Определение взаимного влияния параметров иммунного статуса и уровня циркулирующих в крови опухолевых клеток (ЦОК) у больных раком лёгкого

Сведений об избегании ЦОК иммунного надзора при раке легкого (РЛ) очень мало, в связи с чем детекция их уровня с детальным определением иммунного статуса может дать важную оценку взаимодействия опухолевых и иммунокомпетентных клеток, для анализа их роли при различных видах онкопатологии.

Цель. Оценить частоту выявления опухолевых клеток циркулирующих в крови опухоленосителя при генерализованных формах рака легкого, а также их взаимоотношение с иммунокомпетентными клетками крови.

Материалы и методы. Исследование проведено 20 больным раком легкого IV стадией заболевания (Т 2–3N2–3M1; 52–75 лет). У 11 человек (55%) гистологический тип опухоли соответствовал немелкоклеточному раку, у 9 (45%) – мелкоклеточному. Анализ образцов крови на наличие ЦОК осуществляли на системе CellSearch с использованием набора реагентов CELLSEARCH^® CTC Kit. По количеству ЦОК больные были разделены на группы с низким количеством (до 10) ЦОК, со средним (от 11 до 100) ЦОК, и высоким (cвыше 100) ЦОК. Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов определяли на проточном цитометре BD FACSCantoII. Протоколы интерпретации данных включали определение основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови, количества Т- регуляторных клеток (CD4+CD25+CD127dim), NKT-клеток, двойных негативных CD3+/CD4-/CD8- (DN) и двойных позитивных CD3+/ CD4+/CD8+ (DP) T-лимфоцитов, количества активационных маркеров (CD25, CD38, CD95, HLADR) на Т-хелперах (CD3+СD4+) и ЦТЛ (CD3+СD8+).

Результаты. ЦОК были выявлены у 80% больных в количестве от 1 до 980 клеток в 7,5 мл крови, при НМРЛ в 91%, при МРЛ в 66,7%. Доля больных раком легкого с количеством ЦОК от 1 до 10 клеток составила 50%, с уровнем ЦОК от 11 до 100 и свыше 100 клеток, по 25%. При МРЛ количество ЦОК находилось в пределах от 1 до 980, тогда как при НМРЛ от 1 до 13 клеток. У 60% больных МРЛ количество выявленных ЦОК превышало 100 клеток. У 80% больных НМРЛ уровень ЦОК соответствовал низким и у 20% средним значениям.

При высоком уровне ЦОК отмечено достоверно более низкое процентное содержание CD3+CD4+ лимфоцитов по сравнению с показателями больных, у которых ЦОК были обнаружены в количествах до 100. Противоположные различия отмечены для CD3+CD8+CD38+, хотя по общей субпопуляции CD3+CD8+ лимфоцитов они не установлены. Уровень лимфоцитов с иммунофенотипом активированных цитотоксических Т-клеток в 2–3 раза выше у больных с максимальным содержанием ЦОК по сравнению с остальными группами.

Выявлены статистически достоверные различия для В-лим-фоцитов, относительное содержание которых в 3 раза ниже, чем в остальных группах, а также для Т-regs, количество которых было в 2 раза ниже, чем у больных с высоким содержанием ЦОК. При этом у больных со средними уровнями ЦОК обнаружено более высокое содержание Т-лимфоцитов обеих основных субпопуляций с маркерами поздней активации CD3+CD4+HLA-DR+ и CD3+CD8+HLA-DR+, которое вследствие значительной индивидуальной вариабельности определялось в виде тенденции.

При проведении корреляционного анализа наличия в крови больных ЦОК и иммунологическими параметрами выявлена сильная отрицательная корреляционная связь (r -0,87) между присутствием в крови ЦОК и CD3+CD4+ клеток. Сильная положительная корреляция (r 0,78) обнаружена между лимфоцитами с иммунофенотипом активированных цитотоксических Т-клеток и наличием ЦОК. Уровень ЦОК демонстрирует сильную корреляционную связь с некоторыми минорными субпопуляциями лимфоцитов: CD3+CD4+CD25+ (r 0,74) и CD3+CD4+CD8+ (r 0,67).

Заключение. Проведенное исследование с использованием системы CellSearch показало высокую частоту выявления ЦОК у больных раком легкого. У больных с высокими значениями ЦОК выявленная положительная корреляция уровней DP (CD3+CD4+CD8+) лимфоцитов и ЦОК, возможно, связана с увеличением выброса незрелых клеток из тимуса.

Этим же можно объяснить и повышение уровня CD3+CD8+CD38+ клеток, однако, то, что подобные изменения не распространяются на лимфоциты с фенотипом CD3+CD4+CD38+, говорит о нарушении Т-хелперного звена на уровне посттимических предшественников. Полученные нами результаты о повышении содержания клеток этой субпопуляции на фоне высокого уровня ЦОК в целом соответствуют представлениям об их негативной роли при распространенных опухолевых процессах.

Работа поддержана грантом РФФИ № 16–34–00244 мол_а «Оценка взаимного влияния уровня циркулирующих опухолевых клеток и параметров иммунного статуса у больных раком легкого».