Перспективы использования иммобилизированных ферментов в диагностике кардиоваскулярной патологии при системной склеродермии

Учитывая, что системная склеродермия (ССД) чаще поражает женщин молодого и среднего возраста, изучение патогенетических механизмов болезни, разработка новых диагностических тестов, объективно отражающих активность патологического процесса и позволяющих провести дифференциальную диагностику в группе диффузных заболеваний соединительной ткани, является актуальной задачей современной ревматологии. Цель: Выявить значение аутоантител к супероксиддисмута-зе (СОД), глутатионпероксидазе (ГП), глутатионредуктазе (ГР), аденозиндезаминазе (АДА), гуаниндезаминазе (ГДА), ксантиок-сидазе (КО) в сыворотке крови больных ССД с кардиоваскулярными поражениями.

Материал и методы:

В исследование были включены 83 больных, в том числе 81(97,6%) – женщина и 2(2,4%) мужчины. Средний возраст больных – 50,3±11,9, продолжительность заболевания 8,3±7,1 лет. У 56 (67,5%) больных определялась лимитированная форма болезни, у 27 (32,5%) – диффузная, а в 11 случаях отмечена перекрестная форма (overlap-синдром). У 49 (59%) больных диагностировано подострое течение процесса, у 28 (33,7%) – хроническое, а у 6 (7,2%) – острое. I стадия болезни выявлена у 11 (13,3%) человек, II – у 63 (75,9%), III – у 9 (10,8%). I степень активности диагностирована у 23 (27,7%) человек, II – у 46 (55,4%), III – у 14 (16,9%). У всех больных определялся модифицированный кожный счет, оцениваемый в баллах от 0 до 3 в 17 областях тела (Насонов Е.Л., 2010). Среднее значение кожного счета составило 12,37±7,18. В группе больных ССД у 56 (67,5%) человек отмечалось поражение сердца. При анализе кардиоваскулярного риска в группе больных по шкале SCORE (Беленков Ю.Н., 2007) получено: средний риск - 5% . Основными симптомами поражения сердца в группе больных ССД были: кардиалгии - выявлены у 45 больных (80,4%); перебои – у 35 (62,5%); артериальная гипертензия у 29 (51,8%); отёки нижних конечностей – у 27 (48,2%) и одышка при нагрузке у 19 (33,9%). При проведении ЭКГ исследования у 19 (33,9%) больных выявлены желудочковые и предсердные экстрасистолы, нарушение АВ-проводимости I, II степени, блокады правой, левой ножек пучка Гисса, а также явления ишемии миокарда. В то же время при холтер-мониторировании ЭКГ подобные изменения обнаруживались у 30 человек (53,6%). При проведении Эхо-КГ у 25 (44,6%) пациентов выявлялась диастолическая дисфункция миокарда, у 17 (30,4%) человек – снижение фракции выброса. Из общепринятых лабораторных показателей обращают на себя внимание высокие цифры холестерина у 21 больного (37,5%). В качестве антигенов использовались коммерческие препараты исследуемых ферментов производства фирмы «Sigma» (США): СОД из эритроцитов человека (Cat. № S 9636); ГР (Cat. № G 3664); ГП (Cat. № G 4013); АДА (Cat. № А 5043); ГДА из печени кролика (Cat. № G 5752); КО микробного происхождения (Cat.№ Х 2252). Для получения иммобилизированных форм изучаемых ферментов подбирали растворы с оптимальной концентрацией: для СОД – 1,4 мг/мл, для ГР – 1,6 мг/мл, для ГП –1,4 мг/мл по белку, для АДА – 100 мкг/мл, для ГДА – 20 мкг/мл, для КО – 50 мкг/мл. Для получения полиакриламидных гранул использовали метод эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в модификации Гонтаря И.П., (патент № 2356585, 2007). Полученные гранулы имели правильную сферическую форму с размером частиц 10 - 100 мкм. Учитывая небольшую относительную молекулярную массу СОД (30000 - 32000 а.е.м.), иммобилизацию фермента проводили путем пришивки его молекулы глютаровым альдегидом к инертной полиакриламидной грануле, содержащей магнитный материал по методу, описанному A.K.Johansson a. al.(1974). Было определено, что максимальная сорбция СОД на гранулы, активированные глютаровым альдегидом, составила 980 мкг белка на 1 мл (70 %). Статистический анализ экспериментальных данных выполнялся с помощью программных пакетов «STATISTICA 6.0 FOR WINDOWS» и SPSS (SPSS for Windows, Release 12.0).

Результаты:

При проведении анализа статистически значимые корреляции выявлены для антител к ГР (Spearman R=0,24, p=0,03), АДА

СБОРНИК ТЕЗИСОВ V ЮБИЛЕЙНОГО ЕВРАЗИЙСКОГО КОНГРЕССА КАРДИОЛОГОВ BOOK OF ABSTRACTS OF THE V EURASIAN CONGRESS OF CARDIOLOGISTS

(Spearman R=-0,22, p=0,05). При сравнении уровней антител в группах больных с поражением сердца и без него - статистически значимые отличия обнаружены для Ат к СОД (M-W U test=518,5, p=0,02), активности СОД (M-W U test=540, p=0,04) и Ат к ГР (M-W U test=539, p=0,03).

Заключение:

У пациентов с поражением сердца достоверно чаще и в более высоком значении выявляются Ат к СОД и ГР. Наличие высоких значений антител к ферментам предполагает более выраженные висцеральные поражения у больных ССД.

^ 127 I