Особенности экспрессии EGFR при раке прямой кишки, связь с частотой метастатического поражения регионарных лимфатических узлов

Мультидисциплинарный подход в лечении рака прямой кишки (РПК) является наиболее оптимальным и позволяет предупредить прогрессирование злокачественного процесса [1–3]. Известно, что процессы жизнедеятельности опухолевых клеток во многом зависят от продукции ростовых факторов и их рецепторов. Одним из таких наиболее существенных агентов является эпидермальный

Цель исследования – изучить особенности экспрессии EGFR при раке прямой кишки и сопоставить их с частотой метастатического поражения регионарных лимфатических узлов.

Материал и методы

Исследовался операционный материал, полученный от 149 больных раком прямой кишки T 14 N 0 2 M 0 , которым проводилось лечение в торакоабдоминальном отделении НИИ онкологии Томского НИМЦ с 1999 по 2015 г. В окончательный анализ включены 88 (59,1 %) пациентов РПК, у которых была выявлена позитивная экспрессия EGFR. Средний возраст пациентов –58,2 ± 10,1 года, из них 51 (58 %) мужчина и 37 (42 %) женщин. Всем больным выполнено оперативное вмешательство в радикальном объеме, которое в 28 (31,8 %) случаях предварялось неоадъювантной химиолучевой терапией по методике, принятой в клинике [23]. Морфологическому исследованию подвергалась ткань первичной опухоли. Материал фиксировался в 10–12 % растворе нейтрального формалина. Проводка материала и изготовление гистологических препаратов осуществлялись по стандартной методике. Препараты окрашивались гематоксилином и эозином. Исследование выполнялось с применением светового микроскопа «Carl Zeiss Axio Lab.A1». Гистологический тип рака устанавливался согласно рекомендациям ВОЗ (2010). Включались только случаи с аденокарциномой прямой кишки.

В паренхиматозном компоненте опухоли на разной глубине инвазии: в слизистой оболочке, подслизистом и мышечном слоях, а также в серозной оболочке выделяли железистоподобные, солидные структуры и дискретные группы опухолевых клеток. Иммуногистохимическое исследование выполнялось по стандартной методике. Использовались антитела Anti-EGFR antibody [EP38Y] ab52894 Abcam (кроличьи моноклональные 1:100). В цитоплазме клеток железистоподобных, солидных структур и в группах опухолевых клеток, располагающихся на разной глубине инвазии (в слизистой оболочке, подслизистом и мышечном слоях, а также в серозной оболочке), оценивались наличие, интенсивность и процент экспрессии исследуемого маркера (рис. 1). Интенсивность экспрессии учитывалась по трехбалльной системе: 1 балл – слабая, 2 балла – умеренная, 3 балла – выраженная. Процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией маркера EGFR рассчитывался в 10 полях зрения на 1000 клеток при увеличении ×400. Фотографирование гистологических и иммуногистохимических препаратов осуществлялось с использованием гистосканера MIRAX MIDI фирмы «Zeiss». Обработка полученных данных выполнялась с использованием пакета программ «Statistica 10». Применялись дисперсионный анализ и критерий χ2. Обсуждались результаты с достоверностью различий при р<0,05 и с тенденцией к различиям при р<0,1.

Результаты

Выявлено, что позитивная экспрессия маркера EGFR у пациентов с раком прямой кишки чаще наблюдалась в клетках железистоподобных структур новообразования, в то же время в солидных структурах и дискретно расположенных группах клеток экспрессия данного молекулярно-биологического маркера была ниже. Следует отметить, что данная закономерность наблюдалась при анализе частоты экспрессии EGFR на всех уровнях инвазии опухоли в стенку кишки. Также нами была отмечена связь частоты экспрессии EGFR с глубиной инвазии опухоли в стенку прямой кишки. В серозной оболочке позитивная экспрессия EGFR в железистоподобных, солидных структурах и в дискретных группах опухолевых клеток наблюдалась реже по сравнению с подслизистым и мышечным слоями (табл. 1).

При этом не выявлено различий в интенсивности экспрессии EGFR в зависимости от морфологического типа опухолевых структур и глубины инвазии опухоли в стенку кишки. Уровень экспрессии EGFR был ниже в группах опухолевых клеток в сравнении с таковым в железистоподобных структурах. В солидных структурах и в группах опухолевых клеток более низкий уровень экспрессии отмечался в серозной оболочке по сравнению со значениями экспрессии EGFR в слизистой оболочке и подслизистом слое (табл. 2).

Позитивная экспрессия EGFR в солидных структурах, располагающихся в слизистой оболочке и в дискретных группах опухолевых клеток, располагающихся в серозной оболочке, наблюдалась чаще в случаях с метастатическим поражением

Рис. 1. Микрофото. А – экспрессия EGFR в группах опухолевых клеток, ×400. В – экспрессия EGFR в железистоподобных структурах, ×400. С – экспрессия EGFR в солидных структурах, х400. D – экспрессия EGFR в различных типах опухолевых структур: солидных, группах клеток, железистоподобных, ×600

таблица 1 наличие экспрессии egfr в разных структурах опухоли при раке прямой кишки Наличие экспрессии EGFR Глубина инвазии Железистоподобные структуры Солидные структуры Группы клеток а б в 48/88 (54 %) Слизистая оболочка 1 рб=0,0000 рв=0,0000 4/88 (4,5 %) 6/88 (6,8 %) 67/88 (76 %) Подслизистый слой 2 р1=0,001 р3=0,01 р4=0,0000 рб=0,0000 10/88 (11 %) р1=0,03 24/88 (27 %) р1=0,0003 р4=0,02 р4=0,0003 рв=0,0000 54/88 (61 %) Мышечный слой    3 рб=0,0000 рв=0,0000 10/88 (11 %) 19/88 (21 %) 8/88 (9 %) р1=0,0000 3/88 (3,4 %) 6/88 (6,8 %) Серозная оболочка 4 р2=0,0000 р2=0,02 р2=0,004 р3=0,0000 р4=0,02 р4=0,004 рб=0,04 таблица 2 Экспрессия egfr в разных структурах опухоли при раке прямой кишки Экспрессия EGFR Глубина инвазии Железистоподобные структуры Солидные структуры Группы клеток а б в Слизистая оболочка    1 59,4 ± 29,0 % (n=48) 59,3 ± 26,2 % (n=67) 54,5 ± 9,6 % (n=4) 55,3 ± 26,2 % (n=10) 62,8 ± 28,9 % (n=6) 42,5 ± 27,1 % Подслизистый слой    2 (n=24) ра=0,004 52,3 ± 29,3 % (n=54) 43,8 ± 28,3 % (n=10) 36,2 ± 27,7 % Мышечный слой     3 (n=19) ра=0,02 17,0 ± 5,2 % (n=3) 19,0 ± 8,1 % 62,1 ± 35,1 % (n=6) ра=0,03 рб=0,006 р1=0,0025 Серозная оболочка    4 (n=8) р1=0,0009 р2=0,02 р2=0,02 таблица 3

Экспрессия egfr при раке прямой кишки в зависимости от частоты лимфогенного метастазирования

Глубина инвазии Наличие экспрессии EGFR, количество больных Железистоподобные структуры Солидные структуры Группы клеток N N+ N N+ N N+ Слизистая оболочка 31/62 (50 %) 17/26 (65 %) 1/62 (1,6 %) χ2=4,1; 3/26 (11,5 %) р=0,04 3/62 (4,8 %) 3/26 (11,5 %) Подслизистый слой 46/62 (74 %) 21/26 (81 %) 6/62 (9,7 %) 4/26 (15 %) 16/62 (26 %) 8/26 (31 %) Мышечный слой 35/62 (56 %) 19/26 (73 %) 6/62 (9,7 %) 5/26 (19 %) 12/62 (19 %) 7/26 (27 %) Серозная оболочка 5/62 (8 %) 3/26 (11,5 %) 2/62 (3 %) 1/26 (3,8 %) 2/62 (3 %) χ2=4,2; 4/26 (15 %) р=0,03 таблица 4

Интенсивность экспрессии egfr при раке прямой кишки в зависимости от частоты лимфогенного метастазирования

Глубина инвазии Железистоподобные структуры Интенсивность экспрессии EGFR Солидные структуры Группы клеток N0 N+ N0 N+ N0 N+ Слизистая оболочка 1,2 ± 0,4 (n=31) 1,3 ± 0,4 (n=17) 1,0 (n=1) 1,0 ± 0,0 (n=3) 1,3 ± 0,5 (n=3) 1,3 ± 0,5 (n=1) Подслизистый слой 1,2 ± 0,4 (n=46) 1,3 ± 0,4 (n=21) 1,2 ± 0,4 (n=6) 1,0 ± 0,0 (n=4) 1,3 ± 0,4 (n=16) 1,1 ± 0,3 (n=7) Мышечный слой 1,1 ± 0,3 (n=35) 1,2 ± 0,4 (n=19) 1,2 ± 0,4 (n=5) 1,0 ± 0,0 (n=5) 1,3 ± 0,4 (n=31) 1,1 ± 0,3 (n=17) Серозная 1,0 ± 0,0 1,3 ± 0,5 1,0 ± 0,0 1,0 1,0 ± 0,0 1,0 ± 0,0 оболочка (n=4) (n=3) (n=2) (n=1) (n=2) (n=4) таблица 5

Экспрессия egfr при раке прямой кишки в зависимости от частоты лимфогенного метастазирования

Глубина инвазии Железистоподобные структуры Экспрессия EGFR Солидные структуры Группы клеток N0 N+ N0 N+ N0 N+ Слизистая 61,1 ± 29,4 % 55,1 ± 28,8 % 58,0 % 53,3 ± 11,5 % 79,3 ± 4,1 % 50,5 ± 34,4 % оболочка (n=31) (n=18) (n=1) (n=3) (n=3) (n=4) Подслизистый 58,4 ± 27,8 % 61,2 ± 23,0 % 58,8 ± 23,1 % 50,0 ± 33,3 % 41,3 ± 29,7 % 45,8 ± 20,8 % слой (n=46) (n=21) (n=6) (n=4) (n=16) (n=6) Мышечный 54,0 ± 30,0 % 48,8 ± 28,1 % 58,6 ± 29,4 % 29,0 ± 19,2 % 35,5 ± 32,0 % 37,4 ± 20,3 % слой (n=35) (n=18) (n=5) (n=5) (n=12) (n=7) Серозная 71,5 ± 43,7 % 49,6 ± 20,5 % 17,0 ± 0,0 % 15,0 % 21,0 ± 3,4 % 19,0 ± 8,1 % оболочка (n=4) (n=3) (n=2) (n=1) (n=2) (n=4) регионарных лимфоузлов (табл. 3). С интенсивностью и процентом экспрессии EGFR в клетках разных структур новообразования лимфогенное метастазирование связано не было (табл. 4, 5).

Заключение

В результате исследования выявлены особенности экспрессии эпидермального фактора роста EGFR при раке прямой кишки и их взаимосвязь с лимфогенным метастазированием. Полученные результаты можно объяснить тем, что угнетение экспрессии EGFR в опухолевых клетках связано со снижением дифференцировки и прогрессированием рака прямой кишки. Об этом свидетельствует выявленная закономерность сохранения высокого уровня экспрессии изучаемого маркера в высокодифференцированных опухолевых структурах, таких так железистоподобные, расположенных на разной глубине инвазии. В пользу дедифференцировки опухоли, а, следовательно, и более агрессивного течения заболевания свидетельствует снижение уровня экспрессии EGFR во всех морфологических типах структур по мере нарастания глубины инвазии, при этом в серозной оболочке прямой кишки наблюдались самые низкие показатели экспрессии этого фактора. Также в наиболее низкодифференцированных структурах опухоли, таких как солидные и дискретные группы опухолевых клеток, было обнаружено стойкое снижение уровня экспрессии EGFR, что, вероятно, связано с нарушением баланса сигнальных путей, ответственных за дифференцировку клеток. Кроме того, исследуемый маркер был связан с таким вариантом прогрессирования опухоли, как лимфогенное метастазирование. Так, позитивная экспрессия EGFR, выявленная в низкодифференцированных солидных структурах, расположенных в слизистой оболочке и в дискретных группах опухолевых клеток, расположенных в серозной оболочке, наблюдалась чаще в случаях с метастатическим поражением регионарных лимфатических узлов. Подобные изменения свидетельствуют о том, что гиперэкспрессия EGFR может быть ассоциирована с прогрессированием опухоли и неблагоприятным прогнозом. Результаты проведенного исследования отчетливо демонстрируют нарушение экспрессии эпидермального фактора роста в агрессивно протекающих опухолях с низкой степенью дифференцировки, в большинстве которых преобладают такие морфологические структуры, как солидные и дискретные группы опухолевых клеток.