Определение антиоксидантной активности экстракта сухого Astragalus membranaceus (Fisch) Bunge в ферментных тест-системах

Интесификация свободнорадикальных процессов наблюдается при развитии общего неспецифического адаптационного синдрома (стресса), то есть практически при большинстве острых заболеваний и состояний, обострении хронических заболеваний, интоксикациях, ожогах, травмах, операциях и т. п. [3, 6].

В этом отношении наибольший интерес представляют средства растительного происхождения, так как извлечения из растений представляют собой не индивидуальные вещества, а смесь веществ и вследствие этого могут обладать широким спектром фармакологических свойств. Кроме того, фитопрепараты характеризуются сбалансированным многокомпонентным химическим составом [4].

В последние годы для тестирования природных веществ широко используются тест-системы, разработанные на фундаментальных положениях биохимии и молекулярной биологии. Прежде всего антиоксидантные свойства веществ оцениваются по активности ферментов, имеющих отношение к антиокислительной защите организма [2].

Объектом настоящего исследования является сухой экстракт подземных органов A. membranaceus и выделенные из него фракции. Ранее на модели гемической гипоксии было установлено его адаптогенное действие [1].

Цель исследования

Определение антиоксидантной активности сухого экстракта A. membranaceus и его фракций в ферментных тест-системах.

Материалы и методы

Способ получения сухого экстракта заключается в экстракции измельченного сырья 6070% этиловым спиртом, концентрировании и высушивании в вакуумной установке. Для получения фракций сухой экстракт A. membranaceus (СЭА) суспендировали в воде в соотношении 1:10, полученную суспензию подвергали жидкофазной экстракции с целью получения гексановой, водной, этанольной, хлороформной и бутанольной фракции.

Биологическую активность СЭА и его фракций определяли с использованием глутатиопе-роксидазной (ГП), каталазной (КАТ) и пируваткиназной (ПК) тест-систем [2].

Статистическую обработку проводили с использование t-критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при Р≤0,05 [5].

Результаты и их обсуждение

В таблицах 1-3 представлены данные по влиянию сухого экстракта A. membranaceus (СЭА) и выделенных из него фракций на активность ферментов антиоксидантной защиты и углеводного обмена в условиях in vitro .

Как следует из таблицы 1, хлороформная фракция в концентрации 100 мкг/мл снижает активность ГП в 1,6 раза, этанольная фракция в концентрации 100 и 50 мкг/мл – на 17,6 и 23,5 % соответственно, бутанольная фракция в концентрации 100 мкг/мл – на 21,6 % по сравнению с контролем; гексановая и водная фракции A. membranaceus практически не оказывают влияние на активность глутатионпероксидазы. Показано, что СЭА способствует повышению активности ГП в концентрации 50 мкг/мл на 20,7 %.

Таблица 1

Объект	Активность, мкМ/мин/мг белка
	100 мкг/мл       1		50 мкг/мл
Контроль	4,25±0,35
Сухой экстракт A. membranaceus	4,75±0,35	5,13±0,53
Гексановая фракция	4,50±1,41	4,10±0,14
Водная фракция	4,13±0,17	4,13±0,88
Этанольная фракция	3,50±0,70	3,25±0,70
Хлороформная фракция	2,58±0,28*	4,38±0,17
Бутанольная фракция	3,33±0,42	4,25±0,50

Влияние сухого экстракта Astragalus membranaceus и его фракций на активность глутатионпероксидазы in vitro

Примечание : здесь и далее ^* – различия статистически значимы по сравнению с контролем, при Р≤0,05.

Данные, приведенные в таблице 2, свидетельствуют, что исследуемое фитосредство не влияет на активность пируваткиназы. Гексановая фракция данного растительного средства достоверно повышает активность фермента в концентрации 100 мкг/мл на 50 %. Бутанольная фракция СЭА в этой же концентрации достоверно снижает активность ПК на 35 % по сравнению с контролем.

Таблица 2

Объект	Активность, мкМ/мин/мг белка
	100 мкг/мл        1		50 мкг
Контроль	2,09±0,15
Сухой экстракт A. membranaceus	2,20±0,20	1,85±0,15
Гексановая фракция	3,15±0,15*	2,67±0,20
Водная фракция	1,53±0,23	2,40±0,10
Этанольная фракция	2,15±0,15	2,18±0,21
Хлороформная фракция	2,15±0,15	2,00±0,30
Бутанольная фракция	1,35±0,02*	2,33±0,37

Влияние сухого экстракта Astragalus membranaceus и его фракций на активность пируваткиназы in vitro

Повышение активности пируваткиназы при введении в инкубационную среду гексановой фракции свидетельствует об активации энергетического обмена, так как ПК является важным ферментом углеводного обмена, который катализирует перенос неорганического фосфата от фосфоенолпирувата на АДФ с образованием АТФ. Активация этого фермента при тестировании лекарственных средств in vitro характерна для веществ с адаптогенным и антиоксидантным действием.

Таблица 3

Объект	Активность, мкат/л
	100 мкг/мл	50 мкг/мл
Контроль	12,38±0,26
Сухой экстракт A. membranaceus	17,92±0,28*	15,65±0,19*
Гексановая фракция	15,44±0,16*	15,45±0,11*
Водная фракция	16,96±0,10*	16,60±0,51*
Этанольная фракция	18,33±0,23*	14,92±0,31*
Хлороформная фракция	17,71±0,13*	15,91±0,17*
Бутанольная фракция	18,07±0,20*	15,91±0,21*

Влияние сухого экстракта Astragalus membranaceus и его фракций на активность каталазы in vitro

Как следует из таблицы 3, сухой экстракт A. membranaceus и его фракции повышают активность каталазы. Так, в концентрации 100 мкг/мл активность каталазы под влиянием СЭА повышается на 44,7 %, а в концентрации 50 мкг/мл – на 26,4 % по сравнению с контролем. Активность фермента под действием фракций A. membranaceus (100 мкг/мл) возрастает в ряду: гексановая (24,7 %) < водная < хлороформная < бутанольная < этанольная (48,1 %). В концентрации 50 мкг/мл повышение активности каталазы было несколько меньше и возрастало в ря- ду: этанольная (20,5 %) < гексановая < хлороформная < бутанольная < водная (34,1 %).

Таким образом, установлено, что сухой экстракт A. membranaceus обладает выраженной антиоксидантной активностью. Результаты проведенных исследований ( in vitro ) дают основание рассматривать исследуемый препарат в качестве потенциального антиоксидантного средства, характеризующегося присутствием ряда биологически активных веществ, представителей классов фенольных соединений и полисахаридов.

А.А. Торопова, Д.Э. Гармаев, Я.Г. Разуваева. Антиоксидантная активность настойки Сimicifuga Dahurica (Turcz.) maxim. в условиях in vitro