Острая токсичность каппа-опиоидного агониста - соединения Ру-1205 при пероральном введении

Лекарственные препараты, обладающие опиоидной активностью, имеют ряд побочных эффектов в виде дыхательной депрессии, об-стипации, а также развития зависимости. Исходя из этого, в процессе изучения нового анальгетика обязательно возникает необходимость оценки острой токсичности с определением общей и специфической симптоматики отравления. В результате предварительных исследований in vitro и in vivo было выявлено соединение РУ-1205 с высокой каппа-опиоидной анальгетической активностью [1, 3, 6].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучить острую токсичность соединения, проявляющего каппа-опиоидную анальгетическую активность под лабораторным шифром РУ-1205 при интрагастральном введении.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты по изучению токсических эффектов производного имидазо[1,2-а] бензоимидазола (соединения РУ-1205), синтезированного в НИИ ФОХ ЮФУ (г. Ростов-на-Дону, Россия), проведены на 100 белых беспородных мышах (самках и самцах) и 100 белых беспородных крысах (самках и самцах) при интрага-стральном введении в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (М., 2005) [4, 5]. Мыши получены из питомника НИПЧИ (г. Волгоград), крысы – из ФГУП «НИИ ГТП» ФМБА России (г. Волгоград). Животные каждого вида были рандомизировано разделены на 20 групп, включавших в себя по 10 животных (самки и самцы в соотношении 50/50). Изучаемое вещество опытным группам вводилось однократно интрагастрально. Контрольным группам животных вводили эквивалентное количество растворителя, используемого для приготовления раствора – дистиллированной воды в рекомендуемом для внутрижелудочного введения объеме [2]. Острая токсичность соединения исследована в дозах от 10 до 5000 мг/кг. После однократного введения вещества животных помещали в индивидуальные прозрачные боксы с последующим непрерывным наблюдением в течение 10 часов. Через сутки животных перемещали в клетки по группам, отдельно по по- лу. Ежедневно проводилась оценка состояния животных 2-х раза в день в течение 2 недель.

Оценка общего состояния и поведения животных проводилась по следующим показателям: характер двигательной активности, координация движений, наличие судорог и их характер, наличие тремора, рефлекторных реакций на внешние раздражители (звуковые и тактильные), состояние шерстного покрова и рефлексам положения согласно принятой шкале при визуальном наблюдении.

При расчете ЛД 16, ЛД 50 , ЛД 84 использовали классический метод Личфилда–Вилкоксона с использованием регрессионной статистики (Microsoft Excel).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение острой токсичности соединения РУ-1205 на мышах Установлено, что итрага-стральное введение соединения РУ-1205 в дозах от 10 до 300 мг/кг при не приводило к гибели самок и самцов. Состояние животных соответствовало норме, изменений в поведении не зарегистрировано, характер двигательной активности и координация движений сохранялись. При увеличении дозы до 500–1000 мг/кг в опытных группах самцов и самок через 20 минут после введения вещества у 60 % животных отмечали заторможенное состояние и отсутствие реакции на внешние раздражители. Гибель животных после введения вещества в дозах

1 000 и 2 000 мг/кг в группе самцов составляла 40 %, а в группе самок 20 и 40 % соответственно. При увеличении доз до 3 000 мг/кг отмечали гибель 40–60 % животных во всех опытных группах. Токсическое действие вещества проявлялось в заторможенности мышей и отсутствии реакции на внешние раздражители. Частота сердечных сокращений и дыхания соответствовали норме. При введении вещества в дозе 5 000 мг/кг отмечали 100%-ю гибель мышей во всех опытных группах в течение первых часов после введения.

При наблюдении за животными в последующие дни после введения вещества изменений в поведении не отмечено. Мыши активно передвигались в клетке, реагировали на внешние раздражители (звуковые и тактильные), состояние шерстного покрова соответствовало норме. Гибели в опытных группах мышей самок не отмечали. У самцов после введения вещества в дозе 300–500 мг/кг отмечали гибель 20 % животных на 9–10 сутки после введения.

Ни в одной из опытных групп не наблюдалось судорог, тремора, птоза, прыжков, встряхиваний, стука зубами, синдрома Штрауба характеризующих активацию μ- и δ-опиоидных рецепторов.

Величина острой токсичности ЛД 16 , ЛД 50 и ЛД 84 вещества РУ-1205 после однократного внутрижелудочного введения мышам с указанием стандартной ошибки представлены в табл. 1.

Таблица 1

Пол                 1	ЛД 16                1	ЛД 50              1	ЛД 84
Через сутки после введения
Самцы	821,40 1141,96÷591,08	1898,96 2638,89 ÷1366,50	4390,13 6100,75÷3159,16
Самки	572,34 852,98÷384,03	1565,05 2332,48÷1050,13	4279,62 6378,12÷2874,56
Через 14 суток после введения
Самцы	351,24 636,07÷193,96	1315,66 2382,54÷726,52	4928,05 8924,26÷2721,31
Самки	310,00 852,98÷384,03	1180,99 1857,34÷750,93	4487,00 6378,12÷2874,56

Показатели острой токсичности вещества РУ-1205 после однократного внутрижелудочного введения мышам (мг/кг)

Различия в величинах ЛД 50 через 1 и 14 суток введения может свидетельствовать о токсико-кинетических влияниях метаболитов соединения РУ-1205.

На рисунках 1–2 представлена зависимость количества погибших животных (в %) от логарифма дозы вещества РУ-1205 после однократного внутрижелудочного введения вещества.

Из рисунков видно, что линия тренда аппроксимации и сглаживания кривой острой токсичности соединения РУ-1205 при интрага- стральном введении имеет ид линейной аппроксимации.

Изучение острой токсичности вещества РУ-1205 при внутрижелудочном введении крысам. Гибель животных была зафиксирована в опытных группах, получавших изучаемое соединение в дозе 500 мг/кг и выше. При этом в опытных группах меньших доз (10–300 мг/кг) двигательная активность и координация движений не отличались от группы контроля, отсутствовали изменения в поведении. Через 20 ми- нут после введения соединения РУ-1205 у 60 % животных в опытных группах (500–2000 мг/кг) отмечали заторможенное состояние и отсутствие реакции на внешние раздражители. Гибель 40–60 % животных бала отмечена в группах крыс самцов (2000–3000 мг/кг) и самок (1000–3000 мг/кг). Общетоксическое действие соединения РУ-1205 характеризовалось заторможенностью животных и отсутствием реакции на звуковые и тактильные раздражители. Через 15 минут после введения вещества в дозе 5 000 мг/кг, у 20 % крыс было отмечено боковое положение с возможностью самостоятельно переворачиваться при внешнем раздражении. Гибель 100 % крыс, как самок, так и самцов, наступала в течение первых часов после введения вещества.

Рис. 1 Гибель мышей самцов через 14 суток после однократного введения вещества РУ-1205 в возрастающих дозах. R2 = 0,936: по оси ординат % погибших животных, по оси абсцисс – lg дозы в мг/кг

Рис. 2 Гибель мышей самок через 14 суток после однократного введения вещества РУ-1205 в возрастающих дозах. R2= 0,910: по оси ординат % погибших животных, по оси абсцисс – lg дозы в мг/кг

При последующем наблюдении в течение 14 дней в группе крыс самок, получавших вещество в дозе 2 000 мг/кг, отмечена гибель одной особи.

Синдром Штрауба и прыжковая активность не были отмечены ни в одной из опытных групп. Респираторная депрессия не развивалась даже в максимально-изучаемой дозе соединения РУ-1205. Расчет показателей острой токсичности для опытных групп крыс проведен аналогичным вышеуказанным способом. Линия тренда аппроксимации и сглаживания кривой острой токсичности соединения РУ-1205 при интрага-стральном введении крысам имела вид линейной аппроксимации.

Величина острой токсичности ЛД 16 , ЛД 50 и ЛД 84 вещества РУ-1205 после однократного внут-рижелудочного введения крысам с указанием стандартной ошибки представлены в табл. 2

Таблица 2

Показатели острой токсичности вещества РУ-1205 после однократного внутрижелудочного введения крысам (мг/кг)

Пол	ЛД 16	ЛД 50	ЛД 84
Через сутки после введения
Самцы	474,78 917,42÷245,70	1534,25 2964,63÷794,00	4957,91 9580,15÷2565,81
Самки	572,34 852,98÷384,03	1565,05 2332,48÷1050,13	4279,62 6378,12÷2871,56
Через 14 суток после введения
Самцы	412,14 826,58÷205,50	1426,99 2861,93÷711,51	4940,78 9909,05÷2463,53
Самки	487,84 203,55÷169,17	1180,99 1857,34÷750,93	4605,36 1921,60÷11037,35

Показатели острой токсичности на 1-е и 14-е сутки после однократного внутрижелудочного введения существенно не отличались.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе исследования была изучена острая токсичность нового каппа-опиоидного агониста – соединения РУ-1205 при интрагастраль-ном введении. Методом регрессионной статистики по тестам с альтернативной формой реакции рассчитаны показатели ЛД 16 , ЛД 50 и ЛД 84 .

Исходя из величин острой токсичности при энтеральном введении соединения РУ-1205, согласно классификации химических веществ по параметрам острой токсичности [6], согласно классификации, данной И. В. Саноцким [7], соединение РУ-1205 может быть отнесено к классу малотоксичных веществ. В соответствии с ГОСТом 12.1.007–76 – к умеренно токсичным. Токсическое действие соединения РУ-1205 проявлялось в угнетении ЦНС: отсутствии ответа на звуковые и тактильные раздражители. При этом специфическая симптоматика интоксикации традиционными опиоидами, в виде судорог, тремора, птоза, прыжков, встряхиваний, стука зубами, синдрома Штрауба при интрага-стральном введении у данного соединения не обнаружена.