Опыт получения и культивирования линии опухолевых клеток

Актуальность. На сегодняшний день все большую актуальность приобретают вопросы улучшения ранней диагностики онкопатологии, так как прогноз и 5-летняя выживаемость тесно взаимосвязаны со стадией опухолевого процесса. В связи с этим обоснованной является разработка уточняющих методов диагностики ранних форм рака, основанных, в частности, на изучении органоспецифических и опухоле- ассоциированных антигенов с последующей разработкой на их основе диагностических тест-систем. Стабильные культуры клеточных линий служат однородным и постоянным источником клеточных мембран, обогащенных поверхностными антигенными детерминантами, связанными со злокачественным фенотипом клетки.

Цель исследования. Получение и культивирование линии опухолевых клеток с высокой онкоантигенной специфичностью для применения в иммунодиагностике.

Материал и методы. Источником материала служили биоптаты злокачественных опухолей легкого и плевральные выпоты, полученные от 10 больных, ранее пролеченных по поводу рака легкого. При цитоморфологическом исследовании все процессы были верифицированы как низкодифференцированная аденокарцинома. Фрагменты опухолевой ткани были диссоциированы методом многократной ферментативной дезагрегации с использованием 0,25 % раствора трипсина. Опухолевые клетки плеврального выпота осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Осадок, состоящий из изолированных клеток, ресуспензировали в неполной среде DMEM и подсчитывали концентрацию клеток в камере Горяева. Клетки высевали в среду DMEM с 10 % фетальной сывороткой в посевной концентрации 2x10⁵ клеток/мл и инкубировали при 37°С в СО₂ инкубаторе. Микроскопирование культур опухолевых клеток проводили ежедневно, а смену среды в начале культивирования через 1–2 сут по 1/3–1/5 объема, а затем по мере изменения рН среды.

Результаты. Были получены 2 стабильные линии злокачественных клеток опухолей легкого, которые прошли 12 пассажей. При нарастании клеточной массы и достижении клетками плотности 1x10⁶ клеток/мл и выше клетки пересевали и поддерживали ее на уровне 5х10⁵клеток/мл. Характер роста клеток – стационарная суспензия, состоящая из слабо прикрепляющихся к носителю округлых клеток, размер которых сходен с клетками миеломной линии. Ядро занимает большую часть клетки. Цитоплазма имеет вид тонкого ободка. Часть клеток переносили в пластиковые матрацы для дальнейшего размножения. Другую часть подвергали замораживанию (криоконсервации) с использованием фетальной сыворотки и 10 % ДМСО.

Выводы. Наиболее усиленный рост отмечался при культивировании опухолевых клеток из плеврального выпота рака легкого. Выживаемость опухолевых клеток при размораживании достигала 85 %. Дальнейшие исследования по изучению специфичных свойств антигенов продолжаются.