидаклоприд (Ик), препараты на основе которого успешно применяют в растениеводстве и в быту для борьбы с муравьями и термитами, в ветеринарной медицине – против экто- и эндопаразитов, а в животноводстве – для обработки помещений [1, 2]. В токсикологическом отношении НН являются нейротропными ядами, механизм действия которых основан на взаимодействии с никотиновыми ацетилхолиновыми рецепторами постсинаптических мембран, что приводит к нарушению проведения нервного импульса и гибели насекомых. Обладая высокой липофильностью, НН легко проникают через биологические мембраны и временно депонируются в органах и тканях организма [3, 4].

Несмотря на то, что пестициды являются необходимым инструментом обеспечения эффективности проводимых мероприятий по борьбе с вредителями и возбудителями болезней, попадая в организм животных и человека в виде остаточных количеств с кормами или продуктами питания, водой, воздухом, а также через кожу при обработках, они неизбежно оказывают влияние на организм. Высокая контаминация кормов ксенобиотиками различного происхождения является основной причиной включения в рационы для животных средств с детоксицирующей активностью. Наряду с широким использованием углеродных сорбентов перспективным направлением в ветеринарной медицине является изучение детоксицирующей активности препаратов на основе сапропеля [5]. Экспериментально подтверждено, что продукты, получаемые из сапропеля, обладают антиоксидантным, антисептическим, гепатопротекторным и иммуномодулирующим эффектом, что послужило теоретической предпосылкой для проведения данных исследований.

Цель исследования. Определение детоксицирующей активности экстракта сапропеля при интоксикации птиц Конфидором Экстра^®.

Объекты, материалы и методы исследования. Петушки пятисуточного возраста породы белый леггорн, массой 40,0 г; экстракт сапропеля масляный (ЭСМ); инсектицидный препарат Конфидор Экстра® (имидаклоприд, 70%. Bayer-CropScience, Германия). Методы – клинические, гематологические, гистологические, статистические. ЭСМ изготовлен на кафедре фармацевтической технологии, биотехнологии ФГБОУ ВПО «ОмГМУ» методом двухфазной экстракции [6]. Исследования на петушках проведены в виварии Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВО «Омский ГАУ». Содержание и уход за ними осуществляли в соответствии с требованиями по надлежащей практике при работе с лабораторными животными [7]. Для проведения эксперимента птиц разделили на четыре группы по пять голов в каждой. Цыплята первой группы (контроль 1) находились на стандартном рационе для молодняка птиц, поение осуществляли из автоматических поилок водопроводной водой. Второй группе цыплят (контроль 2) в воду ежедневно в течение 14 дней вносили ЭСМ в дозе 1 мл на 100 мл воды. Цыплята третьей группы (контроль 3) получали водный 0,001%-й раствор КфЭ весь период наблюдения. Птицам четвертой группы (опыт) на фоне интоксикации КфЭ ежедневно с водой выпаивали ЭСМ в дозе 1 мл на 100 мл воды. Оценку детоксицирующей активности ЭСМ проводили с учетом клинического статуса животных, показателей живой массы, реакции биохимических маркеров сыворотки крови, гистологической картины печени. Биохимические показатели определяли в химико-токсикологическом отделе Омской областной ветеринарной лаборатории на биохимическом анализаторе-автомате «Konelab20», используя реагенты фирмы Human (Германия) и Sentinel (Италия). Кусочки печени фиксировали в 4%-м нейтральном растворе формальдегида, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 3–5 мкм получали на ротационном микротоме LaboCut 4055 (фирма Slee, Германия), окрашивали гематоксилином и эозином. Микрофотосъемку гистологических препаратов проводили на микроскопе Альтами БИО 1Т с цифровой окулярной камерой UCMOS0300KPA. Статистический анализ цифровых данных проводили с помощью пакета прикладных статистических программ Statistica 6.0. Сравнение медиан про- водили используя U-критерий Mannа-Whitney. Различия считали значимыми при p<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. Общее состояние птиц контрольных и опытной групп на протяжении всего периода наблюдения было удовлетворительным. У птиц контрольной группы 1 помет был сформирован, темно-коричневого цвета, моча была белого цвета, вязкой консистенции, у цыплят остальных групп отмечали полужидкий помет от темно-коричневого до черного цвета, моча была без видимых изменений. Состояние перьевого покрова у цыплят всех групп было удовлетворительным. Через неделю во всех контрольных группах наблюдали прирост массы тела, причем наибольшее значение данный показатель отмечали у цыплят второй группы, в воду которым добавляли ЭСМ (р<0,05). Через две недели медианы массы тела цыплят во всех группах имели одинаковое значение, за исключением животных третьей контрольной группы, которые весь период наблюдения получали 0,001%-й раствор КфЭ – у них отмечали снижение массы тела на 4 % (р<0,05).

При анализе биохимических показателей сыворотки крови было установлено снижение концентрации мочевой кислоты на 18,5 % (р=0,009) у цыплят, потреблявших в течение двух недель ЭСМ в дозе 1 мл/100 мл воды, повышение концентрации мочевой кислоты у цыплят, получавших 0,001%-й раствор КфЭ в течение всего периода наблюдения, на 29,5 % (р<0,05), в общий белок (г/л)     альбумин (г/л)

ГРУППА № 1         ГРУППА № 2

опытной группе (КфЭ+ЭСМ) регистрировали повышение данного показателя на 56 % (р<0,05) по сравнению с группой контроля 1.

Известно, что мочевая кислота является конечным продуктом пуринового и белкового обмена. Снижение данного показателя во второй контрольной группе могло быть обусловлено развитием гидропической дистрофии в печени птиц, признаки которой регистрировали гистологическими методами. Повышение данного показателя у птиц третьей контрольной и опытной групп, интоксицированных КфЭ, свидетельствует о развитии у них признаков мочекислого диатеза, что может быть следствием нефротоксического эффекта пестицида. При этом важно отметить, что экстракт сапропеля, вводимый в организм птиц на фоне интоксикации неонико-тиноидом, способствует более интенсивному накоплению мочевой кислоты в организме птиц, что в прогностическом отношении следует рассматривать как неблагоприятный фактор.

При анализе некоторых других биохимических показателей сыворотки крови птиц контрольных и опытной групп существенных отклонений не регистрировали (рис. 1). Следует отметить повышение концентрации креатинина у цыплят опытной группы на 18,3 % (р<0,05) по сравнению с группой контроля 1, что может указывать на развитие нефропатии, обусловленной в том числе высокой концентрацией мочевой кислоты в организме.

группы

Рис. 1. Медианы биохимических показателей сыворотки крови птиц: 1-я группа - контроль 1 (вода водопроводная); 2-я группа - контроль 2 (ЭСМ); 3-я группа - контроль 3 (0,001%-й раствор Конфидора Экстра ® ); 4-я группа - опыт (0,001%-й раствор Конфидора Экстра ® + ЭСМ)

креатинин(мкмоль/л)     глюкоза(ммоль/л)

При патолого-анатомическом вскрытии птиц контрольных и опытной групп отмечали однотипную картину, при этом макроскопических изменений во внутренних органах отмечено не было. При анализе гистологической картины печени птиц контрольной группы 1 гепатоциты имели полигональную форму, цитоплазма однородная, оксифильно окрашена, ядро округлой формы, окрашено базофильно, в нем опреде- лялись одно или два ядрышка. Встречались двуядерные гепатоциты. Синусоидные капилляры расширены умеренно и содержали эритроциты, повреждений эндотелия не было зафиксировано (рис. 2). Междольковая соединительная ткань слаборазвита. Регистрировали небольшие скопления клеток лимфоидного ряда вокруг центральной вены.

Рис. 2. Печень птиц контрольной группы 1. Гематоксилин и эозин, ×150

В печени птиц контрольной группы 2 гепатоциты находились в состоянии гидропической дистрофии – увеличены в объеме, цитоплазма их заполнена вакуолями, ядра, как правило, смещены на периферию, иногда с признаками вакуолизации (рис. 3). Синусоидные капилляры были расширены. Разрастание междольковой соединительной ткани не регистрировали, скопление лимфоидных клеток в печеночных дольках встречали редко.

Гистологическая картина печени цыплят контрольной группы 3 характеризовалась расширением синусоидных капилляров. Цитоплазма большинства клеток была оксифильно окрашена, ядра клеток были просветленные, содержали несколько ядрышек. Дистрофические изменения в гепатоцитах регистрировали редко (рис. 4). Небольшие скопления клеток лимфоидного ряда обнаруживали вокруг центральной вены.

В печени птиц опытной группы регистрировали гепатоциты в состоянии дистрофии, некробиоза и некроза, при этом ядра клеток отсутствовали или находились в состоянии пикно-за (рис. 5). Границы между клетками не дифференцировались.

Рис. 3. Печень птиц контрольной группы 2. Расширение синусоидных капилляров, гидропическая дистрофия гепатоцитов. Гематоксилин и эозин, ×150

Рис. 4. Печень птиц контрольной группы 3. Расширение синусоидных капилляров. Гематоксилин и эозин, ×150

Рис. 5. Печень птиц опытной группы. Участки гепатоцитов в состоянии дистрофии, некроза и некробиоза. Гематоксилин и эозин, ×300

Регистрировали единичные двуядерные гепатоциты. Скопление мононуклеарных клеток обнаруживали на периферии печеночной дольки. Синусоидные капилляры умеренно расширены и заполнены кровью.

Выводы. Ежедневное поение цыплят 0,001%-м раствором КфЭ в течение двух недель способствует снижению массы их тела на 4 %, повышению уровня мочевой кислоты на 29,5 %. Гистологическая картина печени характеризуется преимущественно расширением синусоидных капилляров.

Ежедневное выпаивание цыплятам в течение 14 дней ЭСМ в дозе 1 мл на 100 мл воды способствует снижению мочевой кислоты на 18,5 %; гистологическая картина печени характеризуется признаками гидропической дистрофии.

На фоне интоксикации КфЭ ежедневное выпаивание ЭСМ в дозе 1 мл на 100 мл воды способствует увеличению уровня мочевой кислоты (на 56%) и креатинина (на 18,3%), что может быть обусловлено нарушением выделительной функции почек. Гистологические изменения в печени свидетельствуют о развитии дистрофических, некробиотических и некротических процессов в органе.

Таким образом, результаты проведенных исследований указывают на отсутствие детоксицирующего эффекта ЭСМ в дозе 1 мл на 100 мл воды на фоне интоксикации птиц КфЭ. Напротив, регистрируемые отклонения биохимических показателей сыворотки крови и структурные изменения в печени свидетельствуют о развитии гепато- и нефропатии у экспериментальных животных.