Определение уровня цитохрома P450scc в клетках меланомы и плоскоклеточного рака кожи

Материал и методы. Нормальные кера-тиноциты (клеточная линия NHEK, Clonetics) культивировались в среде KGM-2 (Clonetics). Нормальные меланоциты (HEM, Cascade biologics) культивировались в Medium 254 (Cascade biologics). Клетки плоскоклеточного рака кожи (клеточная линия А431, АТСС) и клетки злокачественной меланомы кожи (SK-MEL-2, ATCC) культивировались в среде Игла, модифицированной Дульбекко (Cellgro, Mediatech Inc.), обогащенной 10 % раствором фетальной бычьей сыворотки, глютамином, пируватом натрия и глюкозой. Иммуноцитохимическое исследование проводилось по стандартным протоколам. При достижении 70–80 % плотности клетки пересевались на стекла Super Cell Culture Slides (Fisher Scientific, Pittsburg, PA), после чего инкубировались в течение 24 ч. В дальнейшем среда удалялась, клетки фиксировались в 10 % формалине в течение 10 мин, затем производилась инкубация с антителами к цитохрому P450SCC в разведении 1:300. При микроскопии оценивалось количество положительных клеток на 100 клеток. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты. Цитохром P450_SCC определялся во всех четырех исследуемых клеточных культурах. Количество нормальных кератиноцитов, в которых определялся исследуемый фермент, составляло 68 на 100 клеток. В нормальных меланоцитах число цитохром Р450scc⁺ составляло 89. Определялось статистически достоверное снижение уровня цитохрома P450_SCC в клетках плоскоклеточного рака и меланомы: на 8 и 6,5 соответственно.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о возможности синтеза прегненолона в коже, а также о нарушениях стероидогенеза в коже при развитии злокачественных опухолей.

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2008. Приложение № 1