Онколитическое действие неклассифицированных штаммов семейства Reoviridae на клеточные линии глиомы U87MG и T98G

Экспериментальная онкология колитическое действие RVK штаммов № 100 и № 228 определяли в цитотоксическом тесте с МТТ на двух клеточных линиях глиом U87MG и T98G. Клетки были посеяны на 24-х луночные планшеты по 105 клеток на лунку в среде DMEM без пирувата (Gibco) и без сыворотки. Через 24 часа после посева в лунки вносили серии кратных разведений вирусов с концентрациями 108, 107, 106 и 105 частиц/мл следующим образом: из лунки отбирали среду культивирования и добавляли по 100 мкл суспензии вируса в среде DMEM, в контрольные лунки вносили равное количество среды без вируса. Через 5 минут, в течение которых происходила адгезия вирусных частиц на поверхности клеток, в лунки вносили по 1 мл среды культивирования. Каждый вариант опыта ставили в 8 повторах. После 72 часов культивирования при 37С0 в атмосфере 5,5% СО2 проводили тест с МТТ по стандартной методике. Измерение оптической плотности раствора формазана производили на ИФА-ри-дере Stat Fax 2100 (Awareness Technology, USA) при длине волны 492 нм в трех повторах. Расчет жизнеспособности производился по формуле: % жизнеспособных клеток = ( (ОПэксп-ОПкс) / (ОПконтр-ОПкс)) × 100 %,где ОПэксп, ОПконтр, ОПкс — значения оптической плотности раствора форма-зана в экспериментальных лунках, в контроле без воздействия и в контроле среды (без клеток), соответственно.

Результаты: Оба вируса обладают дозо-зависимым действием на исследуемые культуры. Низкая концентрация (105 частиц/мл) RVK штамма № 228 вызывает даже некоторое повышение результата МТТ-теста (по количеству живых клеток на 6–8%). При воздействии на культуру U87MG увеличение концентрации RVK № 100 до 106,107, 108 частиц/мл приводит к снижению данного показателя со 100% в контроле до 59,3±5,6, 52,2±9,0 и 62,9±3,8% соответственно, t>2,0. У штамма № 228 статистически значимого литического эффекта на данную культуру не установлено, несмотря на снижение количества живых клеток на 36%.При культивировании с клетками линии T98G оба штамма вирусов демонстрируют сходные результаты. Однако литическая активность для штамма № 100 оказалась менее выраженной, чем на линии U87MG. Повышение концентрации RVK до 108 частиц/мл не приводит к дальнейшему изменению результата МТТ-теста; в обеих культурах и при использовании обоих штаммов наблюдается выход на «плато». Полученные кривые имеют приближенно сигмовидную форму, характерную для большинства цитотоксических агентов, однако нам не удалось вычислить IC50, т.к. большая часть растущих клеток слабо прикреплялась в условиях культивирования в бессывороточной среде, которую использовали, чтобы компоненты сыворотки не могли повлиять на взаимодействие вирус-клетка. Вероятно, поэтому опухолевые клетки образовывали слабо прикрепленные к клеточному пласту «сфероиды», количество и размер которых свидетельствует о жизнеспособности культуры. В связи с этим, в ходе проведения теста с МТТ при отборе среды часть клеток терялась, а количества прикрепленных к субстрату клеток оказалось недостаточно для количественной оценки.

Заключение: Штаммы RVK № 100, № 228 обладают выраженной дозо-зависимой онколитической активностью в отношении постоянных клеточных линий глиом U87MG и T98G и являются перспективными для дальнейших исследований на первичных культурах глиом, а также in vivo на животных моделях.