Особенности экспрессии лектинов при неспецифическом язвенном колите

Адрес: 410019, г. Саратов, 2-й Магнитный проезд, д. 40, кв. 36.

Тел.: 89271656405

ультраструктурном, клеточном и тканевом уровнях, для прижизненных исследований тканевых структур. Лектины позволяют получить информацию о топографии гликопротеинов в тканях и на поверхности клеток и дают представление о химической структуре выявленных углеводных групп, информируют о подвижности мембранных рецепторов, влияют на транспортные и другие внутриклеточные процессы [8–10].

Цель исследования : провести анализ экспрессии лектинов в слизистой оболочке толстой кишки у больных неспецифическим язвенным колитом (НЯК) в зависимости от длительности, тяжести заболевания, локализации и активности воспалительного процесса.

Методы. Исследование проводилось на базе отделения гастроэнтерологии ГУЗ «Областная клиническая больница» г. Саратова. Основную группу составили 48 пациентов с НЯК в возрасте от 20 до 66 лет (24 женщины и 24 мужчины), группу сравнения — 15 практически здоровых людей. Для обследования пациентов использовались клинические, лабораторные, эндоскопические, морфологические методы с изучением биоптатов слизистой оболочки толстой кишки с помощью лектиновой гистохимии.

Пациенты с НЯК были разделены на группы в зависимости от степени тяжести клинических проявлений, длительности заболевания, локализации и активности воспалительного процесса.

С помощью использования меченых пероксидазой лектинов проводилось окрашивание биоптатов слизистой оболочки толстой кишки у практически здоровых людей и у больных НЯК. Применялись следующие лектины: завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину и бобовника анагиралистного LAL-тропного к б-L-фукозе (б — LFuc). В клетках поверхностного эпителия и в эпителии желез слизистой оболочки толстой кишки определялись интенсивность экспрессии (слабая, умеренная и выраженная) и процент экспрессирующих клеток в эпителии желез (количество окрашенных клеток от общего их коли- чества: до 50% прореагировавших клеток, от 50 до 80% и 80-100%).

Полученные в результате исследования данные обработаны с использованием статистического пакета программ «Excel» и «Statistica».

Для сравнения двух групп по качественному признаку применялся тест Манна — Уитни. В результате статистической обработки данных получены следующие результаты.

Результаты. У практически здоровых людей ни в одном случае не отмечалось экспрессии лектинов, как завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину (рис. 1), так и бобовника ана-гиралистного LAL-тропного к б-L-фукозе (б — LFuc).

У пациентов с НЯК только в четырех случаях из 48 наблюдалась отрицательная реакция при использовании лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину. Следует отметить, что во всех четырех случаях это был дистальный колит с длительностью заболевания от 1 года до 5 лет, имеющий легкое течение и I степень эндоскопической активности.

Остальные пациенты с НЯК в зависимости от длительности заболевания были разделены на 3 группы: с длительностью заболевания до 1 года (n=12), от 1 года до 5 лет (n=14) и более 5 лет (n=18).

Все пациенты в зависимости от степени тяжести течения заболевания были разделены на группы согласно классификации Truеlove и Witts (1955 г.). У шести больных отмечалось легкое течение заболевания, у 34 — средней степени тяжести, у четырех — тяжелое.

По локализации воспалительного процесса дистальный колит наблюдался у 12 человек, левосторонний у 20 и тотальный в 12 случаях.

В зависимости от эндоскопической активности заболевания больные распределены на 3 группы: I степень активности была установлена у 14 пациентов, II степень — у 24 и III степень — у шести.

При НЯК экспрессия бобовника анагиралист-ного LAL-тропного к б-L-фукозе (б — LFuc) отсутствовала (рис. 2), однако имелись различия в экспрессии лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину.

Результаты исследования экспрессии лектина в зависимости от длительности заболевания НЯК представлены в табл. 1.

Рис. 1. Отрицательная реакция WGA в клетках железистого эпителия у здоровых людей. Метод иммуногистохимии.

Ув. 200

Рис. 2. Отрицательная реакция LAL в клетках железистого эпителия у больных НЯК. Метод иммуногистохимии. Ув. 200

Как видно из табл. 1, у 83% больных с длительностью заболевания до 1 года экспрессия наблюдалась практически во всех клетках железистого эпителия

Таблица 1

Результаты экспрессии лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину у больных НЯК с различной длительностью заболевания

Длительность заболевания (% экспрессии)
	n	%	n	%	n	%
До 50%	-	-	2	14	2	11
50-80%	2	17	4	28	10	55
80-100%	10	83	8	58	6	34

Интенсивность экспрессии WGA в поверхностном эпителии

Слабая	-	-	-	-	-	-
Умеренная	4	33	8	57	6	34
Выраженная	8	67	6	43	12	66
Интенсивность экспрессии WGA в эпителии желез
Слабая	2	16	2	14	2	11
Умеренная	6	50	8	57	16	55
Выраженная	4	34	4	29	6	34

Таблица 2

Результаты экспрессии лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину у больных НЯК с различной степенью тяжести заболевания

Течение (% экспрессии)	Легкое		Средней степени		Тяжелое
	n	%	n	%	n	%
До 50%	4	67	-	-	-	-
50-80%	2	33	14	41	-	-
80-100%	- До 1 года	- От года до 5 лет	20 Более 5 лет	59	4	100

Интенсивность экспрессии WGA в поверхностном эпителии

Слабая	-	-	-	-	-	-
Умеренная	2	33	22	65	-	-
Выраженная	4	67	12	35	4	100

Интенсивность экспрессии WGA в железистом эпителии

Слабая	4	67	2	5	-	-
Умеренная	2	33	22	65	-	-
Выраженная	-	-	10	30	4	100

(80-100%). С увеличением длительности заболевания процент пациентов с такой же выраженностью экспрессии снижался до 58% во второй группе и до 34% в третьей группе с продолжительностью заболевания более 5 лет. Зависимости выраженности экспрессии в поверхностном эпителии от продолжительности заболевания не выявлено. Интенсивность экспрессии в поверхностном эпителии во всех случаях была умеренно выраженной или выраженной, слабая экспрессия не наблюдалась ни в одном случае. В группах с различной длительностью заболевания не выявлялось закономерности по интенсивности экспрессии в эпителии желез.

Из табл. 2 видно, что при легком течении заболевания у 67% больных экспрессия наблюдалась менее чем в 50% эпителиальных клетках желез. В остальных случаях экспрессия обнаруживалась не более чем в 80% клеток. При средней степени тяжести уже в 59% случаев, а при тяжелом течении в 100% случаев отмечался высокий процент экспрессирующих клеток (рис. 3).

По интенсивности экспрессии в поверхностном эпителии закономерности выявлено не было, однако у пациентов с тяжелым течением во всех случаях наблюдалась экспрессия до 100% клеток.

Следует отметить, что интенсивность экспрессии в железистом эпителии нарастала с увеличением тяжести течения и при тяжелом течении во всех случаях была выраженной в 100% случаев.

При анализе показателей в зависимости от объема поражения кишки различий по интенсивности экспрессии и количеству экспрессирующих клеток в железистом эпителии различий не выявлено, однак, наблюдалось уменьшение интенсивности экспрессии в поверхностном эпителии при распространении воспалительного процесса в проксимальные отделы кишки (табл. 3).

Как видно из табл. 4, при I степени активности НЯК более чем в половине случаев экспрессия наблюдалась в 50-80% клеток железистого эпителия, лишь в 15% случаев окрашивались все клетки. При II и III степенях активности наблюдался самый высо- кий процент экспрессии клеток (от 80 до 100%) более чем в половине случаев.

По интенсивности экспрессии клеток поверхностного эпителия различий между группами больных с I и II степенями активности не выявлено, у больных с III степенью активности наблюдалась только выраженная интенсивность экспрессии. Отмечалось увеличение количества клеток с выраженной интенсивностью экспрессии и при нарастании активности заболевания.

Обсуждение. При сравнительном анализе интенсивности экспрессии лектина завязей пшеницы в клетках поверхностного эпителия статистически значимых различий между группами в зависимости от длительности, тяжести течения НЯК не получено. Имелись различия в интенсивности экспрессии в поверхностном эпителии между пациентами с дистальным и тотальным колитом (р≤0,001) и левосторонним и тотальным колитом (р≤0,004). Кроме этого, имелись различия в экспрессии лектина завязей пшеницы между пациентами со II и III степенями эндоскопической активности (р≤0,02).

Рис. 3. Выраженная экспрессия WGA в клетках поверхностного и железистого эпителия. Метод иммуногистохимии.

Ув. 200

Таблица 3

Результаты экспрессии лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину у больных НЯК в зависимости от локализации воспалительного процесса

Локализация (% экспрессии)	Дистальный		Левосторонний		Тотальный
	n	%	n	%	n	%
До 50%	2	16	2	10	-	-
50-80%	6	50	4	20	6	50
80-100%	4	34	14	70	6	50

Интенсивность экспрессии WGA в поверхностном эпителии

Слабая	-	-	-	-	-	-
Умеренная	2	17	6	30	10	83
Выраженная	10	83	14	70	2	17

Интенсивность экспрессии WGA в железистом эпителии

Слабая	2	17	4	20	-	-
Умеренная	4	33	10	50	10	83
Выраженная	6	50	6	30	2	17

Таблица 4

Результаты экспрессии лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину у больных НЯК в зависимости от степени эндоскопической активности заболевания

Активность (% экспрессии)	I		II		III
	n	%	n	%	n	%
До 50%	4	28	-	-	-	-
50-80%	8	57	6	25	2	34
80-100%	2	15	18	75	4	66

Интенсивность экспрессии WGA в поверхностном эпителии

Слабая	-	-	-	-	-	-
Умеренная	6	43	12	50	–6	–100
выраженная	8	57	12	50

Интенсивность экспрессии WGA в железистом эпителии

Слабая	4	28	4	17	-	-
Умеренная	8	57	14	58	2	34
Выраженная	2	15	6	25	4	66

При анализе интенсивности окрашивания в железах выявлены значимые различия между группами в зависимости от степени тяжести между легким течением и средней степени (р≤0,001), легким и тяжелым (р≤0,006), средней степенью и тяжелым течением (р≤0,008). Отмечались различия в экспрессии лектина завязей пшеницы у пациентов с I и III степенями эндоскопической активности (р≤0,01).

Анализ количества экспрессирующих клеток в железах слизистой оболочки между различными группами больных показал, что достоверное различие имелось между следующими группами: при длительности заболевания до 1 года и более 5 лет (р≤0,007); легкой и средней степени тяжести обострения (р≤0,0002), легкой и тяжелой степени (р≤0,06); I и III степенями (р≤0,01), а также I и II степенями эндоскопической активности (р≤0,0001).

Выводы:

• 1.    У практически здоровых людей отсутствует экспрессия лектинов завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину и бобовника анагиралистного LAL-тропного к б-L-фукозе (б — LFuc).

• 2.    У пациентов с НЯК отсутствует экспрессия бобовника анагиралистного LAL-тропного к б-L-фукозе (б — LFuc).

• 3.    Имеются статистически значимые различия в экспрессии лектина завязей пшеницы WGA-тропного к N-ацетилглюкозамину у больных НЯК в зависимости от тяжести течения заболевания и активности воспалительного процесса, что может быть связано с изменениями в структуре клеточных мембран эпителиоцитов слизистой оболочки толстой кишки при НЯК.