Особенности течения артериальной гипертензии, связанные с распределением аллелей и генотипов полиморфного маркера C825t гена GNB3 среди больных, проживающих в Ростовской области

В настоящее время в мире АГ страдает около 1 млрд человек. Несмотря на всеобщие усилия по профилактике и лечению АГ, она остается одним из ведущих факторов риска смертности населения от основных сердечно-сосудистых осложнений, таких как нарушение мозгового кровообращения и инфаркт миокарда, доля которых в структуре общей смертности составляет 20–50%.

Вклад АГ в смертность лиц среднего возраста от сердечно-сосудистых заболеваний составляет 40%, а в смертность от мозгового инсульта – 70–80% [2].

Растущая заинтересованность современных исследователей проблемой генетических полиморфизмов открывает широкие перспективы в переосмыслении и более глубоком понимании механизмов возникновения и прогрессирования большинства известных болезней. Не является исключением и АГ – многофакторное заболевание, при котором полиморфизмы в разных генах рассматривают в комплексе с экзогенными факторами [6].

В генетических исследованиях факторов развития АГ идентифицировано более 1500 генов, которые ассоциированы с повышением уровня АД [8].

Известно, что в большинстве случаев многофакторная природа АГ обусловлена генетическим полиморфизмом ренин-ангиотензин-альдостероновой (РААС) и брадикининовой систем [9]. Эти заключения основываются на многочисленных исследованиях по изучению ассоциации АГ с полиморфными вариантами соответствующих генов.

При исследовании связи генетических факторов АГ с особенностями ее течения, развитием осложнений и эффективностью терапии было показано, что наибольшее значение имели гены, кодирующие компоненты РААС [5].

С позиций современных представлений одним из патогенетических механизмов АГ является нарушение процессов передачи сигналов внутрь клеток. Как известно, в клетках организма присутствуют гуанин связывающие G-белки, представляющие собой ГТФ-азы – ферменты, которые связывают и гидролизуют гуанозинтрифосфат (ГТФ, GTP) и функционируют в качестве вторичных посредников во внутриклеточных сигнальных каскадах [3].

G-белки экспрессируются во всех клетках. G-белок, кодированный геном GNB3, опосредует передачу сигналов внутрь клеток, контролируя тонус сосудов и клеточную пролиферацию. Изменение активности синтезируемого G-белка может повлечь за собой нарушения в передаче внутриклеточных сигналов и привести к сужению сосудов, повышению артериального давления, гипертрофии левого желудочка, клеточной пролиферации и другим патологическим процессам. Многими работами подтверждена связь полиморфного маркера C825T гена GNB3 с развитием ожирения.

Раннее начало АГ ассоциировано с носительством генотипа Т/Т полиморфного маркера С825Т гена [4]. Некоторые исследования показывают, что генотип Т/Т предрасполагает к макрососудистым осложнениям, таким как инсульты и инфаркт миокарда, вне зависимости от уровня артериального давления и других факторов риска. Гомозиготы по Т аллели (генотип Т/Т) более предрасположены к повышению массы тела, чем носители аллели С.

На основании многочисленных исследований был определен круг генов-кандидатов, вовлеченных в формирование АГ [1, 7, 10, 12]. Однако, следует иметь в виду, что в разных популяциях вклад генов в развитие одного и того же заболевания может существенно различаться.

Соответственно, значительно различается в популяциях и уровень ассоциации одних и тех же маркеров. Например, аллель 825Т гена GNB3 достоверно ассоциирована с АГ в европейских популяциях, но не в восточно-азиатских. Вариабельность результатов генетикоэпидемиологических исследований может быть связана как с генетической гетерогенностью исследованных популяций, так и с патофизиологическими особенностями в патогенезе АГ у представителей разных этнических групп [11].

Исходя из вышеизложенного, цель исследования состояла в изучении ассоциации полиморфного маркера C825T гена GNB3 с особенностями течения АГ у больных, проживающих в Ростовской области.

Материалы и методы

В основу работы положены результаты комплексного клинического, инструментально и лабораторного исследования 47 больных АГ, проживающих в Ростовской области. Среди обследованных мужчин было 21 (45%), женщин 26 (55%). Средний возраст больных составил 53,9 ± 1,7 лет; продолжительность АГ – 5 лет и более. Диагноз АГ, степень, стадия и группа сердечно-сосудистого риска установлена на основании рекомендаций ВНОК по диагностике и лечению артериальной гипертонии. Критерием исключения являлась вторичная АГ.

Комплекс стандартного обследования больных включал электрокардиографию, ультразвуковое исследование сердца и почек (прибор «Acuson-128X» фирмы Acuson Cоrporation», США), суточное мониторирование артериального давления (прибор «Bplab», Россия), определение основных биохимических показателей крови.

Определение полиморфизма АГ осуществлялось на амплификаторе ДТ 96 (производство ДНК-технологии, Россия) на основании полимеразно-цепной реакции в режиме реального времени. В результате исследования определяли 9 вариантов однонуклеидных полиморфизмов генов (SNPs) – ADD1 (G1378T), AGT (T704C), AGT (C521T), AGTR1 (A1166C), AGTR2 (G1675A), CYP11B2 (C344T), GNB (C825T), NOS3 (T786C), NOS3 (G894T). Из генов-кандидатов, обуславливающих АГ, наиболее изучены гены, кодирующие ренин-ангиотензин-альдо-стероновую систему (РААС): AGT (T704C), AGT (C521T), AGTR1 (A1166C), AGTR2 (G1675A), CYP11B2 (C344T), в связи с чем в качестве гена кандидата особый интерес для нас представил один из менее изученных, ген GNB3 кодирующий бета-3-субъединицу G-белка.

Все пациенты участвовали в исследовании добровольно и были полностью информированы о его дизайне и целях. Протокол исследования был одобрен локальным этическим комитетом РостГМУ.

Математическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием прикладных программ STATISTICA 10.

Результаты и обсуждение

Оценка семейного анамнеза больных АГ, включенных в исследование, с помощью стандартного опросника ВОЗ «Семейный анамнез» позволил установить, что подавляющее число пациентов (60%) имели отягощенный семейный анамнез по АГ.

При сравнении больных с отягощенным и неотяго-щенным семейным анамнезом оказалось, что больные с отягощенной по АГ наследственностью на момент обследования были сравнительно моложе (50 ± 2,25 лет и 59,8 ± 2,05 лет, соответственно, р = 0,003. Дебют гипертонии отмечался у данных больных в более молодом возрасте, чем у больных с неотягощенным анамнезом (40,8 ± 1,8 лет и 54,6 ± 2,3 лет, соответственно, р = 0,004). В группе больных с отягощенным семейным анамнезом была выше доля больных с АГ 3 степени тяжести (50% и 21%, соответственно, р = 0,037).

При анализе частоты встречаемости полиморфного маркера C8255T гена GNB3оказалось, что у больных АГ с отягощенным семейным анамнезом достоверно выше частота встречаемости данного гена (соответственно, 60,7% и 42,1%, p = 0,026 (рис. 1).

В табл. 1 представлена частота распределения аллелей и генотипов гена GNB3у больных с отягощенным и не-отягощенным семейным анамнезом.

При сравнении частот генотипов и аллелей изученного нами гена, оказалось, что носительство генотипа C/T полиморфного маркера C825T гена GNB3ассоциировано с отягощенным семейным анамнезом.

Нами также был проведен анализ частоты встречаемости гена GNB3 у больных с ранним началом и разной степенью тяжести АГ. Под «ранним» началом АГ понимали возникновение заболевания в возрасте менее 45 лет у

отягощенный анамнез не отягощенный анамнез

Табл. 1. Частота распределения аллелей и генотипов гена GNB3 у больных АГ с отягощенным и неотягощенным семейным анамнезом

Генотипы и аллели	Отягощенный анамнез (n = 28)	Не отягощенный анамнез (n = 19)	P	ОR	Cl (95%)
С/С	11 (39,3%)	11 (62,5%)	НД	–	–
C/T	15 (53,6%)	6 (31,6%)	0,029	2,55	1,25–5,46
T/T	2 (7,1%)	2 (10,5%)	НД	–	–
T	19 (25,7%)	10 (26,3%)	0,027	0,54	0,46–0,87
С	37 (50%)	28 (73,7%)	НД	–	–

■   ■ Ген GNB

I I Выборка

Рис. 1. Распределение частоты встречаемости гена GNB3 у больных АГ с отягощенным и неотягощенным семейным анамнезом мужчин и менее 55 лет у женщин. В обследованной группе было 28 больных с ранним началом АГ и 19 больных с поздним началом АГ (соответственно, 59,6% и 40,4%, р = 0,044).

Больные с ранним началом АГ имели достоверно большую длительность заболевания к моменту обследования (10,3 ± 1,76 лет и 5,2 ± 0,64 лет, р = 0,024), 32% больных этой группы имело АГ 3 степени тяжести. Эта группа больных чаще имела отягощенный семейный анамнез (75% и 21%, р = 0,013).

В табл. 2 представлена частота аллелей и генотипов гена GNB3, ассоциированных с ранним началом АГ.

При сравнении частот генотипов и аллелей изученного нами гена, оказалось, что раннее начало АГ ассоциировано с носительством генотипа C/T полиморфного маркера C825T гена GNB3 (рис. 2).

Для оценки ассоциации гена GNB3 с тяжестью АГ из числа обследованных мы сформировали 2 группы. В первую группу вошли больные АГ 1 и 2 ст., во вторую – больные АГ 3 ст. При сравнении групп выявлено, что среди больных АГ 3 ст. тяжести больше женщин (56% и 44%, p = 0,039). Длительность заболевания у них была больше (8,5 ± 1,2 лет и 7 ± 0,56 лет). По другим клиническим характеристикам группы достоверно не отличались.

В табл. 3 представлено сравнение частоты генотипов и аллелей гена GNB3 у больных АГ разной степени тяжести.

При анализе распределения частоты генотипов и аллелей оказалось, что у больных АГ3 степени тяжести достоверно меньше частота встречаемости аллели C полиморфного маркера C825T гена GNB3, т.е. носители аллели C имеют пониженный риск развития АГ 3 степени тяжести.

Учитывая то обстоятельство, что больные имели различные стадии АГ, нами была предпринята попытка установить ассоциацию полиморфного маркера C825T гена GNB3 со стадией заболевания.

Из числа обследованных I стадию заболевания имели 7 человек (15%), II стадию – 16 человек (34%), III стадию – 24 человек (51%). Больные с АГ различных

Табл. 2. Частота генотипов и аллелей гена GNB3 у больных АГ с ранним и поздним началом заболевания

Генотипы и аллели	Раннее начало n = 28	Позднее начало n = 19	P	ОR	Cl (95%)
C/C	14 (50%)	10 (52,6%)	НД	–	–
C/T	14 (50%)	6 (31,6%)	0,039	1,46–4,57	1,23–5,43
T/T	- (0%)	3 (15,8%)	НД	–	–
T	14 (25%)	12 (31,6%)	НД	–	–
С	42 (75%)	26 (68,4%)	НД	–	–

Рис. 2. Распределение частоты встречаемости генотипа C/T гена GNB3 у больных с ранним и поздним началом АГ

Табл. 3. Частота распределения генотипов и аллелей полиморфного маркера C825T гена GNB3 у больных АГ разной степени тяжести

Генотипы и аллели АГ 1–2 степени (n = 29) АГ 3 степени (n = 18) P ОR Cl (95%) C/C 13 (44,8%) 9 (52,9%) НД – – C/T 14 (48,3%) 7 (41,2%) 0,05 0,42 0,56–1,67 T/T 2 (6,9%) 2 (11,8%) НД – – T 18(31%) 11(31%) НД – – С 40(69%) 25(69%) 0,005 2,34 1,78–5,45 стадий не отличались по полу, возрасту, индексу массы тела, качеству жизни, однако больные с АГII и III стадий имели большую длительность заболевания на момент обследования (соответственно, 3,7 ± 1,3 лет, 6,7 ± 1,2 лет и 10,3 ± 1,8 лет, р = 0,04). Анализ частоты генотипов изученного нами гена со стадией АГ не выявил достоверных различий между группами.

Имеются многочисленные данные, свидетельствующие о том, что избыточная масса тела является фактором риска развития кардиальной патологии, поэтому можно предположить, что определение полиморфизма генов, ассоциированных с избыточной массой тела, требует особого внимания и представляется перспективным.

В обследованной группе больных 29 пациентов (61,7%) имели ИМТ ≥ 25 (повышенная масса тела), 18 пациентов (38,3%) – ИМТ < 25 (нормальная масса тела), р = 0,018. Больные с повышенной массой тела чаще характеризовались отягощенным семейным анамнезом (79% и 21%, р = 0,0067), длительность заболевания у них была больше, чем у больных с нормальной массой тела (10,2 ± 1,56 лет и 4,7 ± 0,64 лет, p = 0,01).

Частота распределения генотипов и аллелей гена GNB3 у больных АГс избыточной и нормальной массой тела представлена в табл. 4.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что носительство аллели T полиморфного маркера C825T гена GNB3 ассоциировано с повышенной массой тела.

В рамках данного исследования нами не было установлено достоверной связи полиморфизма гена GNB с развитием осложнений АГ и поражением органов мишеней.

Выводы

• 1.    Носительство генотипа C/T полиморфного маркера C/T гена GNB3 у больных АГ ассоциировано с отягощенным семейным анамнезом.

• 2.    У больных АГ с отягощенным семейным анамнезом заболевание начинается в более молодом возрасте и характеризуется более высоким уровнем АД. Раннее начало АГ ассоциировано с носительством генотипа C/T полиморфного маркера C825T гена GNB.

• 3.    У больных с АГ 3 степени тяжести оказалась достоверно меньшей частота аллели С полиморфного маркера C825T гена GNB, что может свидетельствовать о пониженном риске формирования АГ высокой степени тяжести у носителей аллели C.

• 4.    Носительство аллели T полиморфного маркера C825T гена GNB3 ассоциировано с повышенной массой тела (ИМТ ≥ 25). Гомозиготы по T аллели (генотип T) более предрасположены к повышению массы тела, чем носители аллели С, следовательно, риск развития ожирения у людей с генотипом T/T выше по сравнению с C/C генотипом.

Табл. 4. Частота распределения генотипов и аллелей гена GNB3 у больных АГ с избыточной и нормальной массой тела

Генотипы и аллели	ИМТ ≥ 25	ИМТ < 25	P	ОR	Cl (95%)
C/C	13 (44,8%)	8 (44,4%)	НД	–	–
C/T	13 (44,8%)	9 (50%)	НД	–	–
T/T	3 (10,3%)	1 (5,6%)	НД	–	–
T	19 (32,8%)	11 (30,6%)	0,04	1,08	0,98–2,25
С	39 (67,2%)	25 (69,4%)	0,008	0,78	0,79–1,87