Показатели пролиферации гепатоцитов после механической травмы печени 18-дневных крысят в условиях применения биологически активных веществ

Сообщения о положительных результатах применения биогенных веществ в животноводстве и ветеринарии (1,4), а также небольшой опыт применения цеолитсодержащих препаратов для лечения некоторых заболеваний человека (3,4) позволяет считать целесообразным изучение влияния биогенных веществ на заживление механических ран печени. В связи с этим, целью настоящего исследования явилось изучение влияния биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар» на пролиферативную активность гепатоцитов в раннем онтогенезе у крыс при заживлении механической травмы печени.

Материал и методы исследования. В качестве экспериментальных животных были взяты 126 крысят 18-дневного возраста массой 19 – 26 грамм, которым под эфирно- масочным наркозом через кожу стальной иглой с ограничителем осуществляли прокол печени. Сразу после операции в основной рацион крысам добавляли биологически активные вещества «Трепел» из расчета 1,25 мг/кг. и «Сувар» — 50 мг/кг;

Контролем были 92 крысят аналогичного возраста, которым после прокола печени питание осуществляли основным рационом, без добавления биологически активных веществ; им в течении 7 дней после операции в воду добавляли раствор гентамицина из расчёта 1,4 мг/ кг веса животных.

Питание животных осуществляли в режиме свободного доступа к пище и воде.

После операции животные обоих групп чувствовали себя хорошо, были активными, хорошо принимали пищу

Животных выводили из эксперимента эфиром в сроки от 1 до 30 суток. Для подтверждения травмы печени, а также для изучения восстановительных и регенераторных процессов после извлечения печени ее целиком фиксировали в 10 % нейтральном формалине, заключали в парафин; полученные гистотопографические серийные срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по ван Гизону и железным гематоксилином по Гейденгайну.

Для оценки пролиферативных процессов в печени подсчитывали митозы и двуядерные ге-паптоциты на 7000 клеток при увеличении х900. В тех же полях зрения считали клетки с дистрофическими и некробиотическими изменениями.

ДНК в ядрах гепатоцитов выявляли реакцией Фёльгена (гидролиз в 5н. HCL при 20 градусах в течение 20 минут, с дальнейшей окраской реактивном Шиффа — 1 ч при комнатной температуре). Количество ДНК в ядрах определяли в световом микроскопе Биолам-70 с помощью фотометрирования с применением микронасадки ФМЭЛ-1 и фотометра ФЭУ-79А в проходящем свете с запирающим светофильтром с максимумом светопропускания на длине волны 570 нм с подаваемым напряжением 900В. Полученные результаты подвергали обратному десятичному логарифмированию по формуле А=Lg Ui/U0, где A – оптическая плотность, Ui – показания вольтметра на ядре, U0 — показания вольтметра на неокрашенных участках препарата. Диплоидным эталоном служили лимфоциты периферической крови и малые лимфоциты лимфатических узлов

Статистическая обработка цифровых данных проводилась по программе «Статистика» с привлечением пакета программ Microsoft Office (Word и Excel) Pentium 166 MMX. Для определения различия статистических показателей между средними величинами использовали критерий Стьюдента (t).

Результаты исследований и их обсуждение. В первые сутки после травмы в печени контрольных животных обнаруживается щелевидный дефект печеночной ткани, заполненный эритроцитами и некротизированными печеночными клетками. В сохранившейся ткани органа отмечаются дистрофические, а на границе с участком повреждения, и некробиотические изменения гепатоцитов. Со 2-х суток вокруг очага травмы появляется большое количество молодых мезенхимальных клеток. На 3, и особенно на 5 и 7 сутки после операции происходит постепенное освобождение очага травмы от эритроцитов и погибшей ткани; молодые мезенхимальные элементы к 7 суткам практически полностью замещаются элементами типа фибробластов. В периферических отделах поврежденного участка на 7-е

Таблица 1

Количество митозов гепатоцитов у 18-дневных крысят после механической травмы печени.

Время после операции (сутки)	Количество митозов гепатоцитов
	Опытные животные М ± м	Контрольные животные М ± м
1	2,6±1,2	1,1±0,4
3	6,5±2,4*	3,6±1,4
5	7,2±3,8*	4,2±1,9
7	7,3±4,7*	2,1±0,8
9	6,4±2,9*	1,8±0,4
11	5,6±2,8	-
15	3,6±1,8	-
20	3,6±1,8	-

Примечание: * р<0,001

роды. Немногочисленные фибробласты начинают фиксироваться здесь на 5 сутки после операции. Начиная с 3 суток зона повреждения начинает постепенно освобождаться от некротизированной ткани и эритроцитов; в дальнейшем в на 9 и 11 сутки отмечается умеренное образование волокнистых структур и через 15-20 суток и позднее на месте погибшей ткани фиксируется небольшой участок зрелой волокнистой соединительной ткани.

После нанесения печени травмы в сохранившейся ткани возникало интенсивное митотическое деление гепатоцитов (таблица № 1).

Из таблицы можно видеть, что у опытных животных интенсивность митотического деления выражена в большей степени, чем у контрольных крысят; кроме этого, если в контроле митозы не обнаруживаются уже на 7 сутки, то в группе животных, получавших биологически активные препараты митозы прослеживаются до 20 суток эксперимента включительно.

Восстановительные процессы в печени также сопровождаются увеличением количества и двуядерных гепатоцитов (таблица 2).

Таким образом, увеличение числа двуядерных гепатоцитов и у опытных, и у контрольных сутки отмечаются нежные волокнистые структуры; в дальнейшем количество волокнистых структур в очаге повреждения нарастает и 11 сутки характеризуются формированием в очаге повреждения соединительной ткани, которая прослеживается здесь до 30 суток.

В группе опытных животных на 2—3 сутки вокруг участка повреждения отмечается появление небольшого количества молодых клеток мезенхимной при-

Таблица 2

Количество двуядерных гепатоцитов у плодов и новорожденных крысят после механической травмы.

Время после операции (сутки)	Количество двуядерных гепатоцитов
	Опытные животные М ± м	Контрольные животные М ± м
1	14,7±2,6	15,0±1,7
3	12,8±4,5	14,4±2,1
5	16,4±3,5	15,2±2,6
7	38,2±6,4*	20,3±4,6
9	39,1±8,1*	25,4±5,7
11	36,5±8,2*	27,2±5,4
15	39,1±9,1*	26,0±3,7
20	36,4±5,5*	21,8±2,7
30	37,3±6,5*	27,1±3,5

Примечание: * р<0,001

Таблица № 3

Плоидность ядер гепатоцитов 18-дневных крысят в опыте и контроле (в %)

Сутки после операции	Диплоидные ядра		Тетраплоид-ные ядра		Октаплоидные ядра		16п-плоидные ядра
	Опыт	Контроль	Опыт	Контроль	Опыт	Контроль	Опыт	Контроль
1	69,7	65,4	30,2	34,6	0,1	-	-	-
3	47,3	40,3	49,1	58,2	2,6	1,5	1,0	1,0
5	29,1	33,3	65,4	63,6	3,1	2,5	2,4	0,6
7	35,3	34,9	64,2	62,1	2,1	1,9	1,4	1,1
9	28,1	34,5	70,2	61,0	1,3	3,0	1,6	1,5
11	34,6	46,2	62,2	51,3	3,1	2,1	1,1	1,4
15	49,1	58,3	50,2	40,2	0,7	1,5	-	-
20	60,2	63,3	39,2	36,4	0,6	-	-	-
30	61,9	59,3	38,1	40,7	-	-	-	-

на большем протяжении оказывается замещённым новообразованными гепатоцитами; следствием этого является то, что очаг развившейся здесь соединительной ткани по размерам значительно меньше очага соединительной ткани, образовавшегося на месте повреждения печени у контрольных животных.