Особенности иммунной системы у пациентов с меланомой кожи в процессе оперативного лечения

Актуальность изучения меланомы кожи определяется стремительными темпами роста заболеваемости [3], высокой агрессивностью этой опухоли и отсутствием удовлетворительных результатов лечения. Особое внимание привлекают иммунологические аспекты данной проблемы. Согласно современным представлениям, меланома кожи является одной из наиболее иммуногенных опухолей [1]. Это положение основано на клинических наблюдениях и результатах многочисленных экспериментальных работ [6]. Цельного представления о месте иммунной системы и ее медиаторов в контроле опухолевого роста при меланоме, как и при других новообразованиях, до сих пор не выработано. Во многом это обусловлено тем, что в доступной литературе практически отсутствуют работы, посвященные комплексному изучению иммунной системы у пациентов с меланомой кожи. Активационные маркеры лимфоцитов периферической крови и процессы их апоптоза, дающие существенную информацию о состоянии иммунной системы, при меланоме остаются малоисследованными. Слабо освещены вопросы, касающиеся системы комплемента.

Цель исследования – изучить состояние иммунного статуса у пациентов с меланомой в ближайшем послеоперационном периоде.

Материалы и методы

Состояние иммунитета было изучено у 33 пациентов с меланомой кожи, возраст пациентов составил в среднем 35±3 лет. Исследования проводились до оперативного лечения, в первые послеоперационные сутки, на пятые, седьмые, десятые послеоперационные сутки и через 18 мес. после перенесенной операции. Для сравнения изучены показатели клеточного звена системы иммунитета у 17 относительно здоровых добровольцев того же возраста и пола (группа сравнения 1) и 26 пациентов, оперированных по поводу доброкачественных пигментных образований кожи (группа сравнения 2), возраст и пол пациентов из группы сравнения 2 совпал с основной группой, изучение показателей проводилось на те же сутки. У всех пациентов диагноз подтвержден цитологически до проведения оперативного лечения. Морфологическое подтверждение выполнялось после операции. Оперативное лечение производилась под внутривенным наркозом, выполнялось широкое иссечение образования.

При изучении иммунного статуса определялись следующие показатели: субпопуляции Т- и В-лимфоцитов: количество в периферической крови лимфоцитов, несущих медиаторы CD3 (зрелые Т-лимфоциты); CD4 (Т-хелперы); CD8 (цитотоксические Т-клетки); CD16 (натуральные киллеры); CD20 (В-клетки), а также соотношение CD4/CD8. Изучение названных показателей выполнялось с помощью проточной цитофлаурометрии с моноклональными антителами. CD25 – рецептор к ИЛ-2, маркер активации Т- и В-лимфоцитов, CD95 – Fas-антиген, HLA-DR – маркер активации Т-лимфоцитов) в микроварианте компле-ментзависимого лимфоцитотоксического теста [7]. Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводилось турбодиметрическим методом. Для этого исследования применяли 3,5% раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 Д (США) в фосфатном буфере (pH 8,4). Результаты учитывали на спектрометре СФ-46 при длине волны 450 нм и выражали в условных единицах. Общее содержание IgG, M, A – по методу простой радиальной иммуннодиффузии по Mancini [9], а также IgE, определяемый по методу ИФА. Содержание С3-, С4-компонентов комплемента, ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, интерферона-γ (ИНФγ), ИЛ-4, ИЛ-10 в плазме крови определяли с помощью набора реагентов ProCon (ООО «Протеиновый контур» г. Санкт-Петербург) [4]. Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивалось по фагоцитарному индексу (ФИ) и фагоцитарному числу (ФЧ) [5]. Активность кислородсодержащих систем нейтрофилов оценивалась по реакции восстановления нитро-синего тетразолия спонтанного (НСТ-сп.) и стимулированного (НСИ-ст.) зимозаном [2]. Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики медико-биологического профиля. Обработка включала расчет медиан и верхних и нижних квартилей, а также определение достоверности различий (p) с использованием критерия Манна–Уитни для независимых групп и критерия Уилкоксона для зависимых. Для этой цели применяли персональный компьютер с пакетом прикладных программ «Statistica 6.0» или Excel (Microsoft, 2003).

Результаты и их обсуждение

Как показывает проведенное исследование клеточного звена системы иммунитета, у пациентов с меланомой кожи до проведения оперативного лечения отмечается снижение как долевого, так и абсолютного содержания лимфоцитов, несущих рецепторы CD16+ (натуральные киллеры), CD3+ (зрелые Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы). Остальные показатели не изменялись и соответствовали данным, полученным в группе сравнения. В группе пациентов с доброкачественными пигментными образованиями кожи анализируемые показатели не изменялись и соответствовали данным, полученным в группе относительно здоровых людей (табл. 1).

На первые сутки изменений во всех группах не получено, все изучаемые показатели соответствовали данным, полученным до проведения оперативного лечения.

На пятые послеоперационные сутки в группе пациентов, оперированных по поводу меланомы кожи и доброкачественных образований кожи, отмечается статистически достоверное снижение относительного количества всех исследуемых лимфоцитов, при этом абсолютное содержание лимфоцитов не изменялось и соответствовало значениям до оперативного лечения (табл. 1).

На седьмые послеоперационные сутки в группе пациентов, оперированных по поводу доброкачественных пигментных образований кожи, происходило восстановление всех показателей клеточного звена системы иммунитета, т.к. полученные цифры соответствовали данным группы сравнения. В то же время у пациентов, оперированных по поводу меланомы кожи, изменений в клеточном звене системы иммунитета не отмечалось, полученные данные соответствовали данным, полученным на пятые послеоперационные сутки (табл. 2). На седьмые послеоперационные сутки в группе пациентов, оперированных по поводу доброкачественных образований кожи, происходило восстановление всех показателей клеточного звена системы иммунитета, т.к. полученные цифры соответствовали данным по группе сравнения. В то же время у пациентов, оперирован-

Таблица 1

Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения до оперативного лечения (M±m)

Субпопуляции лимфоцитов	Результаты в группах
	основная (n=33)		сравнения 1 (n=17)		сравнения 2 (n=26)
	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л
CD3+	56±1,2*	0,8±1,1*	61±1,3	1,6±1,4	61±1,3	1,5±1,4
CD4+	35±1,4*	0,8±1,4*	48±1,4	1,3±2,3	48±1,4	1,2±2,3
CD8+	8±1,1*	0,1±1,2*	15±0,6	0,4±1,2	14±0,6	0,4±1,2
CD16+	10±1,4*	0,3±1,1*	15±1,4	0,5±1,3	15±1,4	0,4±1,3
CD20+	8±1,1	0,3±1,4	8±2,1	0,3±1,2	8±2,1	0,3±1,2
CD4+/CD8+	0,5±1,3*		1,6±1,3		1,5±1,7

Примечание: здесь и далее * – знак статистической достоверности по сравнению с данными группы относительно здоровых людей

Таблица 2

Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения на пятые послеоперационные сутки (M±m)

Субпопуляции лимфоцитов Результаты в группах основная (n=33) сравнения 1 (n=17) сравнения 2 (n=26) % абс. число ×109/л % абс. число ×109/л % абс. число ×109/л CD3+ 53±1,2* 0,8±1,1* 61±1,3 1,6±1,4 58±1,3 1,5±1,4 CD4+ 33±1,4* 0,8±1,4* 48±1,4 1,3±2,3 46±1,4 1,2±2,3 CD8+ 6±1,1* 0,1±1,2* 15±0,6 0,4±1,2 13±0,6 0,4±1,2 CD16+ 8±1,4* 0,3±1,1* 15±1,4 0,5±1,3 13±1,4 0,4±1,3 CD20+ 6±1,1 0,3±1,4 8±2,1 0,3±1,2 6±2,1 0,3±1,2 CD4+/CD8+ 0,5±1,3* 1,6±1,3 1,5±1,7 ных по поводу меланомы, изменений в клеточном звене системы иммунитета не отмечалось, полученные данные соответствовали данным на пятые послеоперационные сутки (табл. 3).

На десятые послеоперационные сутки, в группе пациентов с меланомой отмечалось восстановление всех показателей кле- точного иммунитета, при этом все показатели соответствовали значениям до начала оперативного лечения (табл. 4).

При изучении показателей клеточного иммунитета в отдаленном послеоперационном периоде (18 мес.), полученные результаты не изменялись, и соответствовало данным, полученным на десятые послеоперационные сутки (табл. 5).

Таблица 3

Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения на седьмые послеоперационные сутки (M±m)

Субпопуляции лимфоцитов	Результаты в группах
	основная (n=33)		сравнения 1 (n=17)		сравнения 2 (n=26)
	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л
CD3+	53±1,2*	0,8±1,1*	61±1,3	1,6±1,4	61±1,3	1,5±1,4
CD4+	33±1,4*	0,8±1,4*	48±1,4	1,3±2,3	48±1,4	1,2±2,3
CD8+	6±1,1*	0,1±1,2*	15±0,6	0,4±1,2	14±0,6	0,4±1,2
CD16+	8±1,4*	0,3±1,1*	15±1,4	0,5±1,3	15±1,4	0,4±1,3
CD20+	6±1,1	0,3±1,4	8±2,1	0,3±1,2	8±2,1	0,3±1,2
CD4+/CD8+	0,5±1,3*		1,6±1,3		1,5±1,7

Таблица 4

Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения на десятые послеоперационные сутки (M±m)

Субпопуляции лимфоцитов	Результаты в группах
	основная (n=33)		сравнения 1 (n=17)		сравнения 2 (n=26)
	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л
CD3+	56±1,2*	0,8±1,1*	61±1,3	1,6±1,4	61±1,3	1,5±1,4
CD4+	35±1,4*	0,8±1,4*	48±1,4	1,3±2,3	48±1,4	1,2±2,3
CD8+	8±1,1*	0,1±1,2*	15±0,6	0,4±1,2	14±0,6	0,4±1,2
CD16+	10±1,4*	0,3±1,1*	15±1,4	0,5±1,3	15±1,4	0,4±1,3
CD20+	8±1,1	0,3±1,4	8±2,1	0,3±1,2	8±2,1	0,3±1,2
CD4+/CD8+	0,5±1,3*		1,6±1,3		1,5±1,7

Таблица 5

Состояние клеточного звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения в отдаленном послеоперационном периоде (M±m)

Субпопуляции лимфоцитов	Результаты в группах
	основная (n=33)		сравнения 1 (n=17)		сравнения 2 (n=26)
	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л	%	абс. число × 109/л
CD3+	56±1,2*	0,8±1,1*	61±1,3	1,6±1,4	61±1,3	1,5±1,4
CD4+	35±1,4*	0,8±1,4*	48±1,4	1,3±2,3	48±1,4	1,2±2,3
CD8+	8±1,1*	0,1±1,2*	15±0,6	0,4±1,2	14±0,6	0,4±1,2
CD16+	10±1,4*	0,3±1,1*	15±1,4	0,5±1,3	15±1,4	0,4±1,3
CD20+	8±1,1	0,3±1,4	8±2,1	0,3±1,2	8±2,1	0,3±1,2
CD4+/CD8+	0,5±1,3*		1,6±1,3		1,5±1,7

Таблица 6

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что у пациентов с меланомой кожи отмечается уменьшение как относительного, так и абсолютного числа лимфоцитов, несущих медиаторы CD16+ (натуральные киллеры), CD3+ (зрелые Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы) и CD8+ (цитотоксические Т-клетки), кроме того, отмечается уменьшение индекса соотношения CD4+/CD8+. В группе пациентов с доброкачественными пигментными образованиями кожи изменений в клеточном звене системы иммунитета не выявлено.

При изучении гуморального звена системы иммунитета учитывались следующие показатели: циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), выраженные в условных единицах. Общее содержание IgG, M, A, E. Содержание С3-, С4-компонентов комплемента, ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, интерферона-γ (ИНФγ), ИЛ-4, ИЛ-10. Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивалось по фагоцитарному индексу (ФИ) и фагоцитарному числу (ФЧ). Активность кислотосодержащих систем нейтрофилов оценивалась по реакции восстановления нитросинего тетразолия спонтанного (НСТ-сп.) и стимулированного (НСТ-ст.) зимозаном.

В результате проведенного анализа гуморального звена системы иммунитета установлено, что до начала оперативного лечения в группе пациентов с меланомой кожи зарегистрировано снижение количества IgG, ФНОα, ИЛ1β. В группе пациентов с доброкачественными пигментными образованиями кожи изменений в гуморальном звене системы иммунитета не выявлено, все исследуемые показатели соответствовали данным из группы сравнения относительно здоровых людей (табл. 6).

В первые послеоперационные сутки показатели гуморального иммунитета не изменялись и соответствовали данным, полученным до оперативного лечения.

На пятые послеоперационные сутки в обеих исследуемых группах регистрировалось умеренное, статистически достоверное увеличение показателей ЦИК, остальные показатели не изменялись (табл. 7).

На седьмые послеоперационные сутки в обеих группах происходило восстановление показателей ЦИК, однако выявлено снижение общего количества комплимента, его С3- и С4-фракций. На десятые послеоперационные сутки в анали-

Состояние гуморального звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения до оперативного лечения (M±m)

Показатели, единицы измерения Результаты в группах основная (n=33) сравнения 1 (n=17) сравнения 2 (n=26) Ig A, г/л 1,3±2,2 1,3±2,2 1,3±2,2 Ig G, г/л 4,1±3,4* 6,3±3,4 6,3±3,4 Ig M, г/л 2,3±1,3 2,4±1,3 2,4±1,3 Ig E, г/л 1,4±1,3 1,4±1,3 1,4±1,3 Общее количество комплемента, МЕ/мл 220±1,4 221±2,4 221±2,4 С3-фракция комплемента, г/л 12,5±1,6 12,5±1,6 12,5±1,6 С4-фракция комплемента, г/л 0,18±1,6 0,18±1,3 0,18±1,3 С1-инг. нг/мл 220,4±2,4 220,4±2,4 220,4±2,4 ЦИК, у. е. 31±1,8 30±1,4 30±1,4 ФНОα, пг/мл 2,77±2,2* 3,69±2,2 3,56±2,2 ИЛ1β, пг/мл 3,89±1,2* 5,94±1,1 5,94±1,1 ИЛ-6, пг/мл 0,22±1,2* 1,48±2,2 1,48±2,2 ИЛ-8, пг/мл 26,1±1,2 26,1±1,2 26,1±1,2 ИЛ-4, пг/мл 0,81±1,1 0,81±1,1 0,81±1,1 ИЛ-10, пг/мл 29,6±3,3 29,8±3,3 29,8±3,3 ИЛ-2, пг/мл 0,08±2,1 0,08±2,1 0,08±2,1 ИНФγ, пг/мл 4,02±1,4 4,02±1,1 4,02±1,1 Фактор Н, нг/мл 32,8±2,3 32,8±2,3 32,8±2,3 ФИ, % 52,8±1,1 53,2±1,1 53,2±1,1 ФЧ, абс. 5,79±2,1 5,81±2,1 5,81±2,1 НСТ-сп., % 25,1±1,2 25,1±1,2 25,1±1,2 НСТ-ст., % 31,4±1,3 31,4±1,3 31,4±1,3 зируемых группах происходило восстановление значений всех исследуемых показателей. В то же время у пациентов основной группы оставался пониженным уровень IgG (табл. 8).

Изменений в отдаленном послеоперационном периоде у пациентов обоих исследуемых группах не отличалось, значения показателей соответствовали данным, полученным на десятые послеоперационные сутки.

Таким образом, проведенные исследования показывают, что специфических изменений в гуморальном звене системы иммунитета у пациентов с меланомой кожи как в ближайшем, так и в отдаленном послеоперационном периоде не происходит, за исключением значений показателя IgG, который был понижен по сравнению с данными группы сравнения из относительно здоровых людей.

Вывод

У пациентов с меланомой кожи в клеточном звене системы иммунитета до проведенного оперативного лечения отмечает-

Таблица 7

Состояние гуморального звена системы иммунитета у пациентов основной группы и группы сравнения на пятые послеоперационные сутки (M±m)

ся снижение как относительного, так и абсолютного числа лимфоцитов, несущих рецепторы CD16+, CD3+, CD4+, снижение отмечается на пятые послеоперационные сутки. В гуморальном звене системы иммунитета у больных с меланомой кожи зарегистрировано снижение количества IgG, ФНОα, ИЛ1β, которые восстанавливаются на десятые послеоперационные сутки, за исключением уровня IgG, который оставался сниженным.