Особенности лабораторной диагностики Corynebacterium auriscanis, выделяемых из клинического материала собак

С появлением современных методов диагностики возрастает частота выделения микроорганизмов, относительно редко встречавшихся ранее. Так, род Corynebacterium в последние годы приобрел диагностическое значение не только в гуманитарной, но и в ветеринарной медицине. Доказано участие представителей данного рода микроорганизмов в патологических процессах у животных и человека.

В гуманитарной медицине особое значение имеет Corynebacterium diphtheriaе – возбудитель дифтерии у человека. Отсюда берет начало изучение дифференциальной диагностики рода Corynebacterium, поскольку необходимо отличать возбудитель дифтерии от непатогенных представителей того же рода [1].

Известно, что Corynebacterium pseudotuberculosis (ovis) – возбудитель казеозного лимфаденита – хронически протекающей болезни мелкого рогатого скота, характеризующейся образованием в лимфатических узлах, легких, печени и других органах и тканях специфических гнойно-некротических очагов, развитием кахексии, и заканчивающейся преждевременной выбраковкой или гибелью животного [2]. В 2002 г. описана атипичная вспышка инфекции, вызванной Corynebacterium pseudotuberculosis, в молочном стаде: у нетелей 8–17-месячного возраста: отмечены поражение копытного венчика и сильная хромота. Для большинства поражений характерны кровоточивость, отделение участков кожи и образование гранулем [3].

Однако представители рода Corynebacterium имеют диагностическое значение не только у сельскохозяйственных животных, но и, являясь частью условно-патогенной микрофлоры, вовлекаются в патологические процессы у собак. Так, благодаря такому методу идентификации, как MALDI-TOF масс-спектрометрия, в биологическом материале собак с клиническими признаками отита, вульвовагинита, механических повреждений кожи нередко выделяется Corynebacterium auriscanis в монокультуре и в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами.

Цель исследования – охарактеризовать биологические особенности вида Cory-nebacterium auriscanis, изолированного из клинического материала собак.

Исследование актуально: в ветеринарной медицине отсутствуют методические указания для дифференциальной диагностики коринебактерий, участвующих в патогенезе инфекционных болезней собак.

Согласно исследованиям А.С. Акжигитова микрофлоры наружного слухового прохода у собак при отитах представители рода Corynebacterium на втором месте по частоте выделения (8,6% случаев) после представителей рода Staphylococcus (65,2% случаев), а основная их часть приходится на ассоциации со стафилококками и условнопатогенными грибами (преимущественно рода Malassezia) [4]. Бент Аальбек в своей работе [5] установил, что доминирующий вид (в 66,7% случаев) – Corynebacterium auriscanis.

Керстин Хенневельд с соавторами (2012) в своем исследовании микрофлоры при отитах у мелких домашних животных пришли к выводу, что патогенность Coryne-bacterium auriscanis весьма сомнительна, его этиологическая значимость в возникнове-

Vestnik of Omsk SAU, 2023, no. 2(50) VETERINARY AND ZOOTECHNY нии отита доказана лишь в 2 из 81 исследованных случаев. В преобладающем большинстве клинических случаев данный вид являлся, вероятно, вторичным инфектом [6].

Материалы и методы

Исследования проводились на базе Санкт-Петербургской городской ветеринарной лаборатории – экспертно-испытательного центра, в отделе пищевой микробиологии, бактериологии и приготовления питательных сред. В работе использовали классический бактериологический метод и масс-спектрометр Vitek 2 Compact (BioMerieux) с технологией MALDI-TOF (времяпролетная матрично-активированная лазерная де-сорбция/ионизация) для выделения коринебактерий из клинического материала и описания их морфологических, культуральных и биохимических свойств. Чувствительность к антибиотикам осуществляли диско-диффузным методом на агаре Мюллера – Хинтона.

Результаты и их обсуждение

Несмотря на то, что Corynebacterium auriscanis не вызывает серьезного опасения при выявлении в клиническом материале, существует необходимость комплексного лечения патологии наружного слухового прохода с устранением не только этиологической причины, но и вторичной микрофлоры. В связи с этим проведено исследование 10 культур коринебактерий классическим бактериологическим методом.

Культура № 1 выделена в монокультуре из наружного слухового прохода; культура № 2 выделена в ассоциации со St. intermedius из раневого экссудата на коже; культура № 3 – в ассоциации со St. schleiferi из наружного слухового прохода; культура № 4 – в ассоциации со St. intermedius из наружного слухового прохода; культура № 5 выделена в ассоциации со St. intermedius из раневого экссудата на коже; культура № 6 – в ассоциации со St. intermedius и Neisseria zoodegmatis из наружного слухового прохода; культура № 7 – в ассоциации с Past. canis, Str. canis и St. intermedius из наружного слухового прохода; культура № 8 выделена в ассоциации со St. schleiferi из наружного слухового прохода; культура № 9 выделена в ассоциации со St. haemoliticus, St. intermedius и E. coli из наружного слухового прохода; культура № 10 – в ассоциации со St. intermedius из наружного слухового прохода; культура № 11 – в ассоциации со St. schleiferi из раневого экссудата из петли; культура № 12 выделена в ассоциации со St. schleiferi из раневого экссудата из петли.

Рост Corynebacterium auriscanis на питательных средах медленный по сравнению с другими представителями условно-патогенной микрофлоры. Необходимо 48 ч культивирования для проявления культуральных свойств микроорганизма. В первые сутки на ГРМ-агаре и кровяном агаре отмечали рост очень мелких (не более 1 мм) непрозрачных колоний. ГРМ-бульон оставался прозрачным, без осадка и поверхностной пленки. На вторые сутки колонии на твердых питательных средах достигали размера до 3 мм в диаметре. ГРМ-бульон оставался прозрачным, в 2 из 12 случаев наблюдали образование небольшого количества придонного осадка. Колонии не обладали гемолизом, отсутствовал рост на средах с содержанием соли (солевой манит).

При микроскопии окрашенных по Граму мазков чистой суточной культуры наблюдали Гр+ короткие палочки с закругленными концами и коккообразные бактерии, собранные колониями по типу стафилококков, и в редких случаях расположенные одиночно. Микроскопия мазков чистой культуры после 48 ч культивирования показала более крупные Гр+ палочки, края которых закруглены и с одного конца имеется булавовидное утолщение. Бактерии, как правило, расположены попарно под углом друг к другу либо одиночно.

Vestnik of Omsk SAU, 2023, no. 2(50)

VETERINARY AND ZOOTECHNY

Исследование биохимических свойств проводили в соответствии с методическими указаниями по дифференциальной диагностике возбудителя дифтерии [1]. Использовали среды Гисса с сахарами, уреазный бульон с мочевиной, тест на наличие каталазы в капле 6%-ной перекиси водорода. Результат учитывали после 48 ч культивирования при 37°С. Результаты биохимических исследований представлены в табл. 1.

Биохимические свойства Corynebacterium auriscanis, изолированных из клинического материала больных собак

Чувствительность Corynebacterium auriscanis к антибактериальным препаратам

Таблица 1

№ культуры, п/п	Результат биохимических исследований культур
	Глюкоза	Лактоза	Сахароза	Манит	Инозит	Уреазный бульон с мочевиной	Каталаза
№ 1	+	–	–	–	–	–	+
№ 2	+	–	–	–	–	–	+
№ 3	+	+	–	–	–	–	+
№ 4	+	–	–	–	–	–	+
№ 5	+	–	±	–	–	–	+
№ 6	+	–	–	–	–	–	+
№ 7	+	±	–	–	–	–	+
№ 8	+	–	–	–	–	–	+
№ 9	+	–	–	–	–	–	+
№ 10	+	–	–	–	–	–	+
№ 11	+	–	–	–	–	–	+
№ 12	+	–	–	–	–	–	+

Таблица 2

Наименование антибиотика	Зона задержки роста культур
	№ 1	№ 2	№ 3	№ 4	№ 5	№ 6	№ 7	№ 8	№ 9	№ 10	№ 11	№ 12
Гентамицин	25	31	25	0	30	25	20	27	30	20	21	25
Клиндамицин	20	0	30	13	10 – 32	22	19	30	37	24	16	18
Оксациллин	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
Цефотаксим	0	15	24	25	25	15	13	0	0	23	10	18
Энрофлоксацин	22	30	22	21	0	25	27	30	0	29	30	26
Бензилпенициллин	0	0	30	25	30	30	26	30	0	0	31	29
Тилозин	15	17	23	19	25	0	0	23	0	12	17	0
Амоксициллин с клавулоновой кислотой	0	0	30	30	36	0	37	30	0	0	31	34
Триметоприм	11	15	15	0	11	11	0	0	0	15	12	15
Кларитромицин	19	0	30	0	–	11	27	35	18	0	28	0

Чувствительность суточной культуры микроорганизма к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузным методом на агаре Мюллера – Хинтона после 24 ч культивирования при 37°С (табл. 2). Отметим, что все исследованные культуры резистентны к оксациллину, что можно считать одним из дифференциальных признаков данного вида.

Заключение

По результатам исследования, чистая культура Corynebacterium auriscanis в ряде случаев по морфологическим и культуральным свойствам после 24 ч культивирования обладает некоторыми признаками бактерий рода Staphylococcus, а в других случаях – морфологическими признаками рода Bacillus, это обусловливает необходимость диф-

Vestnik of Omsk SAU, 2023, no. 2(50) VETERINARY AND ZOOTECHNY ференциации этих микроорганизмов. Для более точной постановки диагноза необходимо учитывать вид клинического материала и вид животного, от которого материал взят. Рекомендовано оставлять посевы в термостате до 48 ч. Прибегая к изучению биохимических свойств микроорганизма, стоит учитывать невысокую ферментативную активность данного вида коринебактерий по истечении 48 ч. Также диагностически важным может быть отсутствие чувствительности к оксациллину в 100% случаев, следовательно, рекомендовано включать данный антибактериальный препарат во время исследования антибиотикочувствительности культур, выделенных из клинического материала собак.