Послеоперационные острые эрозии и язвы и их клинико-биохимичесий прогноз

Актуальность проблемы. Острые эрозии и язвы пищеварительного тракта обычно возникают у больных с тяжелыми заболеваниями после длительных травматичных операций, на фоне эндогенной интоксикации, сепсиса и полиорганной недостаточности (Веселовский Б. А., Уханов А.П., 1988; Успенский Ю.П., 1994; Осадчук М.А., Горемыкин В.И., Козлова И.В., 1998; Кузин Н.М., Крылов Н.Н., 1999; Ефимов Е.В., 2000; Dahlgren S., 1989; Gendre J., 1989; Hoffmann J. et al., 1989; Gesser R.M. et al., 1995).

До настоящего времени нет четко сформулированных схем лечения и профилактики острых послеоперационных эрозий и язв, не определены показания к оперативному лечению, не исследованы вопросы их заживления и регенерации слизистой оболочки (Ахунбаева Н.И., 1989; Шевченко Ю.Л. и соавт., 1998; Ратнер Г.Л. с соавт., 1999; Пиманов С.И., 2000; Богомолова Н.В. с соавт., 2001; Бигельдина Н.А., 2002; Goodwin C.S., 1988).

Клинико-биохимические методы исследования перекисного

окисления липидов, сиаловых кислот, каталазы, гликозаминогликанов и оксипролина

Забор крови у больных производили с утра, натощак. Кровь брали из вены в количестве 3 мл, самотеком, без жгута, в неё добавляли в соотношении 1:9 5% раствор цитрата натрия, предотвращающего свёртывание. Далее кровь центрифугировали при 900g в течение 5 минут, эритроцитарную массу отбрасывали. В работе использовали плазму крови.

Ход исследования. В 1 мл плазмы крови добавляли 1 мл буфера 0,025М трис-НС1 (pH 7,4). Далее осаждали белки добавлением 1 мл 17% раствора ТХУ. Образующийся осадок отделяли центрифугированием в течение 10 минут при 900 g. Надосадочную жидкость отбирали в чистые пробирки, добавляли по 1 мл 0,8% водного раствора тиобарбитуровой кислоты (ТЕК) (предварительно разогретого на водяной бане до растворения осадка). Затем пробу помещали на 10 минут в кипящую водяную баню. После развития слабо-розовой окраски пробы охлаждали до комнатной температуры и измеряли оптическую плотность, максимум поглощения - при 532 нм. Для измерения применяли кварцевые кюветы с длиной хода луча 1 см. В качестве •контрольной пробы использовали раствор буфера трис-HCl. Количество малонового диальдегида рассчитывали, используя величину молярного коэффициента экстинкции, по формуле:

С = А/1 *е, где А - оптическая плотность;

е - коэффициент молярной экстинкции;

• 1    - длина кюветы (1 см)

Метод определения активности каталазы (модификация метода М.А.Королюк, 1988). В 3 мл фосфатного буфера добавляли 10 мкл перекиси водорода (4%) и 5 мкл молибдата аммония (4%). Через 20 минут измеряли оптическую плотность при 1 =316 нм против контрольной пробы - буферного раствора. Далее в опытную и контрольную пробу вносили одинаковое количество плазмы крови (10 мкл). Затем пробы ставили в термостат при температуре 37° С. Оптическую плотность измеряли через каждые 15 минут 3-4 раза. Строили график зависимости оптической плотности от времени. Активность каталазы рассчитывали по формуле:

А = ACVo/e 3 i ; 6*l*Vi, где:

Vo - объём пробы в кювете (Vo= 3 мл буфера + 5 мкл молибдата аммония + 10 мкл Н 2 О 2 +10.МКЛ плазмы) = 3,025 мл= 3,025* 10'³л, 1 - длина хода луча кюветы (1 см),

• V] - объём сыворотки (10 мкл)

е = 22,2* 10мМ*см⁴ - коэффициент молярной экстинкции. Определение сиаловых кислот (у нифицированный резорциновый метод) (В.В. Меньшиков,1987). Принцип. При нагревании гликопротеидов плазмы с трихлоруксусной кислотой отщепляются сиаловые кислоты, которые в свою очередь гидролизуются с образованием свободной нейраминовой кислоты и уксусной кислоты. Резорцин в присутствии солей меди дает с нейраминовой кислотой синее окрашивание.

Реактивы. 1.Меди сульфат (0,1моль/л): растворяют 624 мг сульфата меди (медный купорос) в 25 мл воды. 2. Резорцин (2г/л). Резорциновый реактив готовят, растворяя 200 мг резорцина в 10 мл воды, затем добавляют 80 мл концентрированной НCl (отн. плотность 1,19) и 0,25 мл раствора сульфата меди, после смешивания общий объем доводят до 100 мл водой. Реактив годен к употреблению через 4 ч. после приготовления (при хранении в холодильнике стоек). 3. Экстрагирующий реактив: смешивают 85 мл бутилацетата и 15 мл бутилового спирта. 4.Трихлоруксусная кислота (50г/л).  5. Калибровочные растворы. Основной раствор содержит 0,5 мг кристаллической ацетилнейраминовой кислоты (мол. масса 309) в 1 мл воды. Из него готовят калибровочные растворы.

Ход определения. К 0,1 мл плазмы -приливают 1,9 мл раствора трихлоуксусной кислоты, ставят на 7 мин. на кипящую водяную баню для гидролиза, затем охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. К 0,5 мл прозрачного фильтрата добавляют 0,5 мл воды и 1 мл резорцинового реактива, закрывают стеклянными пробками и ставят на водяную кипящую баню еще на 15 мин. для расслоения фаз. Окраска переходит в верхний слой, который отсасывают и фотометрируют при длине волны 575-590 нм в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против холостого опыта, при постановке которого к 1 мл воды добавляют 1 мл резорцинового реактива. Остальные прцедуры те же, что и в основном опыте. Для построения калибровочного графика берут по 1 мл калибровочных растворов, приготовленных согласно таблице, добавляют по 1 мл резорцинового реактива и обрабатывают так же, как в основном опыте.

Расчет проводят по калибровочному графику.

Нормальные величины. В норме содержание сиаловых кислот составляет 2,02,33 ммоль/л, независимо от того, выражаются ли результаты определения в свободной нейраминовой кислоте или же в ее ацетилированной форме — сиаловых кислотах.

Определение оксипролина ( количественное определение оксипролина в моче и крови) (Л.М. Пустовалова, 1999). Оксипролин при обработке его нингидрином в фосфатном буферном растворе (pH = 7,0) при температуре 40-60° С дает красное производное, которое экстрагируется бензолом. Окрашенный бензол фотометрируют и по величене оптической плотности судят о количестве имеющегося оксипролина.

Ход работы. В круглую колбу внести 1 мл свободной от белков мочи и добавить 2 мл дистиллированной воды, 1 мл фосфатного буферного раствора и 2,5 мл бензола. Колбу укрепить на держателе и погрузить нижней частью в водяную баню с температурой 75 ± 1°С. Колбочки взбалтывать 3-5 с. и, не вынимая из водяной бани, внести в каждую из них по 2 мл нингидринового реактива. Взбалтывание в водяной бане продолжать еще 5-мин., после чего содержимое колбочки перенести в мерную пробирку с притертой пробкой. Общйй объем жидкости довести бензилом до 10 мл. Для полноты элюции содержимое пробирки тщательно встряхнуть. Бензол при этом окрасится в фиолетовый цвет. Оптическую плотность окрашенного раствора измерить в спектрофотометре Сф-4 при длинах волн 570550 ммк. Оптическую плотность вычисляем по формуле:

НО 570 = 1,46*ОД 57 о-0,592*ОД55о,где

ОДото - оптическая плотность раствора при длине волны в 570 ммк, ОД550 - оптическая плотность раствора при длине волны в 550 ммк,

Н0 57 о - оптическая плотность, характерная для оксипролина при длине волны 570 ммк.

Обнаружение гликозаминогликанов (проба с цетилтриметиламмония бромидом) (В.В.Меньшиков,2002).

Принцип. Цетилтриметиламмония бромид (ЦТАБ) с гликозаминогликанами образует в кислой среде белый осадок.

Реактивы. 1. Лимонная кислота. 2. Едкий натр. 3. Цитратный буфер, 1 ммоль/л, pH 5,7: в небольшом количестве воды растворяют 210 г лимонной кислоты, добавляют 120 г едкого натра, растворяют, охлаждают и доливают водой до 1 л . 4. Раствор ЦТАБ, 25 г в 1 л цитратного буфера. Ход обнаружения. К 5 мл мочи приливают 1 мл раствора ЦТАБ и в течение 30 мин наблюдают образование осадка. Пробу проводят при комнатной температуре. Для исследования берут свежевыпущепную мочу.