Повышение антигенной активности инактивированной вакцины против инфекционного бронхита кур из вариантного изолята

Инфекционный бронхит кур (ИБК) - высококонтагиозная болезнь, проявляющаяся поражением респираторного тракта, а также мочеполовой системы птиц [2,8]. Экономический ущерб, причиняемый ИБК, складывается из убытков от гибели и вынужденной выбраковки птицы, длительного снижения яйценоскости у кур, снижения качества инкубационных и пищевых яиц, затрат на препараты, а также за счет снижения качества мясной продукции. Возбудитель ИБК - РНК-содержащий вирус, принадлежащий к семейству Coronaviridae. К вирусу ИБК восприимчивы куры всех возрастных групп. В настоящее время заболевание широко распространено практически во всех странах с развитым птицеводством [8,11].

Вирусу ИБК свойственна высокая генетическая изменчивость в результате накопления точечных мутаций, инсерций и делеций и рекомбинации [10,12]. Возникающие вариантные штаммы вируса ИБК зачастую становятся причиной поражения птицепоголовья, вакцинированного классическими вакцинными штаммами, принадлежащими к серотипу Массачусетс, которые обеспечивают лишь частичную защиту от заражения вариантными вирусами ИБК [1,9,12] Исследования показали, что во многих странах циркулируют различные вариантные штаммы вируса ИБК [11]. Вакцинация птиц одним серотипом не гарантирует полной защиты от гетерологичных штаммов вируса ИБК, однако было показано, что использование вакцин из комбинаций классического и вариантного штаммов дает возможность обеспечить высокую защиту [6,13,18]. Многие исследователи считают наиболее эффективным применение комбинации вакцинных штаммов, относящихся к генотипам Массачусетс и

793В. Для профилактики ИБК в России и за рубежом получили распространение живые и инактивированные вакцины.

При изготовлении инактивированных вакцин широко применяются адъюванты, позволяющие значительно повышать иммуногенную и антигенную активность препаратов, а также увеличивать продолжительность иммунного ответа. Адъюванты - вещества различного происхождения и различной химической природы, оказывающие неспецифическое стимулирующее действие на иммунный ответ при совместном их применении со специфическими антигенами. Известно большое количество веществ, имеющих различный химический состав и происхождение, которые способны оказывать адъювантное действие [5, 16]. Механизм адъювантного действия во многом еще остается невыясненным. В настоящее время установлено, что адъюванты взаимодействуют с наиболее важными антигенпрезентирующими клетками (макрофагами, клетками Лангерганса, дендритными клетками) и эффекторными клетками (плазматическими клетками, естественными киллерами), Т-хелперами и клетками воспаления (полиморфно-ядерными базофилами, эозинофилами) [10, 15, 16, 17]. Анализ литературных данных показывает, что в настоящее время интенсивно проводятся исследования, направленные на разработку новых и улучшение существующих адъювантных систем.

Цель данной работы - изучение антигенных свойств инактивированной вакцины против инфекционного бронхита кур (ИБК) из вариантного изолята, изготовленной на основе комбинации масляного адъюванта (МА) и гидроокиси алюминия (ГОА).

В работе были использованы СПФ-эмбрионы кур 9 суточного срока инкубации, выделенный ранее нами изолят вариантного вируса ИБК, по анализу последовательности фрагмента гена S1 имеющий 98% гомологии со щтаммами и изолятами серотипа 793/В. Эмбрионы заражали инокуляцией вирусного материала в аллантоисную полость объемом 0,2 см3. Инкубацию инфицированных эмбрионов проводили при 37°C и относительной влажности

60-70% в течение 72 часов. Биологическую активность собранного вируссодержащего материала определяли титрованием на развивающихся СПФ-эмбрионах кур. Титр вируса рассчитывали методом Кербера в модификации Ашмарина. Титр вирусного материала составил 10^7,45 ЭИД 50/см ³.

Инактивацию вируссодержащего материала проводили теотропином (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) - конечная концентрация препарата 0,15%, время инкубации 36 часов, температура инкубации (37,0±0,5)0С. Контроль полноты инактивации осуществляли методом трех последовательных пассажей на развивающихся эмбрионах кур. Из полученного инактивированного материала изготовили два образца инактивированной эмульгированной вакцины, которые отличались между собой тем, что в водную фракцию первой вакцины добавили ГОА в конечной концентрации 0,2%, а в водную фракцию второй – объем стерильного физиологического раствора, равный объему ГОА первого образца (референс-препарат). При изготовлении образцов инактивированных вакцин эмульсию получали методом гомогенизации водного и масляного компонентов в соотношении 30:70 с помощью гомогенизатора Ultraturrax T-25. В качестве масляной фазы использовали адъювант АБ-4М отечественного производства.

Антигенную активность оценивали по титрам поствакцинальных антител к вирусу ИБК в ИФА в соответствии с инструкцией по применению набора. Для этого цыплята в количестве 60 голов были разделены на 3 группы по 20 голов в каждой. Цыплят каждой группы иммунизировали соответствующим образцом инактивированной вакцины. Дополнительно 10 голов цыплят оставили в качестве чистого контроля. Через 28 дней после вакцинации от всех цыплят брали кровь, получали сыворотки и исследовали их в ИФА на наличие антител к вирусу ИБК.

Вакцину считали антигенно активной, если титры поствакцинальных антител в ИФА к вирусу ИБК не менее, чем в 2 раза превышали минимальный положительный титр, указанный в инструкции набора BioChek (1:834) при отрицательном иммунном фоне (уровень титров антител к вирусу ИБК у цыплят контрольной группы) или не менее, чем в 2 раза превышали уровень иммунного фона. Результаты исследований образцов вакцин на антигенную

Рис. 1 Антигенная активность двух образцов инактивированной вакцины против ИБК: 1 - содержит в своем составе антиген вируса ИБК, ГОА и масляный адъювант (ИБК+МА+ГОА); 2 - содержит в своем составе антиген вируса ИБК и масляный адъювант (ИБК+МА)

Как видно из представленных данных, уровень иммунного ответа, оцениваемый по титрам антител к вирусу ИБК в ИФА, у препарата, содержащего в своем составе ГОА, выше, чем у референс-препарата -стандартной инактивированной эмульгированной вакцины против ИБК.

Таким образом, проведенные предварительные исследования показывают, что введение в водную фазу ГОА может увеличивать антигенную активность инактивированной вакцины.