Перспективы комплексного использования щавеля конского

В данной методике используется фотоэлектро-колометрия, предусматривающая измерения оптической плотности при аналитической длине волны около 510 нм, а расчет суммы содержания производных антрацена осуществляется на отсутствующий в сырье франгулин, причем с использованием построения калибровочного графика раствора кобальта хлорида.

Цель работы : сравнительное изучение различных органов щавеля конского в плане обоснования целесообразности использования в медицинской практике.

Материалы и методы. Объектом для изучения служили листья, стебли, плоды и корни щавеля конского, собранные на территории Самарской области (Ботанический сад, фармакопейный участок СамГМУ, 2009 г., 2010 г., 2011 г.). Для проведения фитохимического анализа корней использовали метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ». На предварительном этапе было проведено исследование по определению оптимальной хроматографической системы для разделения анализируемых веществ. Были апробированы несколько систем растворителей: хло-роформ-95% этиловый спирт-вода (26:16:3); н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода 4:1:2 или 4:1:5 (верхняя фаза). В качестве оптимальной системы растворителей для хроматографического разделения антраценпроизводных нами рекомендована смесь н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2; 4:1:5, верхняя фаза). Детекцию веществ осуществляли в видимой области спектра и в УФ-свете (254 и 366 нм), а также проявлением раствором диазобензолсульфокислоты в насыщенном растворе карбоната натрия (рис. 1). В ходе исследования изучены УФ-спектры водно-спиртовых извлечений из сырья. Регистрацию спектров проводили с помощью спектрофотометра Specord 40 (Analytik Jena).

Рис. 1. Хроматографический профиль водноспиртовых извлечений органов щавеля конского в условиях ТСХ: 1 – плоды;

2 – листья; 3 – стебли; 4 – корни

Были определены оптимальные условия эктракции антраценпроизводных в органах щавеля конского: экстрагент – 70% этиловый спирт; соотношение сырье-экстрагент – 1:50; время экстракции – извлечение на кипящей водяной бане в течение 90 мин (табл. 1). С использованием ТСХ в листьях щавеля конского обнаружено пятно, имеющее розовую флуоресценцию с величиной R f около 0,7, которое по предварительной оценке может относится к антраценпроизводным. Также на хроматограмме обнаруживается вещество с величиной R f около 0,3, флавоноидная природа которого подтверждается характером флуоресценции. В корнях щавеля конского обнаружены доминирующие пятна веществ с розовой флуоресценцией величиной R f около 0,8 и 0,6, которые относятся к веществам антраценпроизводной природы и идентифицированы нами как эмодин и 8-O-β-D-глюкозида эмодина соответственно.

Исследование УФ-спектров показало, что максимум поглощения щелочно-аммиач-ного раствора водно-спиртового извлечения из корней щавеля конского находиться при длине волны 520 + 2 нм (рис. 2). В длинноволновой области спектра щелочно-аммиачного раствора 8-О-β-D-глюкозида эмодина также наблюдается четкий максимум поглощения при

520±2 нм (рис. 3). Следовательно, за аналитическую длину волны можно принять значение 520 нм, а стандартным образцом может служить доминирующий антрагликозид – 8-О-β-D-глюкозида эмодина. В случае отсутствия стандарта в расчетной формуле может быть использовано значение удельного показателя 1% поглощения (E1см ) – 160.

Рис. 2. Электронные спектры водно-спиртового извлечения из корней щавеля конского: 1 – исходный раствор; 2 – в присутствии щелочно-аммиачного раствора

Рис. 3. Электронные спектры щелочно-аммиачных растворов водно-спиртового извлечения из корней щавеля конского (1) и 8-О-β-D-глюкозида эмодина (2)

Сравнительное исследование электронных спектров водно-спиртовых извлечений из различных органов щавеля конского показало, что характер кривой поглощения корней в наибольшей степени соответствует кривой поглощения антраценпроизводных, в частности, 8-О-β-D-глюкозида эмодина (рис. 4), что соответствует результатам количественной оценки (табл. 1). Достаточно высокое содержание суммы антраценпроизводных определено и в плодах данного растения (табл. 1).

Рис. 4 . Электронные спектры щелочно-аммиачных растворов водно-спиртовых извлечений из различных органов щавеля конского: 1 – стебли; 2 – листья; 3 – плоды: 4 – корни

Количественная оценка содержания суммы флавоноидов, проведенная по методике, описанной в литературе [8], показала, что наибольшее содержание данных действующих веществ имеет место в случае листьев (табл. 1), тогда как в корнях данных соединения не обнаружены. Интересно, что наибольший вклад в кривой поглощения раствора водно-спиртового извлечения из листьев щавеля конского вносят флавоноидные вещества (рис. 5).

Рис. 5. Электронные спектры водно-спиртовых извлечений из различных органов щавеля конского: 1 – стебли; 2 – листья; 3 – плоды: 4 – корни

Что кается плодов щавеля конского, то для данного сырья характерен баланс относительно высокого содержания флавоноидов и антраценпроизводных (табл. 1).

Методика количественного определения сумм антраценпроизводных в органах щавеля конского. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная полоса»). Испытуемый раствор А готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором, приготовленным по фармакопейной методике [1]. Испытуемый раствор А помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 520 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.

Таблица 1. Результаты сравнительного количественного определения содержания суммы антраценпроизводных и флавоноидов в органах щавеля конского

Органы растения	Содержание суммы антра-ценпроизводных в пересчете на8-O-β-D-глюкозид эмодин, %	Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, %
листья	0,40 + 0,01	1,34 + 0,03
плоды	0,91 + 0,02	0,66 + 0,02
стебли	0,32 + 0,01	0,13 + 0,01
корни	4,16 + 0,05	не обнаружены

Приготовление раствора 8-O-β-D-глю-козида эмодина стандартного образца. Около 0,02 г (точная навеска) 8-O-β-D-глюкозида эмодина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 96% этилового спирта. Затем содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 96 % этиловым спиртом до метки (раствор А 8-O-β-D-глюкозида эмодина). 1 мл раствора А 8-O-β-D-глюкозида эмодина помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор Б). Раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 520 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную. Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на 8-O-β-D-глюкозида эмодина и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

= D ∗ m ₀ ∗ 50 ∗ 1 ∗ 50 ∗ 100 ∗ 100

D0 ∗ m ∗ 50 ∗ 1 ∗ 25 ∗ (100 - W) , где D – оптическая плотность испытуемого раствора; Do – оптическая плотность раствора ГСО 8-O-β-D-глюкозида эмодина; m – масса сырья, г; mо – масса ГСО 8-O-β -D-глюкозида эмодина, г; W – потеря в массе при высушивании в процентах.

В случае отсутствия стандартного образца 8-O-β-D-глюкозида эмодина целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения –160.

_X = D ∗ 50 ∗ 50 ∗ 100

m ∗ 160 ∗ (100 - W )

где D – оптическая плотность испытуемого раствора; m – масса сырья, г; mо – масса ГСО 8- β -D-глюкозида эмодина, г; 160 – удельный 1% показатель поглощения (E 1см ) ГСО 8-O-β-D-глюкозида эмодина при 520 нм; W – потеря в массе при высушивании в процентах.

Выводы:

• 1.    Проведено сравнительное фитохимиче-ское исследование корней, листьев, плодов и стеблей щавеля конского с использованием ТСХ и спектрофотометрии.

• 2.    Максимальное содержание суммы антра-ценпроизводных (4,16%) отмечены в корнях

• 3.    С точки зрения содержания суммы флавоноидов (1,34%) наиболее перспективным сырьем являются листья щавеля конского.

• 4.    Разработаны новые подходы к стандартизации корней щавеля конского, заключающиеся в определении суммы антраценпроизводных методом спектрофотометрии в пересчете на 8-O-β-D-глюкозида эмодина при аналитической длине волны 520 нм.

щавеля конского, хотя достаточно высокое содержание данных веществ (0,91%) обнаружено и в плодах данного растения.