Получение нативного препарата цитоплазматического антигена Staph. Aureus и испытание его лечебной эффективности при субклиническом мастите лактирующих коров

Насущной проблемой в борьбе со стафилококко выми инфекциями является создание препаратов , спо собных противостоять как токсическому , так и мик робному фактору патогенности стафилококков . Так в настоящее время получены препараты ( стафилококко вый анатоксин , ферменты стафилококка ), которые ис пытаны в качестве лечебных средств при маститах ко ров кокковой этиологии . [1, 2, 4, 5]. Однако токсины и ферменты стафилококков , как известно , не являются единственными факторами патогенности данного ин фекционного агента . Поэтому исследователи интен сивно изучают антигенные свойства бактериальных структур возбудителя с целью выяснения их участия в стимуляции и регуляции специфической резистентно сти к стафилококковой инфекции и возможного их использования для изготовления как лечебных , так и иммунопрепаратов .

Михайлова Н . А . и др .,(1984) Прохоров В . Я ., (1990) сообщили , что цитоплазматический антиген ( ЦПА ) золотистого стафилококка , как нативный , так и адсор бированный , являются слабореактогенными , иммуно генными и клинически эффективными препаратами , и могут быть использованы в медицинской практике в качестве самостоятельных средств , а также при конст руировании комплексных иммунопрепаратов . При этом Прохоров В . Я ., (1990) установил , что у больных с посттравматическими повреждениями профилактиче ское применение адсорбированного ЦПА способство вало заживлению ран первичным натяжением , а имму низация нативным ЦПА быстрее купировала нагнои - тельный процесс и стимулировала эпителизацию .

Учитывая вышесказанное , провели испытание двух способов получения ЦПА золотистого стафило кокка , выделенного из секрета вымени коров с субкли ническим состоянием молочной железы и идентифи цированного как патоген мастита .

Материалы и методы исследования

Первый метод получения ЦПА Staph. aureus был аналогичен методу , предложенному Прохоровым В . Я ., (1990).

Второй метод получения препарата был предложен нами и отличался от первого тем , что механическую дезинтеграцию микробных тел заменили химической , основываясь на том , что , как указывает Самуйленко А . Я . и др ., (2000), химические методы дезинтеграции микробных тел являются более экономичными , так как не используют труднодоступные приборы – дезинте граторы .

В качестве химического дезинтегратора использо вали Ципролет , который добавляли к полученной мик робной суспензии и вели термостатирование при 37° С в течение шести суток .

Результаты и их обсуждение

Стерильные серии нативного ЦПА , полученные первым и вторым методами содержали , соответствен но , 0,05 г / мл и 0,04 г / мл белка ( при определении мето дом Кьельдаля ).

Таким образом , химическая дезинтеграция мик робных тел Staph. aureus Ципролетом оказалась менее эффективной для получения нативного ЦПА .

Полученные препараты ( как первым , так и вторым методом ) испытали на реактогенность на белых мышах массой 14-16 г . Для этого пяти животным подкожно в объеме 0,5 мл вводили вышеуказанные препараты , затем за ними наблюдали в течение 10 дней . Контроль ным мышам инъецировали подкожно в том же объеме стерильный физиологический раствор .

Было установлено , что за весь период наблюдения как опытные , так и контрольные мыши оставались здоро выми , а на месте введения препаратов реакции не было . Следовательно , препараты оказались ареактогенны .

Приняв во внимание большее количество белка в препарате ЦПА , полученного первым методом , испы тали его терапевтическую эффективность при скрытом мастите лактирующих коров .

Были сформированы две группы животных по 5 животных в каждой ( опытная и контрольная ) из лак - тирующих коров с субклиническим маститом одной четверти вымени . Контрольных животных лечили мас - тисаном А ( по инструкции к препарату ), а опытных – предложенным нами методом . А именно , после полно го сдаивания пораженной скрытым маститом четверти вымени в нее вводили 20 мл стерильного физиологиче ского раствора , затем через 20 мин его сдаивали и вво дили 20 мл испытуемого препарата . Лечение животных проводили 3 дня подряд после вечерней дойки . Во время лечения побочного действия препарата ( отек вымени , повышение местной температуры , изменение характера секрета ) отмечено не было .

До лечения животных и через 10 дней от последне го введения препаратов из четвертей вымени коров в асептических условиях отбирали секрет на бактериоло гическое исследование .

В группе контрольных животных в секрете вымени излеченных четвертей вымени патогенны мастита от сутствовали , лечебный эффект составлял 100% ( табл .1). В группе опытных коров из пяти животных удалось вылечить четверых , то есть лечебный эффект испытуемого метода составил 80%. При этом в секрете всех излеченных четвертей вымени Staph. aureus также отсутствовал .

Выводы

• 1.    Больший « урожай » нативного препарата ци топлазматического антигена Staph. aureus получен при механической дезинтеграции микробных тел .

• 2.    Лечебная и санирующая эффективность ( в от ношении золотистого стафилококка ) ЦПА Staph. aureus при и субклиническом мастите лактирующих коров составили , соответственно , 80 и 100%.

• 2.    Гаврилин , А . С . Разработка ферментного пре парата для лечения больных маститом ко - ров / А . С . Гаврилин // Автореф . кандидата вет . наук .- Мо - сква .-2002.-23 с .

• 3.    Демидова , Л . Д . Ветеринарно - санитарные ас пекты борьбы с маститом коров и повышение санитар ного качества молока / Л . Д . Демидова // Автореф . док тора вет . наук .- Москва .-1997.-49 с .

• 4.    Михайлова , Н . А . Использование протектив - ных антигенов в качестве компонента ассоциированно го препарата против условно - патогенных инфекций / Н . А . Михайлова ; В . Я . Прохоров ; О . В . Кунягина // Ак туальные вопросы бактериологии и прикладной имму нологии .- Тбилиси .- 1984.- С .46-47

• 5.    Поздеев , А . В . Совершенствование технологии получения стафилококковой анатоксин - вакцины и испыта ние ее эффективности при мастите у коров / А . В . Поздеев // Автореф . кандидата вет . наук .- Курск . - 1999. - 18 с .

• 6.    Проскурин , Ю . Н . Биопрепараты при мастите коров / Ю . Н . Проскурин // Аграрная наука .-1998.- № 7.- С .31-32

• 7.    Прохоров , В . Я . Соматические антигены золо тистого стафилококка как основа создания и усовер шенствования специфических иммунопрепаратов / В . Я . Прохоров // Автореф . доктора мед . наук .- Москва .-1990.-43 с .

Таблица 1 – Терапевтическая эффективность ЦПА Staph. aureus при субклиническом мастите лактирую - щих коров

Примечание: «+» - тест положительный; «-» - тест отрицательный