Определение фенолкарбоновых кислот в сборе «Панкреофит»
Автор: Николаева Ирина Геннадьевна, Николаева Галина Григорьевна, Туртуева Татьяна Анатольевна, Разуваева Янина Геннадьевна, Раднаева Лариса Доржиевна
Журнал: Вестник Бурятского государственного университета. Философия @vestnik-bsu
Статья в выпуске: 12, 2014 года.
Бесплатный доступ
Определено содержание фенолкарбоновых кислот в сборе «Панкреофит». Подобраны параметры ВЭЖХ, обеспечивающие максимальное разделение фенолкарбоновых кислот.
Енолкарбоновые кислоты, сбор "панкреофит"
Короткий адрес: https://sciup.org/148182182
IDR: 148182182
Текст научной статьи Определение фенолкарбоновых кислот в сборе «Панкреофит»
Для лечения и профилактики различных заболеваний наряду с базисной терапией широко используются лекарственные средства растительного происхождения в качестве средств дополнительной терапии в период обострения заболевания, а также в качестве профилактических средств на начальных стадиях заболевания и на этапе противорецидивной терапии [6]. Средства на основе растений влияют на организм человека как корригирующая система благодаря гармоничному сочетанию содержащихся биологически активных веществ, они малотоксичны, обладают мягким и разноплановым дей- ствием, при этом есть возможность рационального сочетания их между собой, что существенно расширяет их терапевтические возможности [3].
Нами разработано растительное многокомпонентное средство, обладающее антиоксидантной и панкреозащитным действием [4, 5].
Действие растительных средств обусловлено присутствием в них биологически активных веществ: полифенолов, полисахаридов, минеральных веществ, аминокислот, органических кислот, витаминов и других, которые обеспечива- ют широкий спектр фармакологического действия фитопрепаратов.
Целью работы является определение содержания фенолкарбоновых кислот в сборе «Пан-креофит» и подбор оптимальных параметров ВЭЖХ, обеспечивающих максимальное разделение фенолкарбоновых кислот.
ВЭЖХ-анализ проводили на приборе PlatinBlue ( Knauer ). При выборе режима элюирования смеси фенолкарбоновых кислот (тип хроматографической колонки, состав подвижной фазы, длины волн детектирования) основывались на строении фенолкарбоновых кислот. Структура исследуемых соединений, содержащих хромофорные группы и обладающих достаточной гидрофобностью, позволила сделать вывод о возможности проведения анализа в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием и использования хорошо изученного элюента – смеси ацетонитрила с водным раствором трифторуксусной кислоты.
При подборе параметров ВЭЖХ, обеспечивающих максимальное разделение фенолкарбоновых кислот, изначально готовили серию растворов кислот (галловой, протокатеховой, окси-бензойной, ванилиновой, сиреневой, кофейной, вератровой, кумаровой, синаповой, анисовой, коричной) 1 мкг вещества в 1 мл ацетонитрила с добавлением 0,05%-ного раствора трифторуксусной кислоты и хроматографировали отдельно для установления времени удерживания кислот. Далее хроматографировали смесь кислот, добиваясь их лучшего разделения на хроматограмме.
Подобраны следующие параметры, обеспечивающие максимальное разделение фенолкарбоновых кислот: колонка Диасфер С10-СN, 5 мкм, 2х120 мм ( БиоХимМак СТ ), подвижная фаза – смесь ацетонитрила и 0,05%-ного водного раствора трифторуксусной кислоты, элюирование – градиентное (от 6 до 12% АСN за 13 мин, далее до 24% АСN за 9 мин), объем вводимой пробы 5 мкл, скорость потока 0,3 мл/мин, детектирование при 260 и 315 нм.
На рис. 1 приведена хроматограмма модельной смеси фенолкарбоновых кислот, наличие которых предполагалось в исследуемом экстракте.
Можно видеть, что кислоты разделяются достаточно хорошо, а при использовании детектора с диодной матрицей, позволяющего визуализировать спектры элюируемых соединений, становится возможным контролировать присутствие и оценивать содержание фенолкарбоновых кислот в экстрактах.
Согласно данным Н.А. Верниковской [2], экстракцию выполняли водой, в качестве экстрагента использовали 10%-ный водный раствор изопропилового спирта, обладающий хорошей экстрагирующей способностью [1].
Методика приготовления водного извлечения: около 0,2000 г (точная навеска) измельченного сбора (степень измельчения = 1 мм) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 25 мл воды очищенной, закрывают притертой пробкой, помещают на 30 мин в ультразвуковую баню (t=60 °C), затем охлаждают и проводят через бумажный фильтр.

Рис. 1. Хроматограмма модельной смеси фенолкарбоновых кислот
И.Г. Николаева и др. Определение фенолкарбоновых кислот в сборе «Панкреофит»
Методика приготовления 10%-ного изопро-панольного извлечения: около 0,2500 г (точная навеска) измельченного сырья (степень измельчения = 1 мм) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 20 мл 10%-ного изопропанола, закрывают притертой пробкой, оставляют на 2 суток при комнатной температуре экстрагироваться, проводят через бумажный фильтр.
Получены результаты количественного определения содержания фенолкарбоновых кислот в извлечениях сбора (водное и 10%-ное изопро-панольное) (табл. 2).
В результате проведенных исследований подобраны параметры ВЭЖХ, обеспечивающие максимальное разделение фенолкарбоновых ки- слот: колонка Диасфер С10-СN, 5 мкм, 2х120 мм (БиоХимМак СТ), подвижная фаза – смесь ацетонитрила и 0,05%-ного водного раствора трифторуксусной кислоты, элюирование – градиентное (от 6 до 12% АСN за 13 мин, далее до 24% АСN за 9 мин), объем вводимой пробы 5 мкл, скорость потока 0,3 мл/мин, детектирование при 260 и 315нм. Идентифицировано только четыре фенолкарбоновой кислоты, выход кислот повышается при использовании в качестве экстрагента 10%-ного изопропилового спирта и составляет 2,09 мкг/мл галловой, 1,90 мкг/мл протокате-ховой, 4,90 мкг/мл кофейной, 0,37 мкг/мл кума-ровой кислот в извлечениях сбора «Панкрео-фит».
Таблица 2
Кислота |
Содержание в экстрактах |
Площадь пика стандартного вещества при 10 мкг/мл |
||||
водный |
10%-ный изопропиловый |
|||||
площадь пика при соответствующей длине волны |
концентрация кислоты в растворе экстракта |
площадь пика при соответствующей длине волны |
концентрация кислоты в растворе экстракта |
|||
1 |
Галловая |
150 |
1,36 |
230 |
2,09 |
1100 260 нм |
2 |
Протокатеховая |
80 |
0,50 |
300 |
1,90 |
1600 260 |
3 |
Кофейная |
150 |
0,76 |
960 |
4,90 |
1960 315нм |
4 |
Кумаровая |
110 |
0,37 |
110 |
0,37 |
2900 315 |
Количественное содержание фенолкарбоновых кислот в сборе «Панкреофит»
Список литературы Определение фенолкарбоновых кислот в сборе «Панкреофит»
- Флавоноиды зверобоя продырявленного при выращивании в Западной Сибири/И.И. Баяндина и др.//Труды Белорусского государственного университета. -2013. -Т. 8, ч. 2. -С. 49-52.
- Верниковская Н.А. Хроматографическое определение фенольных соединений и флавоноидов в лекарственных растениях: автореф. дис.. канд. хим. наук. -Краснодар, 2011. -24 с.
- Николаев С.М. Системная фитофармакология -основа рациональной фитофармакологии и фитофармакопрофилактики заболеваний//Вестник Бурятского государственного университета. -2011. -Вып. 12. -С. 3-5.
- Николаев С.М., Николаева И.Г., Разуваева Я.Г., Доржиев А.М. Антиоксидантная активность нового панкреозащитного средства «Панкреофит» и изучение его флавоноидного состава»//Химикофармацевтический журнал. -2011. -Т. 45, № 5. -С. 134-136.
- Разработка растительного средства «Панкреафит», обладающего антиоксидантным и панкреазащитным действием/И.Г. Николаева и др.//Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. -2011. -№ 2. -С. 159-162.
- Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: руководство для врачей. -М., 2000. -976 с.