Применение инновационных препаратов крови для коррекции иммунного статуса

Известно, что система кровотока эволюционировала не только как средство переноса метаболитов, но и как вездесущее циркулирующее депо наиболее жизненно важных компонентов внутренней среды организма. Только циркуляция могла обеспечить их присутствие в нужный момент, в нужной концентрации, в нужной точке. Одинаковость «претензий» на экстренность и непрерывность доставки объединила в составе циркулирующей крови высших позвоночных слагаемых самого различного назначения: гемоглобин и факторы свертывания, гормоны и факторы комплемента, альбумины и многочисленные глобулины.

Синтез молекул антител инициируется и направляется стихийными антигенными воздействиями, как правило, патогенного характера. Поэтому иммуноглобулиновая система крови каждого индивидуума феноменальна в том смысле, что представлена совершенно оригинальным набором антител, отражающих персональную антигенную историю. Это история стихийно чередующихся в онтогенезе встреч конкретного организма со стихийным по качеству и количеству разнообразием антигенов. При этом стихийные антигенные факторы одновременно строго детерминированы в экологическом отношении [3].

Лечебные препараты, полученные из крови здоровых животных, в практике ветеринарной медицины применяют для повышения резистентности животных и профилактики иммунодефицитов. Такими препаратами являются гипериммунные сыворотки, аллогенные сыворотки крови и неспецифический гамма-глобулин [10].

В лаборатории вирусологии и иммунологии ГНУ ДальЗНИВИ Россельхозакадемии на основе аллогенных иммунных сывороток с применением технологии криоконцентрирования разработан сывороточный препарат КСК [12]. В процессе криоконцентрирования данного препарата следует соблюдать условие, при котором белковая составляющая исходной сыворотки будет находиться в растворенном незамороженном состоянии, не подвергаться кристаллизации.

Концентрированная сыворотка крови (КСК) является биопрепаратом, содержащим антитела в повышенной концентрации против всех патогенов, персистирующих на территории конкретных территорий, она содержит все биологически активные вещества в высокой концентрации, содержащиеся в нормальной сыворотке крови взрослых здоровых животных.

КСК восполняет организм животных питательными веществами, энергией, макро- и микроэлементами, ферментами, витаминами, гормонами, иммуноглобулинами в повышенной концентрации, повышает активность защитно-адаптационных механизмов, напряженность колострального иммунитета, способствует становлению функций и преодолению морфофункциональной незрелости молодняка животных.

Препарат оказывает как местное, так и общее стимулирующее действие на организм, повышает устойчивость к воздействию вредных факторов, предупреждает возникновение заболеваний и благоприятно влияет на рост и развитие организма. КСК является естественной тканью организма, поэтому она легко всасывается, оказывает полезное влияние и легко выводится из организма.

КСК содержит полный набор антител к заболеваниям, регистрируемым на географической территории обитания животных, из крови которых получен данный препарат [11].

В последние годы повсеместно наблюдается резкое снижение иммунного статуса молодняка свиней. Это связано с усилением воздействия на организм животных неблагоприятных факторов внешней среды и экологического неблагополучия. Наиболее сильно страдает молодняк [2].

Кроме первичных возрастных иммунодефицитов значительную роль в снижении иммунного статуса животных играют вторичные иммунодефициты, развивающиеся у матерей в результате экстремального влияния на них различных неблагополучных факторов. Почти любая патология является следствием иммунных нарушений, и это обстоятельство требует применения иммуннокорректирующих средств, без которых быстрое и полное излечение животных невозможно. Применение иммунных препаратов должно быть направлено на устранение иммунодефицитов любой этиологии [5].

В свою очередь, иммунокоррекция должно опираться на достоверные показатели, характеризирую-щие иммунный статус организма животных. Для оценки иммунного статуса часто применяются такие показатели, как общее количество лейкоцитов и лейкоформула, количество лимфоцитов, количество иммунных белков в сыворотках крови, количество циркулирующих иммунных комплексов, бактерицидная активность сыворотки крови, фагоцитарная активность нейтрофилов и др. [7].

В совокупности перечисленные методы исследования дают представление о состоянии иммунной системы животных, но проведение исследований возможно в специализированных лабораториях, при наличии специального оборудования, в условиях производства постановка вышеописанных тестов крайне затруднительна. Поэтому нами предложен метод оценки иммунного статуса по показателю общего белка в сыворотках крови. Данный метод позволяет быстро с достаточной степенью достоверности оценить состояние иммунитета у новорожденных животных.

Применение препарата КСК и экспериментальные исследования предложенного метода оценки иммунного статуса проведены на поросятах, так как в жизни поросят раннего возраста присутствуют три основных иммунодефицитных периода. Первый связан с недостаточным или несвоевременным поступлением с молозивом защитных факторов, а также незрелостью иммунной системы молодняка в раннем онтогенезе. Второй период иммунодефицита отмечается у поросят на 15-е сутки. Он связан со снижением гуморальных факторов, полученных с молозивом матерей, а в последующем – падением всех показателей иммунного статуса, включая клеточные. А также третий иммунодефицитный период, связанный с отъемом, когда снижается активность всех факторов иммунитета [8].

Материалы и методы исследований . При плановом убое клинически здоровых, предварительно проверенных на инфекционные и кровопаразитарные болезни свиней был проведен забор цельной крови. Кровь забирали согласно существующим ветеринарно-санитарным правилам. Из цельной крови изготавливали концентрированную сыворотку крови свиней согласно СТО ДальЗНИВИ 066884427-2007.

При этом из крови получали сыворотку, смешивали ее, помещали в пластиковую емкость и концентрировали путем медленного замораживания до минус 4 и минус 6°С и оттаивания при температуре плюс 18°С. При медленном замораживании сыворотки до минус 6°С растворитель (вода) замерзает в виде крупных кристаллов, между которыми располагаются не замершие компоненты сыворотки, которые при размораживании стекают из перевернутой емкости первыми, а вода остается в емкости. При этом достигалась концентрация сыворотки крови в 2–6 раз. Затем концентрат консервировали, стерилизовали через бактериологические фильтры и расфасовывали в стерильные флаконы.

Для сравнения эффективности применения КСК поросятам были проведены следующие исследования. Для определения иммунного статуса новорожденных поросят в зависимости от уровня общего белка в сыворотке крови были сформированы по принципу аналогов две группы поросят с содержанием общего белка до 50 г/л и выше 50 г/л, у которых брали кровь и определяли следующие показатели: общий белок сыворотки крови, содержание иммуноглобулинов, фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН), бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК). Проводили наблюдение за поросятами в течение месяца. В этот период отмечали все случаи заболевания животных, количество погибших, определяли сохранность молодняка.

Для проведения эксперимента были созданы 6 групп поросят (n=20). Первая группа новорожденных поросят, которым перорально применяли КСК в дозе 5 мл/кг массы тела два раза в сутки в течение двух первых суток жизни. Вторая группа новорожденных поросят служила контролем.

Третьей группе поросят в возрасте 15-ти суток внутримышечно вводили КСК в дозе 1 мл/кг массы тела животного. Четвертая группа поросят в 15-суточном возрасте служила контролем.

Пятой группе поросят за неделю до отъема вводили КСК в дозе 1 мл/кг массы тела животного внутримышечно. Шестая группа поросят перед отъемом служила контролем.

По истечении двух недель у всех групп поросят брали кровь и определяли количество общего белка, иммуноглобулинов, фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН), бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК), сравнивали сохранность молодняка.

Общий белок в сыворотках крови определяли рефрактометрически, белковые фракции – электрофорезом в геле агарозы по методике В.М. Чекишева [9]. ФАН и БАСК определяли по методике П.Н. Смирнова [6].

Результаты и обсуждение исследований. За точку отсчета взят показатель 50 г/л общего белка в сыворотке крови, за границей которого неминуемо следует иммунодефицит. Общий белок легко определить в условиях ферм различных форм собственности, для работы необходим рефрактометр любой конструкции. Стоимость прибора невысока, поэтому его может приобрести каждый фермер. В таблице 1 представлены данные, характеризирующие зависимость иммунного статуса поросят от содержания общего белка в сыворотках крови.

Таблица 1

Зависимость иммунного статуса новорожденных поросят от уровня общего белка в сыворотке крови

Общий белок, г/л	До 50 г/л	Выше 50 г/л
Иммуноглобулины, г/л	13,2±0,50	20,1±0,40
ФАН, %	53,8±0,90	60,4±0,40
БАСК, %	26,1±0,40	31,6±0,40
Заболело животных, гол.	76	32
Погибло животных, гол.	42	13
Сохранность, %	58,00	87,00

Согласно данным новорожденные поросята, в сыворотке крови которых общего белка было больше 50 г/л, имели лучшие показатели иммунного статуса и как следствие лучшую сохранность.

В основе перорального применения сывороточных иммунных средств лежит способность кишечника новорожденных животных с молозивным типом передачи антител от матерей потомкам, к абсорбции иммунных белков без расщепления на пептиды и аминокислоты.

В молозиве свиноматок выявлен ингибитор трипсина, 1 мл молозива ингибирует 2 мг кристаллического трипсина.

В апикальной части каемчатых эпителиоцитов новорожденных поросят выявлен комплекс, состоящий из канальцев, микропузырьков и вакуолей, имеющих связь с полостью кишечника. Такие клетки новорожденных способны поглощать нерасщепленные белковые молекулы, в особенности иммуноглобулины, которые, не подвергаясь гидролизу, попадают в кровь. Каемчатый эпителий новорожденных начинает свой жизненный цикл из делящихся стволовых клеток, находящихся в эпителии основания крипт, дифференцирующихся в предшественники боковой поверхности ворсин, гибель и вычленение клеток каемчатого эпителия происходит на вершине ворсины. Установлено, что среднее время полного обновления эпителиальных клеток ворсинок у мышевидных грызунов составляет 48 ч [4].

Таким образом, новорожденные поросята появляются на свет с плодным строением эпителия тонкого отдела кишечника, имеющего сложную систему канальцев, микропузырьков и вакуолей, способных транспортировать антитела матерей в интактном состоянии в кровь. К-клетки выделяют секрет, способствующий торможению секреции пепсина и соляной кислоты, в свою очередь в молозиве содержится ингибитор трипсина. Все эти факторы вместе обеспечивают абсорбцию иммунных белков молозива, и этот процесс заканчивается через 48 ч от рождения. Поэтому пероральное применение иммунных средств, включая КСК, целесообразно проводить в первые двое суток жизни поросят.

Пероральное применение КСК новорожденным поросятам оказалось весьма эффективным, особенно в сравнении с необработанными новорожденными поросятами. Результаты выпаивания КСК свиней новорожденным поросятам отражены в таблице 2.

Согласно таблице 2, поросята, которым выпаивали КСК свиней в дозе 5 мл, два раза в сутки, в течение двух первых суток жизни, имели более высокие показатели состояния иммунитета, реже заболевали и, как следствие, имели лучшую сохранность по сравнению с контролем.

Таблица 2

Показатели иммунного статуса новорожденных поросят в результате выпаивания КСК свиней

Показатель	Опыт	Контроль
Общий белок, г/л	71,6±0,10	62,2±0,30
Иммуноглобулины, г/л	27,3±0,70	18,8±0,10
ФАН, %	60,4±0,10	50,8±0,90
БАСК, %	31,6±0,70	20,5±0,40
Сохранность до отъема, %	80,00	60,00

Поросята в 15-суточном возрасте переживают иммунодефицит, связанный с иссяканием молозивной материнской защиты и неокрепшей собственной иммунной защитой. Поэтому у них в крови наблюдается относительно пониженный уровень общего белка и иммуноглобулинов. В этот период очень важно поддержать поросят иммунными препаратами, в частности, КСК свиней. Однократная внутримышечная инъекция препарата в дозе 1 мл/кг массы тела способна восстановить показатели иммунного статуса до естественных границ нормы. Результаты парентерального применения КСК свиней поросятам в 15-суточном возрасте отражены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели иммунного статуса поросят в 15-суточном возрасте на фоне применения КСК свиней

Изучаемые показатели	Опыт	Контроль
Общий белок, г/л	57,5±0,70	53,2±0,60
Иммуноглобулины, г/л	17,7±0,40	12,7±0,30
ФАН, %	53,1±0,60	46,5±0,50
БАСК, %	28,4±0,10	21,7±0,30
Сохранность до отъема, %	100,00	80,00

Согласно таблице 3, обработанные КСК свиней поросята в 15-суточном возрасте имеют лучшие показатели иммунного статуса и, как следствие, лучшую сохранность по сравнению с контролем.

Наиболее сложный период в жизни поросят – отъем от маток, в этот период резко снижается иммунный статус отъемных поросят, повышается заболеваемость и отход отъемных животных. Поэтому перед отъемом необходимо провести комплекс мероприятий, уменьшающих напряжение отъемного периода.

Для снижения негативных последствий отъема предлагаем использовать КСК свиней в виде внутримышечной инъекции в дозе 1 мл/кг масса тела однократно, при необходимости многократно до выздоровления животного. Результаты внутримышечного применения КСК свиней отъемным поросятам отражены в таблице 4.

Таблица 4

Показатели иммунного статуса поросят-отъемышей на фоне применения КСК свиней

Показатель	Опыт	Контроль
Общий белок, г/л	67,5±0,50	62,1±0,30
Иммуноглобулины, г/л	20,6±0,20	17,2±0,40
ФАН, %	58,4±0,50	43,5±0,30
БАСК, %	46,9±0,30	32,7±0,70
Сохранность, %	100,00	93,00

Согласно данным таблицы 4, отъемные поросята, обработанные КСК свиней, имели лучшие показатели иммунного статуса по сравнению с контролем и, как следствие, лучшую сохранность.

Заключение. В жизни поросят можно выделить три наиболее опасных периода. Первый – период но-ворожденности, когда жизнь новорожденных поросят всецело зависит от качества и количества материнского молозива, второй период – возраст поросят 15 суток, когда молозивная материнская иммунная защита истощается, а своя иммунная система не может функционировать в полную силу. Третий – период отъема, когда резко снижаются все показатели иммунной защиты. В эти опасные с иммунной точки зрения периоды жизни поросят применение КСК свиней наиболее показано и эффективно.