Получение и комплексная оценка диагностических сывороток к антигену Yersinia pseudotuberculosis, выделенному с применением диметилсульфоксида

Цель исследования - получение гипериммунных сывороток крови морской свинки и кролика с использованием антигена, выделенного при помощи диметилсульфоксида из клеток Yersinia pseudotuberculosis, а также изучение возможности комплексного использования полученных специфических антител в непрямом иммуноферментном анализе (ИФА) для обнаружения иерсиний. Для получения гипериммунных сывороток использовали смесь антигена и адъюванта в соотношении 1:1. В составе антигена преобладали белки. Его вводили животным в количестве 0,6 мг на морскую свинку и 2 мг на кролика. В качестве адъюванта применяли 1 %-й полиазолидинаммоний, модифицированный гидрат-ионами йода. Иммунизировали животных подкожно пятикратно с интервалом в 2 недели. Полученные сыворотки проявили в ИФА родовую специфичность по отношению к Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis (1:6400-1:25600). Взаимодействие их с Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Proteus vulgaris, Enterobacter aerogenes, Brucella abortus было незначительным (1:100-1:400). Комплексное использование специфичных гипериммунных сывороток крови от двух видов животных позволило провести непрямой ИФА для обнаружения антигена. Для этого адсорбировали антитела морской свинки на поверхности лунок микропланшета. Затем с помощью кроличьей сыворотки осуществили индикацию антигена, прикрепившегося к адсорбированным на микропланшете антителам морской свинки. Антитела кролика выявляли пероксидазным антивидовым конъюгатом. Комплексное использование экспериментальных сывороток позволило обнаружить энтеропатогенные иерсинии в среде накопления даже в условиях значительного фекального загрязнения исследуемого материала уже на 3-й день «холодового обогащения» при условии внесении в 1 мл среды накопления не менее 50 иерсиниозных клеток.